亚硒酸钠小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验研究

李元新，刘来利，王必成，张鹏岳（甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃平凉744000）

亚硒酸钠小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验研究

李元新，刘来利，王必成，张鹏岳
（甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃平凉744000）

为评价亚硒酸钠的致突变性，进行了小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微杭试验。结果表明：当受试物终浓度为2mg／kg，1mg／kg剂量组PCE微核率与阴性对照组比较有极显著性差异（p＜0.01），结果为阳性；0.5mg／kg剂量组PCE微核率与阴性对照组比较，差异均无统计学意义（p＞0.05），为阴性结果。结论：亚硒酸钠具有一定的致突变性。

亚硒酸钠；PCE；微核

硒是人体和动物所必需的的微量元素。可用于癌症的化学预防，并且具有抗氧化和抗突变的作用，但较高浓度的硒亦有一定毒性。目前硒的遗传毒性报道较少。为了探讨亚硒酸钠的安全性，通过亚硒酸钠小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验研究，对其致突变性进行评价。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 受试药物及其对照品 亚硒酸钠，批号：940612，试验时配100g／mL、50g／mL、25g／mL亚硒酸钠药液，0.22μm滤膜滤过除菌，临用现配。复方环磷酰胺片（天津金世制药有限公司，批号：20100901）试验时配制2mg／mL（以环磷酰胺计）药液。

1.1.2 实验动物 选用SPF级NIH小鼠50只，体重25～30g，雌雄各半（由成都达硕生物科技有限公司生产，动物生产许可证号：SCXK（川）2008－24）。1.1.3 主要试剂 新生牛血清（批号：120510，成都哈里生物工程有限公司）。姬母萨染料，Sigma生产，其他试剂均为国产分析纯。

1.1.4 仪器 ACS－0.6T电子单重秤（中山市金利电子衡器公司）；XSZ－7G双目生物显微镜（重庆光电仪器有限公司），XK06－9J血球分类计数器（姜堰市新康医疗器械有限公司）；BS124S电子天平，（德国Sartorius股份有限公司出品）。

1.2 试验方法

1.2.1 小鼠骨髓细胞微核试验 根据《药物遗传毒性研究技术指导原则》规定，遗传毒性试验须进行哺乳动物体内微核试验。选用体重为25～30g的NIH小鼠50只，随机分为5组，每组10只，5组分别为：阳性对照组、阴性对照组和3个剂量受试药物试验组。阳性药物组按40.0mg／kg剂量腹腔注射环磷酰胺；试验组灌胃给予受试药物，剂量分别为2、1、0.5mg／kg，相当于LD的1／2，1／4和1／8，阴性对照组灌胃相同体积的纯化水。多次给药，每天1次，连续4d单次给药，各组在末次给药后24h后骨髓采样，取胸骨用止血钳挤出骨髓液，滴在滴有一滴新生牛血清的载玻片上混匀，制片、镜检。具体操作详见（GB15193.5－2003）。在油镜下观察2000个嗜多染红细胞，计数其中含有微核的嗜多染红细胞细胞数，计算嗜多染红细胞微核率［微核的嗜多染红细胞细胞比率＝（微核的嗜多染红细胞细胞／2000）×1 000%］；计数观察200个嗜多染红细胞同时出现的正染红细胞数，计算嗜多染红细胞和总红细胞的比例［嗜多染红细胞比例＝嗜多染红细胞／（嗜多染红细胞＋正染红细胞）］，并统计每组嗜多染红细胞和总红细胞的比例及微核的嗜多染红细胞细胞比率平均值及标准差。

1.2.2 数据统计处理方法 微核细胞率和PCE／200比值数据为计量资料，采用Excel软件计算均数和标准差，判断数据是否呈正态分布，正态分布则采用Excel中F检验进行方差齐性检验，然后选择t检验进行统计；若呈非正态分布，则进行非参数检验。

