浙江省鸭、鸡、鹅群感染坦布苏病毒的血清学调查与分析

李剑秋，周彩琴，余　斌，吴雪军，赵灵燕，周　蕾，张　存，徐　辉，*

(1.浙江工商大学 杭州商学院，浙江 杭州 310012; 2.浙江省动物疫病预防控制中心，浙江 杭州 311199; 3.浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所，浙江 杭州 310021)



浙江省鸭、鸡、鹅群感染坦布苏病毒的血清学调查与分析

李剑秋1，周彩琴2，余斌3，吴雪军2，赵灵燕2，周蕾2，张存3，徐辉2，*

(1.浙江工商大学 杭州商学院，浙江 杭州 310012; 2.浙江省动物疫病预防控制中心，浙江 杭州 311199; 3.浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所，浙江 杭州 310021)

为分析坦布苏病毒(TMUV)在鸭、鸡、鹅群中的感染情况，开展了血清流行病学调查。2010—2014年间，在浙江省11个地市采集鸡、鸭、鹅血清样品4 989份，采用ELISA方法检测TMUV抗体水平。结果表明：鸭、鹅、鸡的抗体阳性率分别为27.33%，6.94%，1.11%。按年度分析，在2010—2011年鸭TMUV引起的产蛋下降疫情流行期间，鸭感染群的TMUV抗体阳性率为54.83%，鹅、鸡未采样检测；2012年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为33.88%，20.00%，鸡未检测到抗体阳性群；2013年鸭、鹅、鸡TMUV感染群的抗体阳性率分别为49.68%，10.00%，28.00%；2014年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为39.19%，6.67%，鸡未检测到抗体阳性群。总体来看，鸭群在2010—2011年TMUV流行期间的抗体水平最高，表明鸭群是TMUV感染的主要禽种。

坦布苏病毒；ELISA抗体；血清流行病学调查

鸭坦布苏病是一种由坦布苏病毒(TMUV)引起的以高发病率，低死亡率为特征的产蛋急骤下降、腹泻、神经症状的鸭传染病，其产蛋率可以从产蛋高峰在2～3 d内骤降10%～30%。该病2010年首先发生于江苏、福建、浙江等沿海地区，随后逐步蔓延到全国大部分地区[1-3]。后续研究表明，TMUV还可感染鹅、鸡。潘金金等[4]利用在江苏等地分离到的病毒毒株对14日龄雏鹅进行人工攻毒试验，可引起雏鹅100%发病死亡；陈珍等[5]研究认为TMUV在鸡群中有一定的感染力度。该病2010年在浙江省暴发流行，以后几年仅呈现零星的散发病例，如何判断该病在鸭群中的流行态势，如何分析评估除鸭以外的鹅、鸡等其他种类家禽发生暴发性流行的风险成为该病防控中的一个重要课题。为此，我们开展了较为系统的全省性TMUV抗体的监测与流行病学调查分析，以期为该病防控提供科学依据。

1　材料与方法

1.1检测样品来源及种类

本研究使用的禽场血清由浙江省动物疫病预防控制中心保存，采集时间为2010年下半年至2014年期间，采样面覆盖浙江省11个地市，样品为浙江省动物疫病常规监测与流行病学调查中所采集保存的鸭、鹅、鸡血清样品，共4 989份，其中鸭血清2 935份，鸡血清1 809份，鹅血清245份。

1.2检测方法

TMUV抗体检测采用间接ELISA方法，检测试剂盒由浙江省农业科学院畜牧兽医研究所禽病组余斌等[6]研制并提供本试验使用，吸光度D450≥0.336时判定为阳性。

1.3数据分析及方法

由于2010—2011年间采集的血样均处于TMUV同一流行期内，在对数据进行年份间比较时合并计算。TMUV抗体检测数据采用统计分类方法进行分析，开展不同禽种抗体阳性率间差异显著性的卡方检验以及计算均值、中位数、分值、极值时应用了MEDCALC医学统计软件，并应用该软件制备Box-and-Whisker plot图形[7]，鸭、鹅、鸡不同年份的阳性率比较的折线图采用Excel软件完成。

2　结果与分析

2.1三种家禽TMUV感染后的抗体阳性率

4 989份鸭、鹅、鸡血清样品的检测结果表明：浙江省家禽在2010年下半年至2014年的家禽TMUV抗体的阳性率为16.82%，其中鸭的阳性率为27.33%，鹅为6.94%，鸡为1.11%。全部11个市鸭群均发现存在TMUV感染抗体阳性群，9个市的鸡群存在感染抗体，而在对8个市鹅群检测后只发现4个市的检测结果阳性。以场点为单位计算TMUV抗体的阳性率，鸭场阳性率为59.52%，鸡场为9.03%，鹅场为33.33%(图1)。

