昆明龙胆的质量标准初步探究

赵明智+张庆芝+赵萌萌+陈钰沁

【摘要】 目的：为昆明龙胆质量标准的研究提供参考依据。方法：按照药材质量标准的要求，对昆明龙胆进行较为系统的质量标准研究。结果：对昆明龙胆的植物来源、药材性状、显微鉴别、理化鉴别及检查进行描述。结论：初步制定昆明龙胆的质量标准。

【关键词】 昆明龙胆；鉴别；检查

【中图分类号】R282.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）16-0033-05

Abstract：Objective to provide reference for the establishment of quality criterion of Gentiana Duclouxii.Franch. MethodBy According to the requirement of the quality standard of the medicinal ， has been systematically investigated the quality of Gentiana Duclouxii.Franch. Result To describe Plant origin、Medicinal properties、Microscopic identification、Physical and chemical identification、Physicalchemical identification and inspect of Gentiana Duclouxii.Franch. Conclusion preliminary formulate the quality criterion of Gentiana Duclouxii.Franch.

Keywords： Gentiana Duclouxii.Franch； Identify； Inspect

龙胆，苦，寒，归肝、胆经。具有清热燥湿，泻肝胆火的功效。用于湿热黄疸、阴痒阴肿、带下、湿热瘙痒、肝火目赤、耳鸣耳聋、胁痛口苦、惊风抽搐[1]。《中华人民共和国药典》（2015年版）收载龙胆品种为：龙胆科植物条叶龙胆Gentiana manshurica. Kitag、龙胆Gentiana scabra. Bge、三花龙胆Gentiana triflora.或坚龙胆gentiana rigescens. Franch.的干燥根及根茎[1]。条叶龙胆、龙胆和三花龙胆主要分布在东北地区，以野生为主，兼有部分栽培品供应市场。坚龙胆主要分布在云南、四川、广西、湖南及贵州等海拔在1100～3000m的山坡草地、灌木丛、林下及山谷中。由于连年采挖，资源锐减，使得寻找坚龙胆资源的研究成为必要。

昆明龙胆与坚龙胆为同属植物，为龙胆科Gentianaceae龙胆属Gentiana植物昆明龙胆Gentiana duclouxii. Franch的干燥全草，分布于滇中山区。《中华人民共和国药典》（2015年版）中规定坚龙胆含龙胆苦苷不得少于1.5%[1]。文献报道昆明龙胆不同部位龙胆苦苷含量均大于2.4%[2]。可以初步为昆明龙胆作为坚龙胆的资源提供依据。为有效开发和利用昆明龙胆这一资源，特对昆明龙胆全草进行质量标准研究，为今后昆明龙胆质量标准的制定提供详尽的科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 RM 2235轮转式切片机（德国Leica）、高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）、80i生物数码摄影显微镜（日本Nikon）、HI1220熔片炉（德国Leica）、恒温水浴锅（深圳国华仪器厂）、101A-2电热干燥箱（宁波自动化仪表厂）、KQ-3200B超声波清洗器（巩义市予华仪器有限责任公司）、HH-6数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）、CS101型电热鼓风干燥箱（重庆试验设备厂）、ZHWY-103D 恒温振荡箱（上海智城分析仪器制造有限公司）、JJ1000型精密电子天平（常熟双杰测试仪器厂）、BS224S 分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）、CS101型电热鼓风干燥箱（重庆试验设备厂）、电阻炉（上海意丰电炉有限公司）、高效液相色谱仪（Dionex Ultimate 3000 系列，USA、色谱柱：依利特惠杰型 （4.6×250mm，5μm）、薄层层析硅胶G板（青岛海洋化工厂）；

1.2 材料 龙胆苦苷对照品（批号：110770-200611，中国药品生物制品检定所）。甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。昆明龙胆见表1，由云南中医学院张庆芝教授鉴定。

