不同炮制方法对火麻仁饮片中甘油三亚油酸酯的影响*

邓仕任，王春娇，夏林波，王　鑫，朱夏敏，蔡明宸

(辽宁中医药大学药学院，辽宁　大连　116600)



不同炮制方法对火麻仁饮片中甘油三亚油酸酯的影响*

邓仕任，王春娇，夏林波，王鑫，朱夏敏，蔡明宸

(辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600)

以火麻仁饮片中的甘油三亚油酸酯为指标性成分，比较不同炮制方法对甘油三亚油酸酯含量的影响。采用清炒法、微波法、烘法对三个不同产地的火麻仁饮片进行炮制，采用HPLC法测定不同炮制品及生品中甘油三亚油酸酯的含量。结果表明：火麻仁经过炮制后甘油三亚油酸酯的含量均有不同程度的升高，其中清炒法和微波法提升幅度较大，烘法次之。炮制可以提高火麻仁中甘油三亚油酸酯的含量，且以清炒法和微波法为佳。

火麻仁；炮制；甘油三亚油酸酯；含量

火麻仁药材为桑科植物大麻Cannabis sativa L.的干燥成熟果实，火麻仁饮片则需将火麻仁药材“除去杂质及果皮”[1]，即为大麻的干燥成熟种子。火麻仁主治血虚津亏，肠燥便秘等症[1]。火麻仁油脂是火麻仁饮片中的主要成分(其含量占饮片总重量的40%～50%)[2]，也是其药效成分。有研究表明，火麻仁油脂具有润滑肠壁，软化大便、轻度兴奋肠管、增加蠕动、减少大肠吸收水分的作用。火麻仁油脂是由一系列甘油三酯类化合物组合而成，其中的代表性成分即为“甘油三亚油酸酯”[3]。火麻仁在古方中的炮制方法较多，有炒法、蒸法、煅法等，而今的主流炮制方法仅有清炒法一种。本实验拟采用清炒法、微波法和烘法等三种不同的炮制方法对火麻仁饮片进行研究，以甘油三亚油酸酯含量为指标，采用非水反相色谱法测定三种不同炮制方法对甘油三亚油酸酯含量的影响，为火麻仁的炮制提供一定的依据。

1　实验材料

1.1实验药品

火麻仁饮片购于大连市阳光大药房，经辽宁中医药大学鉴定教研室翟延君教授鉴定为桑科植物大麻(Cannabis Sativa L.)的干燥成熟种子。对照品甘油三亚油酸酯,购自美国NU-CHEK公司。乙腈(色谱纯)，甲醇(分析纯)，天津大茂试剂厂；水为娃哈哈纯净水。

1.2实验仪器

岛津LC-10AT高效液相色谱仪；伊利特Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；FA1004B型电子天平,上海精密科学仪器有限公司；DFT-100型手提式高速万能粉碎机,温岭市林大机械有限公司；RE52CS型旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂；KQ2200型超声清洗器,昆山市超声仪器有限公司。

2　实验方法与结果

2.1火麻仁炮制品制备

2.1.1清炒法

取火麻仁生品饮片20 g，文火炒至火麻仁呈微黄色，有香气。

2.1.2微波法

取火麻仁生品饮片20 g，中火加热3 min至火麻仁呈微黄色，有香气。

2.1.3烘法

取火麻仁生品饮片20 g，200 ℃烘4 min至火麻仁呈微黄色，有香气。

2.2饮片及炮制品中脂肪油总量测定

取火麻仁饮片及不同炮制品10 g，粉碎过二号筛，精密称定，正己烷250 mL索氏提取3 h，滤液置水浴上减压回收至尽，精密称定，即得油脂含量。

2.3饮片及炮制品中甘油三亚油酸酯含量测定

2.3.1色谱条件

采用伊利特Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)，以乙腈-异丙醇(75:25)为流动相；流速为1 mL·min-1；检测波长为205 nm；柱温为25 ℃。

2.3.2对照品溶液的制备

取甘油三亚油酸酯对照品适量，精密称定，加乙腈-异丙醇-正己烷(2:2:1)制成每1 mL含1.0 mg的对照品储备液。将储备液稀释10倍，即得对照品溶液。

2.3.3供试品溶液的制备

取火麻仁油脂(按2.2项下方法制得)约0.1 g，精密称定，用乙腈-异丙醇-正己烷(2:2:1)定容于100 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4线性关系考察

精密吸取甘油三亚油酸酯对照品储备液，配制成浓度分别为0.025、0.05、0.10、0.20、0.40、0.50 mg/mL的系列溶液，按在2.3.1项下色谱条件进行分析。以峰面积Y对浓度X(mg/mL)绘制标准曲线，回归方程为Y=2.1×107X+125110，r2=0.9996；表明甘油三亚油酸酯在0.025～0.50 mg/mL范围内，具有良好的线性关系。

2.3.5精密度试验

取同一供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，记录各自峰面积，计算甘油三亚油酸酯峰面积的RSD为1.38%，表明本法精密度良好。

2.3.6重复性试验

取同一产地火麻仁饮片样品6份，按2.3.3项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，计算甘油三亚油酸酯含量为66.5 mg·g-1，RSD为2.09%，表明本法重复性度良好。

