闽北地区猪伪狂犬病抗体检测分析

马华魁　章秋月　张英超　林神通　康联波　郑新平　修金生

（1.南平市星星畜牧有限公司　福建南平　353000；2.福建农林大学动物科学学院　福州　350002）

闽北地区猪伪狂犬病抗体检测分析

马华魁1章秋月1张英超1林神通1康联波1郑新平1修金生2*

（1.南平市星星畜牧有限公司福建南平353000；2.福建农林大学动物科学学院福州350002）

为了解猪伪狂犬病在闽北地区的流行情况，整理并分析2015年度血清抗体检测数据。采用ELISA检测方法对闽北地区45个规模化猪场进行检测分析，通过检测样品血清中伪狂犬病gE抗体和gB抗体的水平进行结果判定。结果显示：送检的45个规模化猪场，伪狂犬病gE抗体阳性场达25个，猪场阳性率达55.6%；共检测1 304份血清，其中伪狂犬病gE抗体阳性213份、可疑24份、阴性1 067份，抗体阳性率达20.6%。从伪狂犬病gE抗体阴性猪场抽检猪伪狂犬gB抗体380份，gB抗体阳性258份，猪群伪狂犬病抗体保护率仅有67.9%。

猪伪狂犬病ELISAgE抗体gB抗体

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的一种急性发热性传染病，是目前影响我国养猪业生产的主要疾病之一［1］。猪是PRV感染后可以存活的唯一物种，也是PRV的贮存宿主。PRV的传染性不是太强，因为一旦感染并不是畜舍内的所有猪只都感染，动物的感染率为10%～90%，同一群体的感染率决定于动物之间直接接触的几率，在同一围栏内的感染性很高，但围栏之间的感染性比较低［2］。

猪伪狂犬病不但会感染猪使之成为原发感染宿主，又使受感染的患猪成为长期的带毒者和排毒者［3］。新生仔猪感染该病，将导致出生后1周内大量死亡，断乳仔猪表现为腹泻及神经症状，发病率和病死率高；该病在育肥猪的感染体现为隐性感染，受感染的育肥猪出现生长迟缓、饲料报酬降低的情况，最终影响猪场的生产收益［4］。感染伪狂犬病病毒的成年猪则在大多数情况下表现为潜伏感染，并且在一定条件下，呈潜伏感染的伪狂犬病病毒会在成年猪体内会重新激活并排毒。当前，规模化养殖场基本通过广泛地开展对伪狂犬病病毒的疫苗接种，该措施对于消除潜在的传染源和加快伪狂犬病病毒的净化有重要作用。当前我国养殖场中使用的疫苗大部分为伪狂犬病病毒的gE基因缺失苗［5］，由于gE基因是PRV的主要毒力基因之一，但PRV的毒力受多基因控制而gE基因又不是病毒复制增殖所必需的成分［6］。因此，对gE抗体的血清学检测将有助于进行PRV疫苗株与野毒株感染的鉴别判定。近年来，随着疫苗免疫接种策略的进一步实施和疫苗免疫覆盖率的提升，伪狂犬病的流行趋势得到控制，流行现象有所缓和，但是该病的隐性感染现象仍然在很多养殖场中普遍存在，虽然猪群的发病率和病死率已经显著降低，但仍然对猪群的生长和繁殖能力造成了严重的影响，给我国养猪业造成了极大的经济损失，严重影响养猪业的进一步发展壮大［7-9］。

猪不但是伪狂犬病病毒（PRV）的感染者和主要宿主，也是一个长期贮存伪狂犬病病毒的带毒者和排毒者，在猪伪狂犬病病毒的传播上起着重要的作用［10-13］。因此，做好血清学上的调查监测，对净化伪狂犬病病毒非常重要。本试验通过间接ELISA方法检测猪群中的gE抗体来鉴定猪群是否被伪狂犬病野毒感染，检测gB抗体来判定猪群的伪狂犬病抗体保护水平，由此系统分析闽北地区猪伪狂犬病的流行情况，为进一步开展伪狂犬病的综合防治以及伪狂犬病净化奠定基础［14-15］。

1　材料与方法

1.1样品来源被检血清样品共1 034份，采集自闽北6个地区45个规模化猪场，其中种猪群693份样品、仔猪群210份样品、育肥猪群131份样品。

1.2试剂及仪器猪伪狂犬病gE、gB抗体检测试剂盒，购自北京爱德士生物科技有限公司；Eppendof移液器、酶标仪、生化培养箱、蒸馏水或去离子水、洗板机、TGL-16G高速台式离心机。

1.3检测方法猪伪狂犬病PRV-gE和PRV-gB抗体检测操作步骤参照IDEXX试剂盒说明书进行，PRV-gB抗体检测只针对PRV-gE抗体阴性的猪。

1.4结果判定阴性对照A650的平均值减去阳性对照A650的平均值必须大于或等于0.3，试验方能有效。如果试验无效，试验操作可能有误，试验应重做。结果计算：S/N值=样品OD650/阴性对照平均OD650；当S/N≤0.6时，样品为伪狂犬病gE抗体阳性；当S/ N＞0.7时，则表明样品为伪狂犬病gE抗体阴性；若0.6＜S/N≤0.7，则为可疑样品，必须重新测定。