为进一步分析家禽对TMUV的易感性，以检测到1份样本以上TMUV抗体阳性的禽场作为TMUV感染禽群，统计了鸭、鸡、鹅3种家禽TMUV感染后的抗体阳性率，以此作为分析不同家禽对TMUV易感性的指标。通过对感染禽场的全部血清样品检测，鸭的TMUV抗体阳性率为44.74%，鸡阳性率为10.00%，鹅阳性率22.67%，感染鸭群的TMUV抗体阳性率明显高于鹅场和鸡场，经采用卡方检验方法两两比较鸭与鹅、鸡阳性率的差异显著性，除鸭与鹅的场点阳性率为显著差异外，其他不同禽种阳性率检验结果P值均小于0.01，差异极为显著。在2010—2011年鸭TMUV引起的产蛋下降疫情流行期间，鸭感染群的TMUV抗体阳性率为54.83%，鹅、鸡未采样检测；2012年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为33.88%，20.00%，鸡未检测到抗体阳性群；2013年鸭、鹅、鸡TMUV感染群的抗体阳性率分别为49.68%，10.00%，28.00%；2014年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为39.19%，6.67%，鸡未检测到抗体阳性群。结果表明：鸭群TMUV抗体水平最高，2012—2014年明显下降，但2013年高于2012年和2014年，鹅群趋势与鸭相同，鸭群是TMUV感染的主要禽种。结果表明：随着鸭场阳性率升高，鹅场与鸡场会相应升高，存在一定的相关性(表1)；而鸡场在2012年与2014年均未检测到TMUV阳性场，2013年虽检测到阳性场，群体阳性率普遍较低，13个阳性鸡场中有11群鸡血样中只检测到1份阳性，其中只有1个群体阳性率为70%；鸭群是TMUV感染的主要禽种(表2)。

图1　不同年份间3种家禽TMUV感染群的抗体阳性率比较Fig.1　Comparison of TMUV antibody positive rate in the three types of infected flocks

表1三种家禽TMUV感染抗体的阳性率比较

Table 1Comparison of TMUV antibody positive rate in the three types of poultry

禽种采样地市/个阳性地市/个场点数/个阳性场点数/个场点阳性率/%血清样品数/份阳性样品数/份样品阳性率/%鸭111125215059.52Aa293580227.33A鸡119144139.03C1809201.11C鹅8421733.33Ab245176.94B合计111141717040.77498983916.82

注：不同禽种阳性率差异显著性比较采用卡方检验，同列数据后无相同大写字母者表示差异极显著(P<0.01)，无相同小写字母者表示差异显著(P<0.05)。

表2来源于3类家禽的TMUV抗体ELISA检测值统计

Table 2ELISA test results of TMUV antibody in the three types of poultry

禽种样品数ELISA检测D值最高值最低值均值中位数95%值97.5%值鸭10971.7710.0700.3780.2371.4151.516鸡9500.8870.0620.1300.1170.1850.274鹅1200.7840.0990.1780.1650.4130.535

2.2三种家禽血清样品间的TMUV抗体ELISA检测值

不同家禽对TMUV的感染性也可通过感染后的抗体效价作为分析的重要指标之一。对本研究所检测的全部1 097份鸭血样、950份鸡血样和120份鹅血样的TMUV抗体ELISA检测值按禽种进行统计汇总。采用MDCALC医学统计软件制备的Box-and-Whisker plot图，可以观察到，无论是均值、检测值的离散度，均为鸭>鹅>鸡，鸭源样品检测值与其他2个禽种样品之间的差异达极显著水平(图2)。

2.3不同年份间的鸭场TMUV感染抗体监测结果比较

在不同年份鸭群中采集的血清TMUV感染抗体检测结果表明，2010—2011年在鸭TMUV流行期间，各鸭场的TMUV抗体阳性率分布范围可由0%至100%，且平均阳性率明显高于其他3个未发生大范围流行年份；同时2012—2014年3个年份之间比较，虽然总体阳性率呈逐年下降趋势，但在2012年和2013年仍出现超范围数值，表明个别场存在散发病例的可能，而2014年则表现为数据分布范围扩大，均值有所回升(图3)。

■为均值；▼为警示数值；○为超范围数值。图2　三种禽群TMUV抗体ELISA检测D (450)值的Box-and-Whisker plot图Fig.2　Box-and-Whisker plot of D (450) value in ELISA test for TMUV antibody in the three types of poultry

A，B，C，D分别为2010—2011年，2012年，2013年，2014年。 ◆为均值，•为超范围数值。图3　2010—2014年各鸭场TMUV抗体阳性率的Box-and-Whisker plot分布图Fig.3　Box-and-Whisker plot of positive rates of TMUV antibody in duck flocks from 2010 to 2014

3　结论与讨论

3种家禽TMUV抗体监测数据的统计分析结果表明：目前TMUV感染的家禽种类主要为鸭；鹅可感染，但感染后的群体阳性率仍明显低于鸭群，表明其易感性明显低于鸭；尽管陈珍等[5]认为鸡群可感染TMUV，但从本研究2012—2014年的监测结果可以发现，只有在鸭群感染率最高的年份才出现鸡群偶尔感染现象，绝大部分鸡群感染后只有个别鸡出现阳性现象，且尚未发现鸡的TMUV临床发病病例。因此，鸡群的TMUV感染是否为一过性感染，有待证实。