2 方法与结果

2.1 植物来源 标本来源见表1，经鉴定为龙胆科植物昆明龙胆 Gentiana Duclouxii Franch.，标本存于云南中医学院标本馆。

本品为多年生草本，高3～5cm。须根肉质。主茎直立或平卧呈匍匐状，淡黄褐色，长可达8～9cm，有分枝。叶大部分基生，呈莲座状，叶片匙形或矩圆状倒披针形，先端钝圆，基部渐狭，长1～4cm，宽0.5～1.2cm，边缘微外卷，光滑，叶柄具狭翅，长1～4cm；茎生叶2～3对，与基生叶相似而略小，叶片长8～10mm，宽2.5～3mm，叶柄长1～10mm。花枝2～8个呈黄绿色，由叶腋中抽出，具1～3朵花，花簇生于枝端；无花梗；花萼呈狭倒锥形，长1～1.5cm，裂片小，呈三角形或钻形，先端急尖，弯缺圆形或截形，长1～2mm；花冠呈蔷薇色，漏斗形，冠檐具多数蓝色斑点，长3～4cm，裂片卵状三角形，长4～5mm，先端钝，全缘，褶偏斜，长1.5～2mm，边缘有整齐细齿；雄蕊不整齐，着生于冠筒下部，花丝线形，长10～14mm，花药矩圆形，长1～1.3mm，子房呈线状椭圆形，两端渐狭，长1.2～1.5cm，柄长1～1.9cm，花柱线形，长3～4mm，柱头2裂，裂片线形。蒴果，椭圆形，长1.7～2cm，柄长至2cm；种子矩圆形，淡黄色，有光泽，长约1mm，表面具蜂窝状网隙。与文献表述一致[3]。见图1。

2.2 药材性状 根据应用情况及扩大昆明龙胆应用范围，本品药用部位选用全草。通过对新平磨盘山、峨山县塔甸乡、新化光头山三个产地产昆明龙胆药材的比较，性状无明显差异。根茎多直生，呈圆柱形，呈不规则结节状，长约1～3cm，直径约0.1～0.3cm。表面暗灰棕色或棕褐色，上有残茎残留，基部可见残存麟叶，周围和下端着生多数细长的根。根呈圆柱形，细长，稍弯曲，长5～9cm，直径约0.1～0.3cm，有的外皮脱落。表面淡黄色或黄棕色，有纵皱纹及支根痕，质坚硬，易折断，断面可见白色木心。叶大部分基生，呈莲座状，叶片匙形或矩圆状倒披针形，先端钝圆，基部长渐狭，边缘微外卷，光滑，长1～4cm，宽0.5～1.2cm，中脉在上面不明显或凹下，在下面稍突起，叶柄长1～3.5cm，具狭翅；茎生叶2～3对，与基生叶相似而略小，叶片长8～10mm，宽2.5～3mm，叶柄长1～10mm。气微味苦。与文献表述一致[4]，见图2。

2.3 显微鉴别

2.3.1 根横切面 复表皮由2列细胞组成，细胞壁在角隅处增厚。皮层为3～8列细胞，细胞类圆形或切向延长成长圆形。内皮层细胞明显，类方形或长方形，每个细胞被纵向壁分割为2～5个子细胞。韧皮部较宽广，有散在的筛管群。外侧细胞较大，呈多角形，内侧细胞较小，呈类方形，韧皮部细胞排列紧密。形成层不明显。木质部排列呈环状；导管呈放射状紧密排列，内侧导管大小相近，较整齐。射线细胞1到多列不等。髓部较宽广，有众多散在的髓维管束。与文献表述一致[4] 。

2.3.2 根茎横切面 木栓层数列，外侧易脱落，可见根迹维管束。皮层为3～8列细胞，细胞类圆形或切向延长成长圆形。内皮层细胞明显，长方形或类方形，每个细胞被纵向壁分割为2～5个子细胞。维管束4个，韧皮部宽广，有散在的筛管群。韧皮部细胞排列紧密。束中形成层较明显，束间形成层不明显。导管呈放射状紧密排列，内侧导管较小，外侧导管较大，较整齐。髓部宽广，有众多散在的髓维管束。皮层韧皮薄壁细胞及髓部薄壁细胞中均含有细小的草酸钙棱晶及针晶。见图3。

2.3.3 叶横切面 上下表面呈波状。①上下表皮由1列细胞组成，外被角质层，排列较整齐。上表皮细胞较大。下表皮细胞较小，气孔少见。②栅栏组织由1～3列长栅状细胞组成，不通过主脉。海绵组织排列疏松。③主脉维管束双韧型，呈圆形。侧脉维管束8个，双韧型，左右对称，大小交替排列。与文献表述一致[4] 。