2　结果与分析

2.1伪狂犬病gE抗体检测情况2015年度从闽北地区45个规模化猪场抽检1 034份血清进行猪伪狂犬病野毒抗体检测，阳性数为213份，阳性率达20.6%。A地区的伪狂犬病gE抗体阳性率最高，说明该地区受伪狂犬病野毒威胁最为严重；D地区生猪饲养量相对较少，规模化场能做好生物安全措施，抽检的血清中未检测出PRV-gE抗体。种猪群抽检693份样品，PRV-gE抗体阳性 123份，阳性率17.7%；仔猪群抽检210份样品，PRV-gE抗体阳性36份，阳性率17.1%；育肥猪群抽检131份样品，PRV-gE抗体阳性54份，阳性率41.2%，不同区域伪狂犬病野毒感染情况差异较大（见表1）。

表1　闽北地区伪狂犬病gE抗体检测情况

由检测结果可以看出，闽北地区规模化猪场受伪狂犬病野毒感染较严重，育肥猪群的阳性率明显高于种猪群和仔猪群。种猪群是整个生产环节的核心，唯有逐步引进伪狂犬病gE抗体阴性的后备猪群，逐步淘汰伪狂犬病gE抗体阳性种猪，猪场才能实现伪狂犬病净化。

2.2伪狂犬病gB抗体检测情况2015年度从闽北地区伪狂犬病gE抗体阴性猪场抽检380份血清，进行猪伪狂犬病gB抗体检测，阳性数为258份，阳性率为67.9%，说明该地区猪群的伪狂犬病抗体保护率仍较低，各地区的抗体保护率差异显著（结果见表2）。

3　讨　论

猪伪狂犬病是一种高度接触性传染病，能够引起仔猪死亡和怀孕母猪流产，给养殖业带来巨大的经济损失［16］。各阶段的猪只均易感，但症状和病死率有明显的区别，乳猪最敏感，发病后呈现急性型致死过程。随着仔猪月龄增加，病程延长，症状减轻，死亡率逐渐降低。妊娠初期母猪，可于感染后20 d左右发生流产；妊娠后期的母猪，胎儿可死于子宫内，引起死产和流产，死产的发生率可达50%左右［17-18］。从猪的流行病学和临床症状可对猪伪狂犬病作出初步诊断，目前最常用ELSIA检测方法，可以检测PRV-gE抗体，并区分野毒与疫苗毒［19-21］。

表2　闽北地区伪狂犬gB抗体抽检情况

PRV-gE抗体检测结果表明，闽北地区猪群受伪狂犬病野毒感染较严重，且种猪群的阳性率较高，不同区域间差异较大。对于感染伪狂犬病野毒的种猪，一般要全部清群或及时淘汰。如果检测为阳性、经济价值较高的种猪，可以考虑不直接淘汰，通过合理的疫苗免疫、做好生物安全措施来减少阳性动物排毒和提高易感动物感染阈值，并逐渐引进阴性后备猪更替阳性种猪。对PRV-gE阳性的猪场，建议母猪群一年用gE基因缺失弱毒苗普免3～4次，同时在产前30～40 d用伪狂犬病gE缺失灭活苗加强免疫1次；其次，尽量加速淘汰高胎次或有任何瑕疵、缺陷的母猪，建立和更新伪狂犬病阴性后备母猪群，公猪群全部检测，及时淘汰PRV-gE阳性公猪；对商品猪实施 “1日龄滴鼻，70日龄二免，120日龄三免”，同时认真做好灭鼠、灭蚊蝇、消毒等生物安全工作。

PRV-gB抗体抽检结果表明，当前闽北地区健康猪群伪狂犬病抗体保护率仅有67.9%，区域间差异显著。造成以上情况的原因，除了流行毒株与现有疫苗抗原表位发生变异以外，可能与猪群的健康度、免疫程序是否合理、母源抗体干扰、疫苗质量等有一定关联。建议生猪饲养场做好生物安全工作，一年进行4次规范操作注射，定期监测种猪群伪狂犬病gE抗体和gB抗体情况，及时淘汰伪狂犬病带毒种猪，同时结合使用伪狂犬病gE基因缺失弱毒苗和灭活苗，充分激活猪只的细胞免疫和体液免疫，使猪群获得较高的抗体保护率。

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Analysis of antibody detection of porcine pseudorabies virus in northern Fujian

Ma Huakui1Zhang Qiuyue1Zhang Yingchao1Lin Shentong1Kang Lianbo1Zheng Xinping1Xiu Jinsheng2*
（1.Nanping Xingxing Animal Husbandry Co.，Ltd.，Nanping，Fujian 353000；2.College of Animal Science，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou 350002）

To understand the prevalence of the PR in northern Fujian，the data of the serum antibody of the PR in 2015 was analyzed. The antibody of the gE and gB in serum samples which were from 45 farms in northern Fujian were detected with ELISA.The result showed that the number of the positive of the gE antibody was 25 in 45 farms and the positive rate was 55.6%.From 1 304 serum samples，the number of the positive of gE antibody was 213，and 24 samples were suspicious，and 1 067 samples were negative.The gB antibody detected from 380 gE negative samples，The result showed that the number of the positive of the gB antibody was 258 and the percent of the protection was only 67.9%.

Pseudorabies ELISA gEantibody gB antibody

A

1003-4331（2016）04-0012-03

福建省农业科学技术项目（2014-01）、福建省自然科学基金项目（2013J05042）资助。

马华魁（1988-），男，硕士生。
*

修金生（1957-），男，教授，硕士生导师，从事猪病防治和生态养 猪的研究 。E-mail：xiujinsheng@163.com。