胃腺癌CerbB-2基因蛋白表达的临床意义及与nm23蛋白相关性研究*

闵　静，许三林，戴一菲

(1.湖北职业技术学院医学院，湖北 孝感 432000；2.孝感市中心医院)



胃腺癌CerbB-2基因蛋白表达的临床意义及与nm23蛋白相关性研究*

闵静1，许三林1，戴一菲2

(1.湖北职业技术学院医学院，湖北 孝感 432000；2.孝感市中心医院)

目的 研究胃腺癌CerbB-2基因蛋白临床意义及与nm23蛋白相关性。方法 应用免疫组织化学法(IHC)对458例胃腺癌组织标本、95例正常切缘黏膜组织标本中CerbB-2、nm23基因蛋白进行测定。结果 CerbB-2基因蛋白在胃腺癌组织、正常切缘标本组织中的表达率分别为32.3%、9.5%，存在显著性差异(P<0.01)；nm23蛋白阳性率分别为34.9%、86.9%，存在显著性差异(P<0.01)；CerbB-2表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无相关性(P>0.05)，而与肿瘤的临床分期(TNM分期)、浸润深度、转移有关，存在显著性差异(P<0.01)；CerbB-2、nm23基因蛋白检测结果呈现负相关。结论 CerbB-2基因蛋白与胃腺癌的发生、发展有明显的关联，是胃腺癌生物学行为及判断预后的重要指标，并与nm23蛋白呈现负相关。

胃腺癌；CerbB-2；nm23；免疫组织化学；相关性

癌基因CerbB-2具有酪氨酸激酶活性,促进细胞有丝分裂，加速肿瘤细胞增殖，目前检测的方法一般采用免疫组化作为初筛，阳性2+以上应做FISH进一步证实。严格的标准化技术和标准化试剂在评估预后和预测中非常重要[1～3]，检测胃癌CerbB-2的表达，对指导临床，开拓治疗方法将具有很大意义。nm23基因是从小鼠黑色瘤K1735细胞系中分离发现的肿瘤转移抑制基因，nm23基因产物是17KD的蛋白，参与体内三磷酸核苷的生成，在肿瘤细胞的增殖、分化和侵袭转移中起重要作用，nm23编码的产物具有抑制肿瘤转移的功能，nm23在分化良好的肿瘤中呈高水平表达，且nm23基因表达与淋巴结转移呈负相关，与整个生存期呈正相关，因此检测胃癌nm23基因的表达高低，可以作为判断肿瘤有无转移的一个重要指标。通过对胃腺癌CerbB-2及与nm23基因蛋白检测，研究其与胃腺癌的病理特征的相关性，旨在为临床提供个体化治疗依据。

1　材料与方法

1.1一般资料观察组458例标本均取自孝感市中心医院肿瘤外科2007—2014年间的胃腺癌患者，男249例，女209例；年龄35.5～76.5岁,平均56.6岁。对照组的95例标本取自观察组距离肿瘤边缘5cm之外的非肿瘤胃黏膜组织，并切片证实。所有标本均为新鲜标本，均做常规固定处理。

1.2主要实验仪器和试剂上海成顺仪器仪表有限公司；AS LINK48，Dako公司自动免疫组化仪；切片机 SHANDON FINESSE ME+；奥林巴斯显微镜CX41；试剂cerbB-2[克隆号EP3]；nm23试剂由Dako公司提供。

1.3方法

1.3.1免疫组化方法EnVisionTM二步法：常规石蜡包埋、切片(切片厚度3μM)，65℃烤片2h，经二甲苯脱蜡以及梯度酒精水化后，用EDTA(10Mm，PH 9.0)溶液高压锅进行抗原修复，经蒸馏水及PBS冲洗，3%H2O2封闭5min，再PBS冲洗后进行免疫组化机(型号：AS LINK48，Dako 公司)上机完成免疫组化染色，最后经苏木素复染，中性树胶封片。

1.3.2免疫组化结果评定标准CerbB-2判读：标本染色无反应或≤10%的肿瘤细胞膜染色为(0)；≥10%的肿瘤细胞微弱或隐约可见膜染色，仅有部分细胞膜染色为(1+)；≥10%的肿瘤细胞有弱到中度的基底膜、侧膜或完全性膜染色为(2+)；≥10%的肿瘤细胞基底侧膜、侧膜或完全性膜强染色为(3+)。把0、(1+)视为低表达，(2+)、(3+)视为高表达。nm23的高表达以胞膜和(或)胞质出现棕黄色颗粒。

1.4统计学方法应用SPSS 17.0统计软件包进行分析，采用卡方检验，chi-square相关性分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1观察组与自身对照组CerbB-2、nm23表达情况比较458例胃腺癌标本中，观察组与自身对照组CerbB-2、nm23高表达率有统计学差异(P<0.01)，见图1(封三)，见表1。

表1　两组标本中CerbB-2、nm23高表达情况[n(%)]

与对照组比较，*P<0.01

2.2CerbB-2基因表达高表达率与胃腺癌患者临床病理的关系CerbB-2基因蛋白高表达率与患者肿瘤大小、分化程度以及患者年龄、性别无相关性(P>0.05)，而与肿瘤的TNM分期、浸润深度、转移相关(P<0.01)，见表2。

