结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)应用于结核诊断的临床意义

范伟光，孟　娟，苏苗苗，张文娟，王　浩

(保定市传染病医院 1.检验科:2.皮肤科，河北 保定071000)



结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)应用于结核诊断的临床意义

范伟光1，孟娟2，苏苗苗1，张文娟1，王浩1

(保定市传染病医院 1.检验科:2.皮肤科，河北 保定071000)

由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)感染所引发的结核病是全球人民都必须重视的疾病。根据相关数据，全世界有将近三分之一 的人感染了结核分枝杆菌，并且每年大约有两百万人死于结核[1]。早在2000年，国家卫生部第4次结核流行病学调查中显示，我国全年龄组结核分枝杆菌(MTB)感染率已达到44.5%,全国大约有5.5亿人次感染了该菌，感染率高于全球人口感染率约1/3水平[2]。结核病是能治愈的，特别是早期进行治疗可明显降低病死率。近期，一种结核杆菌辅助诊断的新实验方法——结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)进如人们的视野。本研究拟对所有测试者，进行T-SPOT.TB试验,同时进行结核菌素皮肤试验(TST)、结核抗体检测、痰菌涂片、细菌培养等，以探讨T-SPOT.TB 对结核病的临床诊治的优越性。

1材料与方法

1.1研究对象所有150例实验组病例均选自2014年6月至2015年3月在保定市传染病医院住院、门诊的结核患者。其中男82例，女68例，平均年龄为(35.75±16.23)岁，所有入选本研究的病例患者治疗时间均小于1周，经临床或细菌学检查确诊[3]。其中肺结核患者115例，肺外结核患者35例。健康对照组45例为排除结核病的健康体检者，男25例，女20例，平均年龄为(33.01±12.54)岁。

1.2试剂和仪器主要试剂：结核感染T细胞检测试剂盒(免疫斑点法)(T-SPOT.TB)购自上海复星长征医学科学有限公司；卡介苗纯蛋白衍生物(BCG-PPD)针剂购自成都生物制品研究所有限责任公司；结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒购自南京大渊生物技术工程有限公司。主要仪器： HFsafe-1500 CLASS Ⅱ TYPE B2生物安全柜、PBT X2蛋白芯片阅读仪、VersaTREK细菌培养系统等。

1.3检测方法所有试验均严格按照试剂盒操作规程执行。

1.4统计处理应用SPSS17.0软件进行统计学数据分析，计数资料用百分率(%)，采用χ2检验，P<0.05判定有统计学意义。

2结果

2.1各组间T-SPOT.TB 阳性率比较见表1。结果显示，肺结核组、肺外结核组、正常对照组T-SPOT.TB的阳性率分别为86.1%、80.0%、6.7%。肺结核组和肺外结核组T-SPOT.TB的阳性率均显著高于正常对照组T-SPOT.TB的阳性率，差异有统计学意义(χ2=199.336,P<0.01)；而肺结核组和肺外结核组T-SPOT.TB的阳性率差异无统计学意义(χ2=0.413,P>0.05)。

表1　各组间T-SPOT.TB阳性率的比较分析

注：*χ2=199.336,P<0.01，△χ2=0.413,P>0.05

2.2不同结核诊断试验方法比较见表2。对方法的敏感性、特异性和Youden指数进行比较。结果显示T-SPOT.TB检测的敏感性显著高于TST、痰菌涂片、细菌培养、结核抗体的敏感性，差异有统计学意义(χ2=179.030,P<0.01)；T-SPOT.TB检测特异性与TST、结核抗体比较无统计学意义(χ2=6.342,P>0.05)；T-SPOT.TB检测的Youden指数为78.0，高于TST、痰菌涂片、细菌培养、结核抗体，说明T-SPOT.TB的准确度比其他几种方法更可靠。