从鸭群流行态势分析，2010—2011年的TMUV抗体阳性率最高，应与2010年浙江省发生的疫情有关；2012—2014年阳性率均显著降低，与浙江省该病疫情态势稳定，在临床上没有出现较大范围发病流行的疫情监控结果一致；调查中还发现在2013年出现多个鸡场阳性率，鹅场阳性率与鸭场同步升高，2012年和2013年鸭场样品中出现了个别超范围检测值(outliner)和警示数值(warning marker)，表明临床上仍可能存在散发病例等异常风险，而2014年鸭群阳性率的波动范围加大，同时ELISA检测吸光度D(450)均值上升，尽管未监测到发生大范围TMUV暴发流行现象，期间数据波动现象预示着对该病的监控仍需加强，TMUV引起的疫情仍存在反弹的可能性。

血清流行病学调查结果表明，鸭群是TMUV感染的主要禽种，该病防控仍应着眼于鸭场，必须及时淘汰阳性禽群，加强生物安全措施，同时要彻底改变鸭与鹅、鸡的混养现象，防止病毒向鹅、鸡等其他禽种传播，造成新的危害。

[1]SU J L， LI S， HU X D et al.Duck egg-drop syndrome caused by BYD Virus: a new tembusu-related flavivirus[J].PLoSOne， 2011， 6(3)：1-10.

[2]TANG Y，DIAO Y，GAO X，et a1.Analysis of the complete genome ofTembusuvirus，a flavivirusisolated from ducks in China[J].Transboundary&EmergingDisease，201l， 59(4)：336-343.

[3]刘友生，彭春香，傅光华，等. 2010～2011年中国部分地区禽坦布苏病毒感染调查及分子变异分析[J]. 中国动物传染病学报，2012，20(1)：47-53.

[4]潘金金，邹晓艳，李鑫，等. 鹅源坦布苏病毒SHYG株的分离与鉴定[J]. 中国农业科学，2013，46(5)：1044-1053.

[5]陈珍，傅秋玲，施少华，等. 我国部分地区鸡感染禽坦布苏病毒血清流行病学调查[J]. 福建农业学报，2014，29(1)：1-4.

[6]余斌，华炯钢，刘跃生，等. 鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用[J]. 浙江畜牧兽医，2014 (5)：1-6.

[7]CLARKE G M. Statistics and experimental design: an introduction for biologists and biochemists[M]. 3rd edition. London: Edward Arnold， 1994: 18-19.

(责任编辑卢福庄)

Seroepidemiological investigation and analysis on duck Tembusu virus antibody level in Zhejiang Province

LI Jian-qiu1， ZHOU Cai-qin2， YU Bin3， WU Xue-jun2， ZHAO Ling-yan2， ZHOU Lei2， ZHANG Cun3， XU Hui2，*

(1.HangzhouCollegeofCommerce，ZhejiangGongshangUniversity，Hangzhou310012，China; 2.ZhejiangCenterofAnimalDiseaseControl，Hangzhou311199，China; 3.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryScience，ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Hangzhou310021，China)

In the present study， seroepidemiological investigation on duckTembusuvirus(TMUV) antibody level was carried out. A total of 4 989 sera samples were collected from duck， goose and chicken during 2010-2014 in Zhejiang Province. The TMUV antibody levels of collected samples were detected by ELISA method. It was shown that the positive rates of TMUV antibody in duck， goose and chicken samples were 27.33%， 6.94% and 1.11%， respectively. By yearly analysis， TMUV antibody positive rate was 54.83% in the infected duck flocks in 2010-2011 during epidemic period. Goose and chicken sera samples were not collected in that period. TMUV positive rates in the infected duck and goose flock were 33.88% and 20.00%， respectively， in 2012， and positive serum sample was not found in chicken flocks. TMUV positive rates in the infected duck， goose and chicken flock were 49.68%， 10.00% and 28.00%， respectively in 2013. TMUV positive rates in the infected duck and goose flock were 39.19% and 6.67%， respectively， in 2014， and no positive serum sample was found in the chicken flocks. In conclusion， the highest TMUV antibody level was found in the year of 2010-2011 during the epidemic period， and duck was the main TMUV infected poultry.

Tembusuvirus; ELISA antibody; seroepidemiological investigation

10.3969/j.issn.1004-1524.2016.04.04

2015-12-05

浙江省三农六方资助项目

李剑秋(1964—)，女，浙江杭州人，副教授，从事应用数学等研究。E-mail: lijanqiu566@163.com

，徐辉，E-mail: xuhui888@163.com

S855

A

1004-1524(2016)04-0563-04

李剑秋，周彩琴，余斌，等. 浙江省鸭、鸡、鹅群感染坦布苏病毒的血清学调查与分析[J].浙江农业学报，2016，28(4): 563-566.