木耳虫草胶囊对高脂血症大鼠的降血脂作用

吴　俐，沈恒胜，陈君琛，翁敏劼，李怡彬

(福建省农业科学院农业工程技术研究所，福建　福州　350003)



木耳虫草胶囊对高脂血症大鼠的降血脂作用

吴俐，沈恒胜，陈君琛*，翁敏劼，李怡彬

(福建省农业科学院农业工程技术研究所，福建福州350003)

采用高脂饮食法复制高血脂动物模型。研究木耳虫草胶囊对饮食性高脂血症大鼠的降血脂功能。动物试验设置空白对照组、高脂模型对照组、木耳虫草胶囊-低、中、高剂量处理组；木耳虫草胶囊-低、中、高3个剂量组分别灌胃27.0、54.0、81.0 mg·kg-1·d-1木耳虫草胶囊28 d，空白对照组和高脂模型对照组灌胃等体积生理盐水；观察木耳虫草胶囊对高脂血症大鼠血清、肝脏脂质代谢和小肠吸收代谢的影响。与高脂模型对照组比较，木耳虫草胶囊低剂量组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)降低，中剂量组总胆固醇(TC)降低，高剂量组TC、LDL-C、甘油三酯(TG)均显著降低 (P<0.01)，同时各处理组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)与模型对照组的HDL-C 没有差异；中、高剂量组能极显著降低动脉粥样硬化指数(AI)；各处理组的肝脏指数、肝小叶结构和脂肪变性的严重程度较模型对照组改善； 各处理组的小肠绒毛高度和隐窝深度的比值较模型组明显减小。木耳虫草胶囊具有辅助降低血脂、胆固醇、甘油三酯功能和降低动脉粥样硬化指数的作用，并可部分改善高脂饮食对肝脏的损害，降低绒毛高度和隐窝深度的比值，从而减少饲料中脂肪的吸收。

木耳；蛹虫草；高血脂动物模型；降血脂；脂肪肝

高血脂是描述人体血浆中一种或多种脂质含量提高的统称，血脂主要包括胆固醇、甘油三酯、磷脂、脂肪酸等，高血脂和动脉粥样硬化已经成为发达国家中风和心血管疾病的两大主要危险因素[1]。木耳[Auriculariaauricula(L. ex Hook) Underwood]，是一种常见食药两用胶质真菌[2]，经典防止出血、防治缺铁性贫血、降脂预防动脉粥样硬化的功能性营养食材之一，因受其原料处理复杂、烹饪难度较高、烹调方法单一等局限，长期食用木耳，会产生厌食木耳的现象，难以坚持食用[3]。国内外研究报道集中在黑木耳多糖的分离纯化[2,4-6]、结构鉴定[7]以及降脂[5-6,8 ]等生物活性的研究等方面，然而将木耳及其提取物作为功能食品基料的研究报道不多。前期研究以木耳及其提取物为主要原料，以蛹虫草为载体，开发了木耳虫草胶囊，并发现木耳虫草胶囊具有明显降低小鼠血清丙二醛(MDA)、提高超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化力(T-AOC)的优势(P<0.01)。为了进一步研究该产品的降血脂功效，通过混合型高脂血症大鼠模型，研究其对高脂血症大鼠的降血脂功效，为该功能食品的功效提供科学依据的同时方便人们长期食用。现将试验结果报道如下。

1　材料与方法

1.1材料与试剂

木耳虫草胶囊由福建省农业科学院农产品加工研究中心研制。总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒，为南京建成生物工程公司产品；其余试剂均为分析纯。

1.2仪器与设备

电子天平(Sartrius，德国)；高速冷冻离心机(Health Force Neofuge 15R，上海安亭科学仪器厂)；石蜡切片机(LEICA RM 2126，上海徕卡仪器有限公司)；数码显像摄像机(Nikon ECLIPSE E200，上海市衡浩仪器有限公司)。

