趁鲜加工对凤丹皮的适用性研究△

王军，张雨凤，方成武，*，李静，吴计划

(1.亳州职业技术学院 药学院，安徽 亳州 236800；2.安徽省中医药科学院 亳州中医药研究所，安徽 亳州 236800；3.安徽中医药大学 药学院，安徽 合肥 230031；4.亳州市食品药品检验所，安徽 亳州 236800；5.北京同仁堂安徽中药材有限公司，安徽 铜陵 244000)

趁鲜加工对凤丹皮的适用性研究△

王军1，2，张雨凤3，方成武1，2，3*，李静4，吴计划5

(1.亳州职业技术学院 药学院，安徽 亳州 236800；2.安徽省中医药科学院 亳州中医药研究所，安徽 亳州 236800；3.安徽中医药大学 药学院，安徽 合肥 230031；4.亳州市食品药品检验所，安徽 亳州 236800；5.北京同仁堂安徽中药材有限公司，安徽 铜陵 244000)

目的比较凤丹皮趁鲜切制与晒干后软化切制两种加工方法制得的饮片中芍药苷和丹皮酚的含量，探讨牡丹皮的最佳加工方法。方法收集亳州栽培的凤丹皮根系，将根系中粗细相等的根一部分趁鲜切制，一部分晒干后软化切制。采用HPLC同时测定两种饮片中芍药苷和丹皮酚的含量。结果趁鲜切制饮片中芍药苷的含量高于晒干后软化切制的饮片，而晒干后软化切制的饮片中丹皮酚的含量高于趁鲜切制的饮片。结论丹皮采用趁鲜切制的加工方法较为适宜。

凤丹皮；加工方法；鲜切；芍药苷；丹皮酚

凤丹皮为芍药科多年生落叶小灌木凤丹PaeoniaostiiT.Hong et J.X.Zhang的干燥根皮[1]，始载于《神农本草经》，为历代常用中药之一，具有清热凉血、活血化瘀的功能[2]。凤丹在安徽、河南、山东等地区均有栽培，其中安徽铜陵的凤丹皮是传统的道地药材，而安徽亳州栽培凤丹面积近20万亩，所产凤丹皮目前在市场上流通量最大[3]。

目前多数药材在产地采收后直接干燥成药材，饮片加工厂收购后一般都要经历水洗、浸泡的过程，待药材软化后再进行切片。这一过程会使药材与水不同程度地接触，使得一些有效成分流失或发生化学变化，且药材易发霉变质。因此有研究提出，如能在产地采收后就将这类药材趁鲜切制，然后再进行干燥，对于提高中药饮片的质量、改善中药包装、减少人力、物力及能源的消耗都具有十分重要的意义[4]。

2015版《中华人民共和国药典》中收载丹皮的采收加工方法为：秋季采挖根部，除去细根和泥沙，剥取根皮，晒干或刮去粗皮，除去木心，晒干[2]。牡丹皮药材在加工成饮片前也要经历软化过程，因此有研究对趁鲜切制及软化后切制的牡丹皮中丹皮酚的含量进行比较[5]。牡丹皮中的主要活性成分包括丹皮酚和芍药苷类[6-7]，芍药苷类是牡丹皮的一大类成分，具有多种生物活性[8-9]。目前文献多以丹皮酚和芍药苷为指标来研究牡丹皮及相关制剂的质量[5，10-11]。因此，本研究选择同一根系中相同粗细的凤丹皮，一部分趁鲜切制，晒干；另一部分晒干后再进行软化切制，然后再次晒干。在相同的条件下，比较两种饮片加工方法所得的饮片中芍药苷和丹皮酚的含量，探讨凤丹皮最佳加工方法，以期在加工过程中提高凤丹皮的质量，为其加工提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪；AUW220D电子天平(SHIMADZU CORPORATION JAPAN公司)；高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)。

