猪链球菌的分离鉴定和药敏试验

王　刚，孙　磊，李祥林，孙　勇（.龙口市畜牧兽医工作站，山东 龙口 6570；.龙口市畜牧管理办公室，山东 龙口 6570；.龙口市下丁家镇畜牧兽医工作站，山东 龙口 6579）

猪链球菌的分离鉴定和药敏试验

王刚1，孙磊2，李祥林3，孙勇1
（1.龙口市畜牧兽医工作站，山东 龙口 265701；2.龙口市畜牧管理办公室，山东 龙口 265701；3.龙口市下丁家镇畜牧兽医工作站，山东 龙口 265719）

本文对来自龙口市不同乡镇的疑似猪链球菌病的病料进行采集，对细菌进行分离培养，运用生化试验和血清学两种方法对分离出的细菌进行鉴定，并对鉴定出来的链球菌进行药敏试验。试验结果表明其形态、染色、培养及生化特性均符合链球菌的特征。该分离菌株对氨苄西林、头孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感，对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感，对红霉素、青霉素低度敏感，而对土霉素、四环素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。由此可见，分离出的链球菌对不同药物的敏感性存在显著差异。本文通过对疑似猪链球菌病的病料进行分离和研究鉴定，旨在了解生猪中猪链球菌的分布情况和现状，为防控该病提供理论依据。

猪链球菌；分离鉴定；药敏试验

猪链球菌病是一种人畜共患的急性、热性传染病，是由C、D、E及L群链球菌引起的猪的多种疾病的总称［1］，特征主要表现：急性病例常为败血症和脑膜炎；慢性病例则为关节炎、心内膜炎及组织化脓性炎等。本病呈世界性分布，国外多以R群的猪链球菌2型和S群的猪链球菌I型为主［2］，而国内则以C群兽疫链球菌为主［3］。近几年随着养猪业集约化程度的不断提高，猪链球菌病发生呈明显上升趋势，且常与猪繁殖障碍及呼吸道综合症、猪附红细胞体病、非典型猪瘟、猪圆环病毒病混合感染［4］，一旦发生发病率和死亡率均较高，给养猪业与人类的健康造成很大的威胁。由于链球菌血清型众多，抗原结构复杂，且链球菌易产生耐药性，给防治带来困难，所以该病一直是困扰养猪业的主要传染病。虽然理论上有很多药物能治疗猪链球菌病，但随着抗菌药物的广泛使用以及临床中不合理用药，使得病原菌的耐药现象日趋严重。

1　材料与方法

1.1试验材料

1.1.1病料采自龙口地区疑似猪链球菌发病的仔猪淋巴结、肺、脾、扁桃体等病变组织。

1.1.2试验试剂绵羊血琼脂平板、绵羊血琼脂斜面、普通琼脂培养基、营养肉汤等均按兽医微生物实验指导方法制备，4℃冰箱保存备用；细菌微量发酵管为杭州天和微生物试剂有限公司生产；猪链球菌A-G乳胶诊断试剂盒由OXDD公司生产；C55938购自中国兽医药品监察所。

1.2试验方法

1.2.1细菌分离采用无菌法将采集的疑似链球菌病发病的仔猪淋巴结、肺、脾、扁桃体等病变组织，划线接种于含有5%绵羊血的琼脂平板、巧克力培养基和营养琼脂平板中，37℃培养24 h，观察细菌生长特性。挑取平板上的单个菌落作纯培养。用24 h鲜血平板和肉汤的培养物，分别作革兰氏染色，观察其形态和染色特性。

1.2.2生化试验将分离菌株分别接种于乳糖、麦芽糖、蔗糖、菊糖、葡萄糖、棉实糖、甘露醇、杨苷等微量生化反应管中，同时做M-R试验和V-P试验，37℃培养24 h后，观察其生化反应特性。

1.2.3血清型鉴定取分离的18 h血液平板培养物，分别与兰氏分群A-G群混合阳性抗原对照和参考株对照。

1.2.4药敏试验采用纸片扩散法。37℃培养24 h后，观察、测定抑菌圈的直径。判定猪链球菌对药敏纸片的敏感性标准：抑菌环直径在15 mm以上为高度敏感；10～15 mm为中度敏感；10 mm以下为低度敏感；无抑菌环为不敏感。

2　结果与分析

2.1培养结果

分离菌在绵羊血琼脂平板上菌落直径为0.5～1.0 mm、灰白色、半透明、表面光滑、圆形、边缘整齐，呈β溶血。挑取单个菌落，革兰氏染色镜检，为革兰氏阳性球菌，单个或成对，少数呈3～5个短链排列。

2.2生化试验结果

生化反应结果均符合猪链球菌的生化特性，结果见表1。“+”表示大多数菌株为阳性，“－”表示大多数菌株为阴性

表1分离菌生化试验结果

2.3血清学试验

分离菌经链球菌A-G乳胶分型诊断试剂盒鉴定，结果为C群链球菌2株，D群链球菌1株，E群链球菌3株。

2.4药敏试验结果

对分离培养获得的纯培养物进行药敏试验，该分离菌株对氨苄西林、头孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感，对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感，对红霉素、青霉素低度敏感，而对土霉素、四环素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。

3　结论与讨论

从采集的疑似链球菌病的猪病料中分离到6株细菌，根据培养特性、染色特点、形态观察、生化试验鉴定为猪链球菌，通过血清学试验，表明该地区链球菌病是由C、D和E群链球菌引起的，说明感染链球菌病原的复杂性。链球菌的分群鉴定方法很多，主要有生化试验和血清学试验。由于链球菌的生化指标差异较大，以形态、培养和生化等表型特性难以将分离的菌株准确归类，应该采用血清学方法进行鉴定［5］。

本次药敏试验结果表明，该分离菌株对氨苄西林、头孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感，对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感，对红霉素、青霉素低度敏感，而对土霉素、四环素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。该菌株存在多重耐药性。

由于各地用药习惯以及近年来抗生素的滥用，产生了大量的耐药菌株，为疾病的后续治疗产生了很大的影响，也使得疾病更加难以控制。因此，建议临床用药前，有条件的先进行菌株的药敏试验，根据试验结果进行指导用药，并注意穿梭用药，避免耐药菌株的出现。

［1］王金合，郭素琴，陈益，猪链球菌的分离鉴定及药敏试验［J］.郑州牧业工程高等专科学校学报，2006，⑶.

［2］luque i，tarradas c，arenas a，et al.streptococcus suis serotypes associated with different disease conditions in pigs［J］.vet rec，1998，142，（26）：726-727.

［3］赵华梅，潘秀珍，唐家琪.猪链球菌毒力因子和鉴定方法的研究进展［J］.微生物学杂志，2006，26（1）：77-80.

［4］熊毅，刘棋，覃芳芸，等.猪链球菌亚种及1、2、9型四重PCR检测方法的建立［J］.南方农业学报，2007，38（6）：681-684.

［5］付薇，陈进喜，覃芳芸，等.猪链球菌9型cps9G基因的克隆与序列分析［J］.动物医学进展，2009，30（1）：1-4.

（编辑：赵鹏飞）

S858.28

A

1006-799X（2016）11-0071-02

王刚（1971-），男，山东龙口人，畜牧师，研究方向畜牧兽医。