1.3试验方法

1.3.1动物试验[9-10]①试验动物：健康成年雄性SD大鼠(Sprague-Dawley rats)40只，适应期结束时，体重为(200±20)g，购于福建医科大学[动物证号SCXK(闽)2012-0001]；②饲料[11]：维持饲料：玉米粉52%，大豆粉23%，麦麸l1%，面粉9%，钙盐2%，混合维生素3%。模型饲料：在维持饲料63.6%的基础上，添加20%蔗糖、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠、15%猪油，适量的酪蛋白、磷酸氢钙、石粉等。饲料均由北京华阜康生物科技股份有限公司提供；③造模方法：健康雄性SD大鼠 40只，饲喂维持饲料适应5 d后，8只喂食维持饲料作空白对照组，32只喂食模型饲料作模型组2周，每周定时称量空腹体重1次，2周后不禁食眼内眦采血，测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C，确定模型可信度；④分组及处理：空白对照组继续给予维持饲料，模型对照组及处理组继续给予模型饲料；根据TC水平将模型组分为模型对照组、木耳虫草胶囊-低、中、高剂量组，3个处理组分别灌胃27、54、81 mg·kg-1·d-1的木耳虫草胶囊(木耳虫草胶囊成人推荐量0.3 g·粒-1×6粒·d-1，按人体体重50 kg，大鼠体重300 g换算低、中、高剂量组分别为推荐量的2.5、5、7.5倍)，模型对照组和空白对照组同时给予同等体积无菌蒸馏水，灌胃期4周；定期称量体重，用于指导调整大鼠灌胃量(灌胃体积按每300 g灌喂4 mL，每周用无菌蒸馏水配制灌胃料，置于4℃)。试验结束时不禁食采血，组织采样。

1.3.2样品采集及测定方法①脏器指数(肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数)：大鼠采血后，分别摘取肝脏、脾脏、胸腺等脏器，经生理盐水淋洗、滤纸吸净后称重，按公式计算脏器指数[脏器指数 =脏器鲜重 (mg) / 体重 (g) ]；②TC、TG、LDL-C、HDL-C：造模和灌胃期结束时，分别2次从大鼠眼眶静脉丛采血(1.5 mL·只-1)；4℃，3 000 r·min-1，10 min 全血离心收集血清，置于4℃；采用南京建成生物工程公司试剂盒，按操作程序测定；按公式[12]计算动脉粥样硬化指数[AI=(TC-HDL-C) /HDL-C ]；③肝脏、小肠组织切片：沿肝右叶离边缘1 cm处，整块切取约0.5 cm 大小的肝脏组织。在十二指肠(从幽门到十二指肠结肠韧带)中部纵向截取1.0 cm的组织样(距离幽门5 cm处取1 cm长的组织)，生理盐水冲洗残余内容物，用干净的滤纸吸干。将肝脏和小肠组织样品置于10%福尔马林溶液中固定；每组取样3只。常规石蜡包埋切片(组织块在4℃下进行脱水、透明；在60℃以下进行浸蜡、包埋)，苏木素伊红染色，常规脱水，透明，中性树脂封片。数码显微摄像机(Nikon ECLIPSE E200)摄片观察肝脏病理学变化[13]。小肠切片在10×10倍光镜(数码显微摄像系统，Nikon ECLIPSE E200)进行摄片和图像分析(Images-pro plus 6.0专业图片自动分析软件)，测量小肠绒毛高度、隐窝深度[14]。每组取3个大鼠的小肠标本，每个标本选取切片1张，每张选取5个视野，每个视野分别测定10组数据，其平均值作为1个测定数据。

1.4数据处理

2　结果与分析

2.1木耳虫草胶囊对大鼠血清TC、TG、LDL-C、 HDL-C的影响

表1显示，灌胃试验开始前(高脂饲料饲喂2周后)，大鼠血清的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)比空白对照组极显著提高(P<0.01)，大鼠高脂模型构建成功。灌胃试验开始时，模型对照组和各处理组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C差异无显著(P>0.05)，灌胃4周后再将各处理组TC、TG、LDL-C、HDL-C与模型对照组的对应指标进行比较，各指标均有降低，其中，低剂量组LDL-C明显降低(P<0.01)，中剂量组TG降低(P<0.01)，高剂量组TC(下降率30.13%)、TG(下降率53.11%)、LDL-C(下降率43.68%)均极显著降低(P<0.01)，同时各剂量组HDL-C不显著低于模型对照组。