2.3.7稳定性试验

取同一火麻仁饮片供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h进样分析，记录各自峰面积，甘油三亚油酸酯平均峰面积为2918110，RSD 2.07%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.8加样回收率试验

取已知含量的火麻仁饮片9份，每份约10 g，精密称定。3份为一组，置具塞锥形瓶中，每组精密加入低、中、高浓度甘油三亚油酸酯对照品贮备液，按2.2及2.3.3项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，结果平均加样回收率100.6%，RSD=1.33%(n=9)。

2.3.9样品含量测定

分别称取不同来源的火麻仁饮片及不同炮制品粉末各约10 g，按2.2及2.3.3项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件进行分析，进样量5 μL，采用外标法以峰面积计算各样品中甘油三亚油酸酯的含量，结果见图1、表1所示。

图1　火麻仁饮片生品及炒品HPLC图

(mg·g-1)

3　讨　论

(1) 火麻仁是一味临床常用中药，具有润肠通便作用，主治血虚津亏，肠燥便秘等症。本课题组在2015版中国药典科研课题的资助下，研究发现，历版中国药典对于火麻仁药材及其饮片用药部位的记载是比较混乱的，时而果实，时而种子。而火麻仁的果实由果皮和种子组成，且果皮和种子的化学成分的组成和含量则存在较大的差别，因此二者不能混淆。目前我们从全国各地药房收集到的火麻仁饮片，其情况也比较复杂，大部分地区的饮片为大麻的整体果实，仅大连、沈阳等少数地区为去除果皮的种子。因此，规范火麻仁饮片的定义为目前火麻仁规范化研究的首要问题。经过文献考证及化学成分研究，我们基本认定，火麻仁药材为“桑科植物大麻……的干燥成熟果实”，而火麻仁饮片则为“桑科植物大麻……的干燥成熟种子”[4]。

(2) 关于火麻仁的研究，目前主要集中在其药材和脂肪油提取物方面，关于其饮片的研究较少。火麻仁的炮制在2010版

药典收载的为清炒法，要求“炒至微黄色，有香气”。鉴于微波炮制法和烘法具有操作过程干净且易于控制，可以避免在炒药过程中火候控制不当以及有效成分的损失等特点[5]，除了清炒法之外，还采用了微波法和烘法对火麻仁饮片进行了炮制研究。

(3) 含量测定结果表明，经三种不同的方法炮制之后，火麻仁饮片中药效成分甘油三亚油酸酯的含量均有不同程度的升高，体现出了炮制的“增效”特点。其原因可能在于火麻仁饮片经炮制后，质地更酥脆，甘油三亚油酸酯更易于煎出的缘故。同时结果还表明，在三种不同的炮制方法中，清炒法和微波法对甘油三亚油酸酯的含量提升效果较为显著，烘法次之。因此可初步认定，三种炮制方法中，以清炒法和微波法为佳。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：化学工业出版社，2010:74．

[2]朱江,蔡明宸,王鑫,等．非水反相色谱法测定火麻仁中甘油三酯含量[J].中国实验方剂学杂志，2015,21(13):53-55．

[3]李寒冰,马永洁,苗静静,等．火麻仁油对衰老模型小鼠皮肤相关指标的影响[J]．中国实验方剂学杂志，2012，18(9):201-205．

[4]蔡明宸,张北灿,鲁雅文,等．HPLC法测定不同产地火麻仁药材中胡芦巴碱的含量[J].化学工程师，2014(7):29-31．

[5]魏文龙,付娟，李文涛,等．基于UPLC方法的酒当归微波炮制工艺研究[J]．药物评价研究，2014，37(2):150-154．

Influences of Different Processing Methods on the Content of Trilinolein in the Seed of Cannabis Sativa*

DENGShi-ren,WANGChun-jiao,XIALin-bo,WANGXin,ZHUXia-min,CAIMin-chen

(College of Medicine, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Liaoniang Dalian 116600, China)

The influence of the different processing methods on the contents of trilinolein in the seed of Cannabis Sativa was compared. Stir-fired method, microwave method and bake method were used to process the seed of Cannabis Sativa from three different regions, and then an HPLC method was conducted to determine the contents of trilinolein in the seed of Cannabis Sativa prepared by three different processing methods. Results showed that the contents of trilinolein in the processed seed of Cannabis Sativa were all higher than the raw materials. Among all the three processing method, stir-fired and microwave was the best, and bake was the second one. Conclusion: The content of trilinolein in the seed of Cannabis Sativa would increase by processing. Among all the three processing method, stir-fired and microwave was better.

cannabis sativa; processing; trilinolein; content

2015年版中国药典一部科研立项(火麻仁药材及饮片)；2008年辽宁省高等学校科研项目计划(2008450)；辽宁省自然科学基金(2015020713)；全国中药饮片炮制规范(第二批)研究任务(2015-YP-24);辽宁省高等学校人才支持计划(LJQ2015070)。

邓仕任(1979-)，男，博士，副教授。

夏林波(1977-)，女，博士，副教授,研究方向为中药炮制。

R284.1

A

1001-9677(2016)03-0077-03