1.2.3 结果判定 各剂量组微核细胞率与阴性对照组进行比较，若有差异并有剂量－反应关系可判定为阳性结果。

2 结果

2.1 试验结果

表 亚硒酸钠啮齿动物骨髓微核试验结果（±SD）

由上表中可以看出，在亚硒酸钠啮齿动物骨髓微核试验中，小鼠给予2mg／kg，1mg／kg和0.5 mg／kg 3个受试剂量组诱导的微核发生率分别为（10.9‰），（5.6‰）和（2.3‰），其中2mg／kg，1mg／kg与阴性对照组比较有显著差异性（P＜0.01）。阳性对照组的微核发生率为（20.1‰），与阴性对照组比较，有统计学意义（P＜0.01）。各受试剂量组和阳性对照组200个红细胞中见到的嗜多染红细胞（PCE）与阴性对照组比较，均无统计学意义（P＞0.05），复核人员随机选取本次实验中每组10%样本进行重新阅片，其平均阅片误差为12.52%。

2.2 结果分析

上表结果显示2mg／kg，1mg／kg与阴性对照组比较有显著差异性（P＜0.01），为阳性结果。0.5mg／kg与阴性对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），为阴性结果。表明在本试验条件下，给予NIH小鼠亚硒酸钠浓度为2mg／kg，1mg／kg时可诱发PCE微核率增高，亚硒酸钠浓度为0.5 mg／kg时无诱导PCE微核率增高的能力。

3 讨论

小鼠骨髓细胞微核试验是传统而经典的检测染色体断裂剂、纺锤体毒物及非整倍体诱导剂的体内致突变试验，体内试验具备的吸收、分布、代谢、排泄等与人体应用更具有相关性。微核的形成是细胞受遗传毒物作用后的一种遗传学终点，微核率的增高反映了染色体损伤的遗传效应。目前微核试验已被公认为检测哺乳动物细胞遗传物质损伤和化学物质毒性快速、敏感的常规方法之一。根据微核形成的原理，药物诱发小鼠微核率的变化可以反映出所检测药物对小鼠的遗传毒性。亚硒酸钠2.0～0.5 mg／kg剂量小鼠灌胃给药一次，给药后24h处死，2 mg／kg，1mg／kg剂量具有诱发PCE微核率增高，导致染色体损伤的作用，提示在本实验条件下具有致突变性，0.5mg／kg剂量没有诱发PCE微核率增高和染色体损伤的作用。

［1］ 药物遗传毒性研究技术指导原则（第二稿）［S］.2006.

［2］ GB 15193.5－2003，骨髓细胞微核试验［S］.

［3］ 袁伯俊，廖阳明，李波.《药物毒理学实验方法与技术》［M］.北京：化学工业出版社，2007：290－294.

［4］ 孙瑞元，郑青山.数学药理学新论［M＼］.北京：人民卫生出版社，2004：39－48.

［5］ 方治平，肖逸，宋晓红，等.重组葡激酶的致突变试验［J］.四川生理科学杂志，2000，22（1）：22－26.

［6］ 王钦茂，李莉，方华武，等.中药致癌、致突变和生殖毒性研究研究概况［J］.安微中医学院学报，2001，20（5）64－67.

Study on Micronucleus Test of Polychromatics Erythrccytes in Bone Marrow of Sodium Selenium

LI Yuan－xin，LIU Lai－li，WANG Bi－cheng，ZHANG Peng－yue
（Gansu Institute of Animal Science and Veterinary，Pingliang Sansu 744000 China）

The mutagenicity of sodium selenite was evaluated by the micronucleus test of polychromatics erythrccytes in bone marrow.The results showed that at the concentration of 2mg／kg，1μg／mL dosage，the rate of micronucleus of polychromatics erythrccytes in bone marrow in treatment group was very significant different than control group（P＜0.01），which was positive.PCE micronucleus rate at 0.5mg／kg was not significant（P＞0.05）compares with control group，which was negative.In conclusion，Sodium selenite has mutagenicity to some extent.

Sodium selenite；PCE；micronucleus

S 852.651

A

1004－6704（2016）03－0020－02

2015－09－17

甘肃省科技计划资助项目，项目编号：

0805TCYL006

李元新（1971－），男，甘肃平凉人，兽医硕士，副研究员，主要从事动物代谢病研究。E－mail：lyxlyx4033＠sina.com。