2.3.4 粉末特征 黄绿色，气味微苦。①花粉粒常见，单个或数个存在，直径3～20μm。②导管常见具缘纹孔导管及螺纹导管。具缘纹孔导管直径8～35μm，螺纹导管直径10～15μm。③内皮层细胞类方形或长形，细胞壁念珠状增厚。④韧皮薄壁细胞类圆形或类方形，细胞壁较厚，可见细胞间隙，直径40～70μm。⑤叶下表皮细胞形状不规则，细胞壁波状弯曲，气孔不等式，副卫细胞3～4个。⑥可见大量油滴，直径2～25μm。⑦叶上表皮细胞呈多角形、类圆形、类方形，直径约50～110μm。细胞壁薄，呈念珠状增厚。见图4。

2.4 理化鉴别 取不同产地、不同部位药材粉末约1g，加甲醇10mL，超声处理45min，放置室温，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，浓缩至5mL，作为供试品溶液，另取龙胆苦苷对照品5.0mg加甲醇溶解，定容至10mL，制成0.5mg/mL的标准品溶液，照《中华人民共和国药典》（2015年版四部通则0502薄层色谱法）进行试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G板薄层板上，以三氯甲烷：甲醇 （5∶1）为展开系统，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇溶液显色，在105℃加热至半点显色清晰。结果表明，供试品溶液与对照品龙胆苦苷溶液在相应位置上，显相同颜色斑点。见图5。

2.5 检查

2.5.1 水分 按照《中华人民共和国药典》（2015年版四部通则0832水分测定法第二法）测定各产地昆明龙胆药材水分含量，结果见表2。平均值为10.16%。根据测定情况结合一般养护经验，水分限量不超过12.0%。

2.5.2 总灰分及酸不溶性灰分 按照《中华人民共和国药典》（2015年版四部通则2302灰分测定法）测定各产地昆明龙胆药材总灰分（表3）及酸不溶性灰分（表4）。

由于本品产地不同，及采收时间稍有差异，灰分限量确定为不超过9.0%，酸不溶性灰分限量确定为不超过5.0%。

2.5.3 重金属检查 按照《中华人民共和国药典》（2015年版四部通则0821重金属检查法第二法）对昆明龙胆药材进行重金属检查，昆明龙胆药材五个批次供试品溶液颜色均比对照品溶液颜色浅，说明五个批次昆明龙胆药材中重金属不超过10ppm，检查结果符合规定。表明昆明龙胆重金属检查合格。

2.5.4 浸出物 按照《中华人民共和国药典》（2015年版四部通则2201浸出物测定法）测定热水浸出物结果见表5；冷水浸出物结果见表6；热醇浸出物结果见表7；冷醇浸出物结果见表8。

由于本品产地、采收时间等对药材质量有影响，适当下浮来设定限度较符合情况，因而限量确定为热水浸出物不少于24.0%；冷水浸出物不少于21.0%；热醇浸出物不少于24.0%；冷醇浸出物不少于18.0%。

4 讨论

龙胆始载于《神农本草经》，历代医书都有重要记载，传统认为，龙胆具有清热燥湿、泻肝胆火的功效，主治湿热黄疸、阴肿阴痒、带下、湿疹瘙痒、目赤、耳聋、胁痛、口苦、惊风抽搐等症。其主要成分龙胆苦苷具有抗炎[5]、镇痛[6]、保肝[7]、健胃[8]作用。另外，有文献报道，龙胆苦苷可抑制人肝癌细胞的增殖[9]、对人肺腺癌细胞株A549有一定的抑制作用[10]、能增加胆汁分泌量 [11]、具有抗菌和清除自由基作用[12]、有一定的体外抑菌效果[13]及对胃肠平滑肌有松弛作用 [14]。

昆明龙胆为龙胆科龙胆属植物，此属植物大都具有清热利湿的功效是治疗黄疸、肝炎、头痛发烧的主药，经理化鉴别及薄层色谱鉴别，均证明昆明龙胆含有龙胆苦苷成分，采用高效液相色谱法对昆明龙胆进行含量测定，结果表明昆明龙胆中龙胆苦苷的含量超过《中华人民共和国药典》（2005年版）对龙胆药材1.0%的含量限度要求[16]，可以为有效开发昆明龙胆这一资源提供依据。

参考文献

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（编辑：陶希睿）