表1　木耳虫草胶囊对大鼠血清TC、TG、LDL-C、 HDL-C的影响

注： “*”表示各组与空白对照组的同一分析指标相比差异显著，“**”表示差异极显著；“#”表示各处理组与模型对照组的同一分析指标相比差异显著，“##”表示差异极显著。下同。

2.2木耳虫草胶囊对大鼠动脉粥样硬化指数(AI)的影响

表2可以看出，与空白对照组相比，模型对照组AI极显著提高；与高脂模型组相比，木耳虫草胶囊低剂量组的AI 明显降低，中、高剂量组AI极显著降低(P<0.01)，值得注意的是高剂量组AI与空白对照组的HDL-C/TC没有差异，以上结果表明木耳虫草胶囊对冠心病及动脉粥样硬化能够起到明显的预防作用。

表2　木耳虫草胶囊对大鼠动脉粥样硬化指数(AI)的影响

2.3木耳虫草胶囊对大鼠肝脏的影响

2.3.1木耳虫草胶囊对大鼠脏器指数的影响从脏器指数中可以看出(表3)，与空白对照组相比，模型对照组和木耳虫草胶囊处理组的肝脏指数极显著提高，但产品3个剂量组之间的肝脏指数与模型组的肝脏指数相比均无差异；而所有组的胸腺指数、脾脏指数均无差异。肝脏指数的结果说明了高脂大鼠模型已建立，高脂饮食对大鼠的肝脏产生明显的不良作用，但木耳虫草胶囊对肝脏因饮食摄入过量脂肪，引起的甘油三酯堆积而增重的症状没有明显改善。

表3　高脂模型大鼠脏器指数

2.3.2木耳虫草胶囊对大鼠肝细胞形态的影响从外观上看，对照组的大鼠肝脏呈深红色，有弹性，表面光滑，边缘锐利。而其他各组肝脏色泽鲜红、豆渣样，质脆有油腻感，体积明显增大，肝重增加，边缘钝圆，为脂肪肝外观[13]。高脂模型组的肝重比对照组增加39.0%，与高血脂模型组相比，处理组肝脏外观有改善，处理组的肝重比模型组降低。从HE染色切片100倍(图1)可以看出，空白对照组肝小叶中央有一条血管，肝细胞以血管为中心向周围呈放射状排列，形成肝索，细胞排列紧密(图1-A)。高脂模型对照组肝组织结构完好，可见肝小叶，肝索排列杂乱，肝细胞排列松散，细胞体积增大，胞浆疏松、浅染。(图1-B)。低剂量、中剂量、高剂量处理组肝小叶肝索排列呈放射状排列，细胞较为紧密(图1-C、D、E)，处理组的肝小叶结构和高脂模型对照组相似，但脂肪肝的严重程度(浅染面积)较模型对照组轻，其中高剂量组改善效果最明显。

2.3.3木耳虫草胶囊对大鼠肝细胞脂肪变性的影响从HE染色切片640倍(图2)可以看出，空白对照组肝细胞排列整齐、规则，细胞中央有大而圆的细胞核，细胞界限清晰，肝细胞内未见脂肪滴(脂肪滴——在制片过程中被乙醇和二甲苯溶解，形成空泡)(图2-A)。高脂模型对照组肝细胞排列杂乱，细胞胞浆出现大小不等的圆形空泡，有的空泡较大，将细胞核挤向边缘，细胞边界不清，甚至破碎(图2-B)。低剂量处理，肝细胞形态结构略有改善(图2-C)。中剂量、高剂量处理组肝细胞形态改善较为明显：细胞核位置接近中央，有细胞界限，空泡的面积明显减少(图2-D、E)。

