复方白头翁颗粒对人工感染鸡大肠杆菌病疗效试验

葛　冰，，刘　澜，李复煌，张俊儒，黄建茹，汪　明

（1.中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193；2.北京大北农集团动物保健技术研究中心，北京 怀柔 101407）

复方白头翁颗粒对人工感染鸡大肠杆菌病疗效试验

葛冰1，2，刘澜2，李复煌1，张俊儒2，黄建茹2，汪明1

（1.中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193；2.北京大北农集团动物保健技术研究中心，北京 怀柔 101407）

本试验采用人工诱发鸡大肠杆菌病的病理模型，进行复方白头翁颗粒对鸡大肠杆菌病的疗效研究。结果表明：复方白头翁颗粒高剂量组（4.0 g/L）、中剂量组（2.0 g/L）对人工诱发鸡大肠杆菌病的防治效果较好，有效率分别为83.33%、76.67%，与复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶性粉疗效相当。

复方白头翁颗粒；大肠杆菌病；白头翁皂苷B4；小檗碱

目前，防治鸡大肠杆菌病的药物大多数为抗生素及化学合成抗菌药物，但是抗生素及化学合成抗菌药物的广泛应用甚至滥用，导致大肠杆菌耐药菌株发展迅速，耐药强度不断增强，化学药物治疗效果则不断下降[1]。此外，化学药物导致动物性食品中药物残留和大量耐药菌株的产生，对人类健康构成威胁。

中药具有安全、有效、低毒、无残留等特点，可有效避免使用抗生素后产生的耐药性问题，在防治畜禽细菌病方面应用前景十分广阔。复方白头翁颗粒由经典中药“白头翁汤”改良而成，具有清热解毒、凉血、燥湿止痢的功能。本试验应用复方白头翁颗粒来治疗人工感染鸡大肠杆菌病以验证复方白头翁颗粒对鸡大肠杆菌病的防治效果，为该药的大规模生产及应用提供科学依据。

1　材料与方法

1.1试验动物1日龄海蓝褐蛋鸡240只，购自北京京密种鸡孵化场，饲养至22日龄。

1.2试验药品复方白头翁颗粒，由白头翁、黄连、黄柏、秦皮组成，每1 g颗粒相当于原生药1.95 g，批号：130705，北京大北农动物保健科技有限责任公司中试生产。10%复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶性粉，批号：20120916，北京大北农动物保健科技有限责任公司提供。

1.3菌种与培养基鸡源大肠杆菌O1型标准菌株（CVCC 249），购自中国兽医药品监察所。营养肉汤，购自北京双旋微生物培养基制品厂。

1.4大肠杆菌半数致死量（LD50）测定先将保存的鸡大肠杆菌O1型菌株接种到血琼脂平板，再挑选典型菌落接种于肉汤中，37℃培养18 h，4℃冰箱保存备用。随机选取60只20日龄试验鸡，分为6组，6个攻毒组分别为菌原液、10-1组、10-2组、10-3组、10-4组、10-5组，腹腔注射攻毒，每羽0.5mL。接种后观察各组试验鸡的精神、采食、饮水、粪便、呼吸等临床情况；对死亡鸡进行病理剖检，取脏器做细菌分离培养。观察48 h，记录死亡情况，按Reed and Muench法计算大肠杆菌半数致死量（LD50）[2]。

1.5鸡大肠杆菌病治疗试验将180只22日龄海蓝褐蛋鸡随机分为6组，每组30只。根据大肠杆菌半数致死量（LD50）测定结果确定攻毒菌液稀释浓度和剂量。除空白对照组外，每组以半数致死量腹腔注射大肠杆菌O1菌液，每羽0.5 mL。攻毒后，观察各组鸡的精神、采食、饮水、呼吸、粪便等临床表现，待出现精神委靡不振，离群呆立、腹泻、拉黄绿色稀便时开始混饮治疗。试验动物分组及给药见表1。

表1　试验鸡分组及给药

试验期间每天定时观察试验鸡只的临床症状，包括精神状况，食欲、饮水、粪便情况等。记录试验各组鸡只的发病时间、死亡数量、存活数目等情况，对死亡鸡只进行剖检，取肝脏血液进行细菌分离鉴定，确定死因，停药后继续观察5日。试验结束时将全部鸡只剖杀，统计试验各组死亡率、治愈率、有效率及相对增重率。

1.6数据分析及处理试验数据采用PASW Sta⁃tistics 18.0版分析软件进行显著性检验。

2　结果

2.1大肠杆菌半数致死量（LD50）确定根据Reed and Muench法计算大肠杆菌半数致死量LD50=10-3.6。根据试验结果，为便于菌液稀释，选用攻毒浓度为10-3稀释液，剂量为0.5 mL/羽。

2.2治疗试验结果在攻毒约4 h后，除空白对照组外，其他各试验组雏鸡陆续发病，出现不同程度的鸡大肠杆菌病的典型症状，主要表现为精神委靡不振、羽毛松乱、两翼下垂、头颈缩入、闭眼昏睡、不愿走动、呆立、不同程度的腹泻、眼结膜潮红、食欲减退，严重者食欲废绝、卧地不起等。各药物试验组雏鸡在24～48 h间死亡较多，在72～120 h期间精神开始好转，采食饮水略差，多数在第7天后基本正常。复方白头翁颗粒高、中剂量组和复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶粉组雏鸡在攻毒后也出现死亡，但死亡鸡只较少，且72 h后开始恢复，至试验结束多数鸡只精神、饮食恢复正常。阳性对照组在攻毒12 h开始出现死亡，24～48 h达到高峰，在攻毒后3～5日仍有鸡只陆续死亡，全组大部分鸡只在整个试验过程中精神不振，食欲减少，拉白色或黄绿色稀便。各药物试验组在攻毒4日后均没有再出现死亡鸡只。空白对照组在整个试验过程中精神状态、食欲饮水正常，无鸡只死亡现象。试验结果见表2。

