HPLC法测定兽用盐酸林可霉素注射液的含量方法探讨

赵 莉，杨妮娜

（河南省洛阳市兽药饲料（动物产品）质量检验监测中心，河南　洛阳　471000）

HPLC法测定兽用盐酸林可霉素注射液的含量方法探讨

赵 莉，杨妮娜

（河南省洛阳市兽药饲料（动物产品）质量检验监测中心，河南洛阳471000）

目的：采用HPLC法测定兽用盐酸林可霉素注射液中林可霉素的含量。方法：用XBridge C18色谱柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm），以0.05 moL/L硼砂溶液（用85%磷酸溶液调节pH值至6.0）-甲醇（4∶6）为流动相，检测波长214 nm。结论：在0.473 8～3.790 0 mg/mL的浓度范围内，林可霉素线性关系良好，回归方程Y=159 000X+52 600，r2=0.999 7，精密度试验RSD为0.20%（n=6），重复性试验RSD为0.36%（n=6）。结论：本方法简便，灵敏，能有效缩短兽用盐酸林可霉素注射液中林可霉素含量的检测时间，提高工作效率。

盐酸林可霉素；HPLC；含量测定

盐酸林可霉素（Lincomycin Hydrochloride，洁霉素）为窄谱抗生素，作用与红霉素相似，对革兰阳性球菌有较好作用，临床主要用于敏感菌引起的各种感染，如肺炎、脑膜炎、心内膜炎、蜂窝织炎、扁桃体炎、丹毒，疖及泌尿系统感染等。

兽用盐酸林可霉素注射液含量测定方法常用高效液相色谱法，本文将兽用盐酸林克霉素含量测定的流动相比例调整为0.05 moL/L硼砂溶液（用85%磷酸溶液调节pH值至6.0）-甲醇（4∶6）为流动相，试样经前处理后测定，结果准确、可靠，有效节省检测时间。

1　仪器与试药

Waters e2695高效液相色谱仪配备Waters 2489紫外检测器，XBridge C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）

盐酸林可霉素对照品（中国食品药品检定研究所，含量：85.7%），批号：130432-201109

十万分之一分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），型号：XS-105DU

超声波清洗器（圣迅（上海）医疗器械有限公司），型号：YJ5120-1

甲醇（国药集团化学试剂有限公司），色谱纯

硼砂（天津市德恩化学试剂有限公司），分析纯

盐酸林可霉素注射液（湖北武当动物药业有限责任公司），批号：141216 13

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：XBridge C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）

流动相：0.05 mol/L硼砂溶液（用85%磷酸调节pH值至6.0）-甲醇（2∶3）

流速：1.0 mL/min

进样量：10 μL

柱温：30 ℃

在本文的色谱条件下，盐酸林可霉素的出峰时间是6.1 min左右。

2.2溶液的制备

2.2.1流动相的制备 准确称取硼砂19.20 g加适量纯净水，超声溶解后置1 000 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，用85%的分析纯磷酸调节pH值为6.0，用0.45 μm的微孔滤膜过滤后，以硼砂溶液：甲醇（2∶3）的比例配成流动相。

2.2.2对照品贮备溶液的制备 精密称取盐酸林可霉素对照品37.90 mg，置10 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，既得3.79 mg/mL的对照品贮备液。

2.2.3对照品溶液的制备 精密吸取对照品贮备液2.5 mL于10 mL离心管中，准确加入1.5 mL流动相，涡旋混匀后，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，既得浓度为2.316 mg/mL的对照品溶液。2.2.4供试品溶液的制备 精密吸取1.0 mL盐酸林可霉素注射液，置50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，用0.45 μm的微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液。

2.3线性范围和回归方程 精密吸取对照品贮备液0.5、0.5、1.0、2.5 mL，分别置10 mL离心管中，精密加入流动相3.5、1.5、1.0、1.5 mL，涡旋混匀，得浓度为0.473 8、0.947 5、1.895 0、2.368 8 mg/mL的对照品溶液，分别进样10 μL，记录色谱图。结果表明，在0.473 8～3.790 0 mg/mL的浓度范围内，林可霉素线性关系良好，回归方程Y=159 000X+52 600，r2=0.999 7。

2.4精密度试验 取供试品溶液，在本文色谱条件下，连续进样6针，测定林可霉素峰面积，六次检测结果的相对偏差RSD为0.20%，表明该方法精密度较好。

2.5重复性试验 取盐酸林可霉素注射液供试品6份，照2.2.4所述方法制成供试品溶液，分别进样10 μL，测定林可霉素峰面积，计算六次检测结果的含量并计算相对偏差RSD，表明该方法重复性较好，结果见表1。

表1　6份盐酸林可霉素注射液供试品含量测定结果

2.6与药典方法的比较 用兽药典规定的流动相：0.05 mol/L硼砂溶液（用85%磷酸调节pH值至5.0）-甲醇-乙腈（67∶33∶2）分别配置成对照品溶液和供试品溶液，各进样10，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，将测得的结果与本法比较，结果见表2。

表2　本法与兽药典方法的结果比较

3　讨论与小结

（1）本文所用0.05 mol/L硼砂溶液（用85%磷酸调节pH值至6.0）-甲醇（2∶3）的流动相比例，与2010版兽药典所用方法比较：出峰时间显著提前（本文所用方法6.1 min，兽药典方法21.1 min），且峰形对称性较好，峰宽明显减小。故本文能有效缩短检测时间，提高工作效率。

（2）与2010版兽药典方法比较，本试验流动相保留林可霉素化学性质稳定，且未使用毒性较大、价格较贵的乙腈；另用本法可同时处理和检测盐酸林可霉素注射液和可溶性粉，可有效降低检测成本和缩短检测时间。

［1］中国兽药典委员会，编.中华人民共和国兽药典：2010年版一部［M］.北京：中国农业出版社，2010：206-207.

（编辑：张淑凤）

R927.2

B

1006-799X（2016）14-0086-02

赵 莉（1983-），女，河南太康人，助理畜牧师，主要从事畜产品质量安全检测工作。