灌胃试验前后，虽然摄入高脂饮食的大鼠体重与空白对照组大鼠的体重均未见显著差异，由于大鼠在试验开始时体重已经较大，不再处于快速成长期所致；虽然如此，高脂饮食仍然对大鼠的肝脏产生了明显的不良作用，表现为摄入高脂的大鼠肝脏指数和肝细胞损伤变性明显高于空白对照组的大鼠；摄入高脂后，处理组虽然部分缓解肝细胞的损伤变性，但对肝脏指数没有作用，表明木耳虫草胶囊虽然可以部分改善高脂对肝脏的损害，但不能根本逆转这一过程。

2.3.4木耳虫草胶囊对大鼠小肠绒毛高度和隐窝深度的影响小肠绒毛高度和隐窝深度常作为肠道形态和功能成熟性的一种测量指标。小肠绒毛高度与隐窝深度的比值(VCR)是消化吸收功能的结构基础，比值大，说明肠内膜面积较大，消化吸收能力较强，比值小，说明肠内膜变态反应大，消化吸收能力差[15]。高脂饮食组具有相同的变化趋势：VH变长，CD变浅，VCR比值变大。与模型组比，处理组降低了绒毛VCR，肠道吸收能力降低，从而减少了饲料中脂肪的吸收(表4)。已有文献报道木耳具有促进肠道蠕动，促进肠道脂肪排泄，减少脂肪吸收的功效。

注：同一列中不同小写字母者表差异显著(P<0.05)；VCR 代表绒毛高度和隐窝深度的比值。

3　讨论与结论

由于生活节奏变快，工作压力变大和运动量减少等综合因素的影响，导致人体脂质代谢紊乱，形成脂肪肝；同时血液中脂类、醇类物质逐渐增多，易与游离的矿物质离子结合形成血栓，进一步引发高血压、出血性心脑血管疾病和缺血性心脑血管疾病等，它们已位居我国突发性心脑血管疾病死亡原因的首位[16-17]。高胆固醇、高低密度脂蛋白胆固醇、高甘油三酯血症以及低高密度脂蛋白胆固醇被认为是动脉粥样硬化的主要危险因素；此外，科学合理的调整膳食结构，补充降血脂功能食品，能够纠正血脂异常，利于降低心脑血管疾病发生率[18-19]。木耳虫草胶囊具有抗氧化、降血脂功效，对高血脂、动脉粥样硬化和脂肪肝等起到一定的预防作用。

3.1木耳虫草胶囊的降血脂及抗动脉粥样硬化的作用

由于脂肪代谢紊乱使血液一种或多种脂质高于正常称为高脂血症，与动脉粥样硬化密切相关。相关研究表明，木耳多糖不仅具有显著的降血脂功能，还具有抗动脉粥样硬化的作用[2,20]。国内外文献报道显示，木耳水溶性多糖是降血脂作用的有效成分[21-22]，食用菌多糖是3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CoA)抑制剂，起到降低胆固醇合成，增加LDL受体，降低血液中低密度脂蛋白胆固醇的作用[14]。木耳多糖可能通过降低基质金属蛋白酶-13、基质金属蛋白酶-2的表达，从而抑制胶原纤维的生成，阻碍动脉粥样硬化的发生发展。该实验证实，以模型组比较，木耳虫草胶囊处理能极显著降低TC、TG、LDL-C等血清血脂指标和抗动脉粥样硬化因子，说明木耳虫草胶囊同时具有降血脂功能和抗动脉粥样硬化的作用。