一级色谱甲醇(天津市四友科技有限公司)；分析甲醇(天津基准化学试剂有限公司)；水为哇哈哈纯净水；丹皮酚、芍药苷(中国食品药品检定研究院，批号分别为：110708-200506，110736-201438)。

2 样品制备

凤丹皮根系鲜品2014年10月采于安徽省亳州市十八里镇，经方成武教授鉴定为芍药科凤丹PaeoniaostiiT.Hong et J.X.Zhang的根系。将根系堆置发汗，抖净泥土。选择三株根系，编号分别为1、2、3，每一根系中，选择粗细相近的根，除去木心。每一根系中的样品，一部分参照2015版《中华人民共和国药典》中牡丹皮的炮制方法[2]，直接自然晾晒10 d，成凤丹皮药材，然后用水将干药材闷润，切成约2 mm厚度的饮片，再次自然晒5 d，即得软化切制凤丹皮样品；另一部分样品参考文献中曾出现的牡丹皮鲜切方法[5]，切成约2 mm厚度饮片，自然晾晒7 d，即为趁鲜切制凤丹皮样品。将以上两种样品打粉分别过60目筛备用。

3 方法与结果

3.1 对照品溶液的制备

精密称取芍药苷2.13 mg，置5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得芍药苷对照品溶液。精密称取丹皮酚6.58 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得丹皮酚对照品溶液。取以上两种成分的对照品溶液各1 mL，混合均匀，得混合对照品溶液。其中芍药苷和丹皮酚质量浓度分别为0.213、0.132 mg·mL-1。对照品溶液进样前用0.45 μm的微孔滤膜过滤。

3.2 供试品溶液的制备

精密称取凤丹皮粉末(过60目筛)0.5 g，加甲醇50 mL，称重，超声提取30 min，放冷，用甲醇补足失重，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即得供试品溶液。

3.3 色谱条件

Agilent HC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相甲醇(A)-水(B)梯度洗脱：0～10 min，34%A；10～12 min，34%～50%A；12～32 min，50%A；流速为1 mL·min-1；柱温为30 °C；检测波长为0～20 min，230 nm；20～32 min，274 nm。混合对照品溶液及供试品溶液的HPLC图见图1，两种物质与其他物质的分离度均大于1.5。

注：A：对照品；B：供试品；1.芍药苷；2.丹皮酚。图1 对照品溶液和供试品溶液的HPLC图

3.4 线性关系考察

精密吸取上述混合对照品溶液1、5、10、20、30 μL分别注入液相色谱仪，测得峰面积积分值。分别以进样量(X，μg)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得芍药苷回归方程：Y=1 333.1X-12.198，r=0.999 8；丹皮酚回归方程：Y=3 836.8X+34.515，r=1.000 0。结果表明，芍药苷在0.213～6.390 μg，丹皮酚在0.132～3.948 μg均呈现良好的线性关系。

3.5 精密度试验

精密吸取表2中1号根系的鲜切样品的供试品溶液10 μL，连续进样5次，测定芍药苷和丹皮酚的峰面积，并计算峰面积的RSD值，芍药苷和丹皮酚的RSD值分别为1.60%、0.67%，表明仪器精密度良好。

3.6 稳定性试验

取表2中1号根系的鲜切样品的供试品溶液，分别在0、5、10、15、20 h检测。结果芍药苷和丹皮酚的峰面积RSD值分别为1.28%、1.08%，说明供试品溶液在20 h内稳定。

3.7 重复性试验

取表2中1号根系的鲜切样品粉末5份，按照样品溶液制备方法制备，并按照上述色谱条件进样，测定芍药苷和丹皮酚的含量，RSD值分别为1.70%、1.86%，说明重复性良好。

3.8 加样回收试验

平行称取已知含量的牡丹皮粉末约0.25 g，共5份，精密称定，每份分别加入芍药苷约4 mg、丹皮酚约4 mg，按3.2项下方法制备样品溶液，再按照上述色谱条件进样测定。计算加样回收率，结果见表1。