表2　复方白头翁颗粒对鸡大肠杆菌病治疗效果

对试验鸡只死亡数和存活数进行X2检验，结果表明，复方白头翁颗粒高剂量组与阳性对照组相比较差异极显著（P<0.01），复方白头翁颗粒中剂量组、药物对照组与阳性对照组相比较差异显著（P<0.05），复方白头翁颗粒低剂量组对人工感染鸡大肠杆菌病表现了一定的治疗效果，但差异不显著（P>0.05）。复方白头翁颗粒高、中剂量有效率分别为83.33%和76.67%，治愈率分别达70.00%和66.67%，均高于复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶性粉对照组有效率73.33%和治愈率63.33%。复方白头翁颗粒低剂量组有效率和治愈率为60.00%和53.33%，不及复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶性粉对照组。

2.3复方白头翁颗粒对人工感染大肠杆菌鸡体重的影响试验期间，各组体重变化见表3，其中空白对照组与阳性对照组比较，末体重存在显著性差异（（P<0.05）。以空白对照组相对增重率为100%计算，复方白头翁颗粒高、中剂量组的相对增重率明显高于阳性对照组。

表3　复方白头翁颗粒对感染鸡体重影响

3　讨论

鸡大肠杆菌病按中兽医理论属于湿热泻痢证，湿热内侵，郁结胃肠内，胃肠受损，运化失常，湿热内生，致使肺胃热盛、血瘀气滞、湿热泄泻，治宜清热解毒，凉血，燥湿止痢[3]。“白头翁汤”正是根据这一观点进行组方，由白头翁、黄连、黄柏、秦皮四味药组成，白头翁清热解毒、凉血止痢，为君药；黄连和黄柏清热燥湿、泻火解毒，为臣药；秦皮清热解毒燥湿，为使药，诸药合用能共奏清热解毒、凉血止痢之功效。故而对大肠杆菌引起的“湿热泻痢证”具有较好的治疗作用。2010版《中国兽药典》收录该方的散剂，研究表明，该药对鸡大肠杆菌病有显著治疗作用[4-5]。

复方白头翁颗粒将白头翁汤制备成颗粒剂，采用饮水给药，这种给药方式比散剂混料方便，且颗粒剂较口服液（汤剂）质量稳定、可控。试验结果表明，复方白头翁颗粒各试验组对鸡大肠杆菌病有良好的治疗效果。其中高、中剂量治疗组的有效率分别达83.33%、76.67%，治愈率分别达70.00%和66.67%，其效果与复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶粉相当。复方白头翁颗粒低剂量组有效率和治愈率分别为60.00%和53.33%，对鸡大肠杆菌病表现出了一定的治疗效果，但疗效不及高、中剂量组和复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶粉试验组。根据本试验结果，考虑经济成本，以中剂量为推荐剂量。其具体用法用量为：鸡，混饮，2.0～4.0 g/L，连续用药5 d，用于鸡大肠杆菌病的治疗。

[1]张遂平，杨建春，邵艳华.鸡大肠杆菌分离及药敏试验研究[J].中国畜牧业，2013（2）：62-63.

[2]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2001：1748-1749.

[3]赵丽，李艳玲.鸡大肠杆菌病的中药防治[J].中国兽医杂志，2012，48（7）：84-85.

[4]张璇，仲晓宁.白头翁散不同制剂治疗鸡大肠杆菌病试验[J].家禽科学，2009（1）：31-32.

[5]中国兽药典委员会编.中华人民共和国兽药典（2010年版二部）[M].北京：中国农业出版社，2010：417-420.

Effect of CPCG on artificial infected chickenEscherichia colidisease

GE Bing1，2，LIU Lan2，LI Fu-huang1，ZHANG Jun-ru2，HUANG Jian-ru2，WANG Ming1
（1.College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China；2.DBN Group Animal Health Technology Research Center，Huairou，Beijing 101407，China）

Effect of CPCG on chicken Escherichia coli disease was tested using artificial induced pathological model of avian Escherichia colibacillosis.Results showed that there were significant prevention effect on artificial infected chicken Escherichia coli disease in high（4.0 g/L）and medium dose group（2.0 g/L）of CPCG，and the effective rates were 83.33%and 76.67%，respective⁃ly.The effect was equivalent to that of compound sulfamonomethoxine sodium soluble powder.

Compound Pulastilla chinensis granule（CPCG）；colibacillosis；Pulsatilla Saponin B4；berberine

WANG Ming

S853.7

A

0529-6005（2016）07-0111-02

2015-03-02

北京市怀柔区优秀人才培养专项经费

葛冰（1977-），男，兽医师，博士，从事兽医药理与药剂学研究，E-mail：gebing08@163.com

汪明，E-mail：vetdean@cau.edu.cn