3.2木耳虫草胶囊的保肝作用

肝脏是脂肪摄取、脂肪酸代谢、胆固醇、磷脂和脂蛋白合成和分泌的重要器官。正常情况下，脂类代谢在肝脏中保持动态平衡，一旦饮食摄入脂质过多，平衡被破坏，肝内脂肪的增加超过肝细胞氧化利用和合成脂蛋白运输出去的能力，使肝细胞脂肪沉积及肝细胞变性，形成脂肪肝。大量研究表明木耳多糖具有降血脂功能[2,6,8,19]，该试验也证实：以模型组比较，木耳虫草胶囊具有减轻大鼠体重和肝脏指数的趋势，能够减轻肝细胞脂肪变性、浸润，并减轻脂肪对肝小叶和细胞形态的不良影响。

木耳虫草胶囊是以木耳及其提取物为主料制作成功能食品，选用的混合型高脂血大鼠模型为保健食品辅助降血脂功能通用模型[23]，其降脂功效作用具有可判断性。依据《保健食品检验与评价规范》的要求[11]，下一步将进行辅助降血脂功能的人体试食试验，观察该产品对人体的降血脂作用。

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(责任编辑：柯文辉)

Efficacy of Muerchongcao on Reducing Serun Lipidin Hyperlipidemic Rats

WU Li, SHEN Heng-sheng, CHEN Jun-chen*, WENG Min-jie, LI Yi-bin

(InstituteofAgri-engineeringTechnology,FujianAcdemyofAgriculturalSciences,Fuzhou,Fujian350003,China)

Efficacy of Muerchongcao capsules (MC)that contained the medicinal ingredients fromAuriculariaauricular(L. ex Hook) Underwood andCordycepsmilitarismilitaris(Fr.) Linkon the serum lipid reduction in Sprague-Dawley rats with hyperlipidemia induced by a high fat diet was studied. A4-week high fat diet followed by another 4 weeks of MC treatments was the feeding program applied on the lab rats. Three levels of dosage,i.e.,27, 54, and 81 mg·kg-1·d-1of MC as low-, medium-, and high-dosegroups, respectively, were administeredby gavage to the rats. A control group without MC treatment along with a blank group fed with the basal diet and physiological saline was used simultaneously during the experiment. The serum lipid, heptic metabolism, and intestinal absorption and metabolism of the hyperlipidemic rats were monitored. The serum low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C) of the rats in the low-dose MC treatment group, the serum total cholesterol(TC) in the medium-dose group, the serum TC,LDL-C, and total triglycerides (TG) in the high-dose group were found significantly lower than those in control group(P<0.01). The high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C)in the treatment groups did not significantly differ from that in control group(P>0.05). The atherogenic index(AI) of the rats in the medium-dose and high-dose groups decreased significantly as compared to control. The liver index, hepatic lobule structure, and fatty degeneration in therats of MC treatment groups were better than those in control group, whereas, the villus:cryptratio (VCR) was significantly reduced. It appearedthat MC demonstrated a hypolipidemic and anti-atherogenic effect on the hyperlipidemic rats, as well as an ability to partially repair the liver damage induced by the high fat diet and reduce VCR inhibiting the absorption of dietary and biliary cholesterol in the small intestine of the rats.

Auriculariaauricular(L.ex Hook) Underwood;Cordycepsmilitarismilitaris(Fr.) Link;hyperlipidemic animal model; hypolipidemia; hepatic adipose infiltration

吴俐，沈恒胜，陈君琛，等.木耳虫草胶囊对高脂血症大鼠的降血脂作用[J].福建农业学报，2016，31(6)：657-662.

WU L，SHEN H-S，CHEN J-C，et al.Efficacy of Muerchongcao on Reducing Serun Lipidin Hyperlipidemic Rats[J].FujianJournalofAgriculturalSciences，2016，31(6)：657-662.

2016-04-01初稿；2016-04-25修改稿

吴俐 (1985-)，女，助理研究员，硕士，研究方向为农产品加工与动物营养(E-mail: xxj1963@163.com)

陈君琛(1959-)，男，研究员，学士，食用菌精深加工技术(E-mail: junchencc@sina.com)

农业部公益性行业(农业)科研(专项)(201303080)；福建省科技计划项目——省属公益类科研院所基本科研专项(2014R1015-9)

S 646.9

A

1008-0384(2016)06-657-06