3.9 样品测定

按3.2项下样品溶液的制备方法操作，分别制成样品溶液。准确吸取样品溶液10 μL，按照3.3项下色谱条件进样，计算各样品中芍药苷和丹皮酚的含量。样品测定结果见表2。

4 讨论

表1 加样回收率试验(n=5)

表2 不同加工方法的牡丹皮饮片中芍药苷和丹皮酚的含量(n=3)

从样品的测定结果中可以看出，软化后切制饮片中芍药苷的含量比趁鲜切制后芍药苷含量低约10%；而软化后再切制的饮片中丹皮酚的含量均远高于趁鲜切制制得的饮片，趁鲜切制的饮片中丹皮酚含量约为软化后切制的50%。

结合前人研究结果[12]以及前期研究发现，芍药苷在周皮中的积累量较多。芍药苷易溶于水，而在软化的过程中，周皮是与水的接触最多的部位。因此，经过软化后切制会使芍药苷部分流失。在产地加工时采用趁鲜切制的方法既具有省工省时的优点，又可避免芍药苷在软化过程中的流失。因此，本研究认为，牡丹皮采用趁鲜切制的加工方法较为适宜。前期实验结果推测，韧皮部中的丹皮酚含量较高。丹皮酚挥发性强[13]，稳定性较差，如果趁鲜切制后牡丹皮的韧皮部与空气长时间接触，不利于丹皮酚的保留，因此牡丹皮趁鲜切制后应选择适当的干燥方法，以减少丹皮酚的流失，如低温干燥、避光、真空包装等方法可考虑应用到牡丹皮的加工过程中。

[1] 谢宗万.中药材正名词典[M].北京：北京科学技术出版社，2012.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

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[4] 郭双庚，周超凡.中药材趁鲜切制的探讨[J].中国中药杂志，1990，15(5)：3-5.

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[6] 王祝举，唐力英，赫炎.牡丹皮的化学成分和药理作用[J].国外医药(植物药分册)，2006，21(4)：155-159.

[7] 吴少华，马云保，罗晓东，等.丹皮的化学成分研究[J].中草药，2002，33(8)：679-680.

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[11] 曾伟贤.清热凉血方中芍药苷、丹皮酚的含量测定[M].北京：北京中医药大学，2014.

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StudyonFresh-cutProcessingMethodforCortexMoutan

WANGJun1，2，ZhangYufeng3，FANGChengwu1，2，3*，LiJing4，WuJihua5

(1.BozhouVocationalandTechnicalCollege，Bozhou236800，China；2.BozhouInstituteofChinesemedicineAnhuiAcademyofChinesemedicine，Bozhou236800，China；3.SchoolofPharmacy，AnhuiuniversityofChineseMedicineHefei230031，China；4.BozhouInstituteforFoodandDrugControlBozhou236800，China；5.BeijingTongrentangTraditionalChineseMedicinalMaterialsCo.，LtdinAnhui，Tongling244000，China)

Objective：To investigate the best processing method of Cortex Moutan by comparing the content of the paeoniflorin and paeonal in the Cortex Moutan processed in fresh-cut and dried-soften cut.MethodsThe root system of the cultivated Cortex Moutan in Bozhou city were collected.Parts of the same thickness roots in the root system were processed in fresh-cut，the others were processed in dried-soften cut.Then the content of paeoniflorin and paeonal in the two samples of Cortex Moutan were determined by HPLC method.ResultThe content of the paeoniflorin in fresh-cut was higher than that in dried-soften cut piece.However the content of the paeonal in fresh-cut was lower than that in dried-soften cut piece.ConclusionThe optimal method for Cortex Moutan is fresh-cut processing.

Cortex Moutan；processing method；fresh-cut；paeoniflorin；paeonal

2015-04-11)

国家“十二五”科技支撑计划项目(2011BAI04B05)；安徽省科技平台建设项目(1206c0805005)；安徽省教育厅自然科学研究重点项目(KJ2015A388)

*

方成武，教授，研究方向：中药资源与质量；E-mail：cwfang1961@sina.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.022