表2　CerbB-2基因表达高表达率与胃腺癌患者临床病理的关系

2.3CerbB-2、nm23基因蛋白表达相关性分析胃腺癌患者CerbB-2基因蛋白、nm23抗体表达情况结果显示，这两种基因蛋白的检测结果Kappa值为-0.4176,呈负相关。不能用一种检测指标替代另外一种检测指标，联合检测提高检出率。详见表3。

表3　CerbB-2、nm23基因蛋白表达相关性分析

3　讨　论

肿瘤浸润转移是一个复杂过程，包括瘤细胞从原发肿瘤脱落，进入细胞外基质与脉管内，直至在远端适宜组织中克隆生长，肿瘤的转移与转移基因激活或转移抑制基因失活有关，是多种转移相关基因及转移抑制相关基因综合作用的结果。CerbB-2也称Her-2/neu基因，其基因表达产物具有酪氨酸激酶活性作用[4]，正常情况下处于相对静止状态，当受到体内外各种诱因作用下，其结构和表达调控失常激活，引起细胞增殖，从而引起细胞恶性化，继而浸润转移，是较为理想的检测细胞增殖活性的抗体[5]。nm23则为一种抑癌基因，它与抑制肿瘤细胞的转移密切相关[6]。多项有价值免疫组织化学指标的联合检测能提高检出率，并有助于临床分期。本研究结果显示：CerbB-2基因的高表达率为32.5%，nm23基因蛋白的阳性率为34.9%，CerbB-2基因蛋白在胃腺癌组织都明显增高，nm23基因蛋白降低，具有明显差异性(P<0.01)，这说明CerbB-2、nm23基因蛋白与胃腺癌的生物学特征存在密切关系。所以，针对存在胃癌高危因素的人群检测具有实践意义，实验表明胃腺癌组织CerbB-2的表达具有一定程度的稳定性；其中CerbB-2与分化程度无相关性(P>0.05)可能与低分化胃癌的CerbB-2丢失有关。注意临床分期第七版有一些更新，临床分期Ⅲ期和Ⅳ期胃癌患者，CerbB-2表达率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者，浆膜浸润明显高于无浸润者，发生淋巴结转移及远处转移者明显高于无转移者(P<0.01)，提示CerbB-2基因蛋白表达高的胃癌患者预后不良。CerbB-2在胃癌中过表达预示疾病的结局更差，进展性更强。

CerbB-2、nm23基因蛋白的检测呈现负相关，存在统计学意义，但不能用一种检测指标替代另外一种检测指标，应该联合检测提高检出率，对个体化治疗和预后评估有重要意义。总之，胃腺癌CerbB-2及nm23基因蛋白与胃腺癌的病理特征的存在密切关系，其检测可以为临床的个体化治疗提供依据。

[1]韩军平.多药耐药基因产物及CerbB-2、Ki-67在胃癌中的表达及其临床病理学意义[J].现代肿瘤医学,2011,11(19):2281

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[4]李敏,陈建,蒋敏,等.胃癌组织中c-erbB-2和组织蛋白酶D表达及其与胃癌生物学行为间的关系[J].中国普外基础与临床杂志,2012，(2):108

[5]宋卫峰,金子良.AJCC第七版与第六版胃癌TNM分期比较[J].腹部外科，2013，26(4):221

[6]黄秀英,李凤玲.P-选择素、CD44v6和nm23蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义[J].诊断病理学杂志，2013,1(9):98

Expression of CerbB-2 Protein in Gastric Adenocarcinoma and Its Correlation with nm23 Protein

MIN Jing，XU San-lin,DAI Yi-fei

(SchoolofMedicine，HubeiPolytechnicInstitute,XiaoganHubei432000,China)

Objective To investigate the expression of CerbB-2 protein in gastric adenocarcinoma and its correlation with nm23 proein. Methods The expression of CerbB-2 and nm23 gene was detected by immunohistochemical method in 485 cases of gastric adenocarcinoma tissues and 95 cases of normal mucosal tissues.Results CerbB-2 oncogene protein in gastric cancer tissue and normal cutting edge tissue expression rate was 32.3%, 9.5%, there was significant difference(P<0.01)；The positive rates of nm23 protein were 34.9% and 86.9%,respectively,and there were significant differences(P<0.01).The expression of CerbB-2 in gastric adenocarcinoma tissues had no correlation with age，gender，tumor size or tumor differentiation degree of patients(P>0.05)，but which were correlated with clinical stage，infiltrating depth and shift(P<0.01).There had negative correlation between the expression of CerbB-2 protein and nm23 protein.Conclusion CerbB-2 protein can be considered as important index for determining the biological behavior of gastric adenocarcinoma.The expression of CerbB-2 protein was negative correlation with nm23 protein.

Gastric adenocarcinoma; CerbB-2;nm23;Immunohistochemistry；Correlation analysis

湖北职业技术学院院级课题(2013B07)

R735.2

A

2095-4646(2016)04-0288-03

10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.04.0288

2016-01-22)