表2　　　　T-SPOT.TB与其他结核诊断试验的敏感性、特异性等指标的比较

2讨论

近年来，中国地区结核病发病上升趋势十分明显，已严重影响我国人民生活质量和健康保健。潜伏感染者和结核患者早发现，是控制结核病传染源，切断结核病传播途径的关键。现有实验室开展的项目有TST、痰菌涂片、细菌培养、结核抗体检测、组织病理学检查等。TST是目前各个卫生行业都在广泛应用的判断结核病的免疫学试验方法，TST强阳性反应则表示体内受到浓厚结核菌感染，患病机会多，是诊断结核病特异指征[4]。其优点是操作简单，成本低廉，但是TST也存在有假阳性或假阴性的可能。比如既往有卡介苗(B C G)接种史或者有非结核分枝杆菌感染均可导致TST出现假阳性，或者免疫系统功能不全和细胞免疫功能低下等情况，又可导致TST出现假阴性。痰菌涂片抗酸染色阳性对诊断肺结核有比较重要的临床意义，该方法技术要求低，不需特殊仪器设备，但是非常容易漏检，需要连续多次进行镜检，并且该方法敏感性过低，不能区分死菌和活菌，即使没有发现抗酸杆菌也不能说明没有感染结核；细菌培养法是对结核分枝杆菌进行鉴定的十分准确的试验方法，可进一步进行菌种鉴定和药敏试验，但是检测时间过长，敏感性过低，即使应用目前较先进的全自动细菌液体培养基的方法，检测时间也需要1-2周，对结核病早期的诊断和随后的治疗有一定影响。结核抗体检测的特异性、敏感性也都较低，目前只作为快速诊断结核病的初筛实验室方法。

T-SPOT.TB是应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)方法对全血中的致敏T细胞二次接受特异性抗原刺激后释放γ-干扰素的作相应的定量检测。据相关实验表明，CD8 T细胞也能分泌IFN-γ[5]。所以IFN-γ的水平能够被用来当作诊断结核菌感染的重要指标[6]。T-SPOT.TB挑选了两种早期分泌蛋白都来自RD1区编码。抗原分别为培养滤过蛋白-10(CFP-10)与早期抗原靶-6(ESAT-6)，T淋巴细胞被两种抗原刺激分泌出特异性的细胞因子IFN-γ，由于CFP-10、ESAT-6只存在于结核分枝杆菌复合群中，而在所有BCG和大多数非致病性分枝杆菌(NTM)中都缺失[7]，因此T-SPOT.TB可提高诊断结核分枝杆菌感染的特异性。其检测的敏感性也优于细菌培养法。

本研究显示肺结核组、肺外结核组、正常对照组T-SPOT.TB的阳性率分别为86.1%、80.0%、6.7%。肺结核组和肺外结核组T-SPOT.TB的阳性率均显著高于正常对照组，差异有统计学意义(χ2=199.336,P<0.01)，说明T-SPOT.TB有较高的敏感性；而肺结核组和肺外结核组T-SPOT.TB的阳性率差异无统计学意义(χ2=0.413,P>0.05)，说明T-SPOT.TB在肺外结核的诊断也具有一定优势。T-SPOT.TB检测的敏感性显著高于TST、痰菌涂片、细菌培养、结核抗体的敏感性，差异有统计学意义(χ2=179.030,P<0.01)；T-SPOT.TB检测的特异性也很高，为93.3%。T-SPOT.TB检测的Youden指数为78.0，远高于TST、痰菌涂片、细菌培养、结核抗体，说明T-SPOT.TB的准确度比其他几种方法更可靠。

综上所述，结核病明确诊断需要将临床表现、影像学与病原免疫学检查、组织病理学和对抗痨药治疗反应等结合起来进行评估。结核感染T细胞检测联合多种实验室方法检测结核，能有效提高结核诊断的准确率，是现有实验室诊断结核疾病应用价值较高的方法。

参考文献：

[1]Massimo Amicosante L,Massimo Ciccozzi4,et al.Rational use of immunodiagnostic tools for tuberculosis infection:guidelines and cost Effectiveness studies[J].New Microbiologica,2010,33:93.

[2]全国结核病流行病学抽样调查技术指导组，全国结核病流行病学抽样调查办公室.2000年全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志,2002,24(2)65.

[3]中华医学会.临床诊疗指南-结核病分册[M].北京:人民卫生出版社，2005:1-46，122.

[4]彭卫生,王英年,肖成志.新编结核病学[M].第2版.北京:中国医药科技出版社,2003:138-139．

[5]Tuuminent,Tavast E,Vaisanen R,et al.Assesssment of lmprecision in gamma interferon release assays for the detection of exposure to Mycobacterium tuberculosis[J].Clin Vaccine Immunol,2010,17(4):596．

[6]彭超,王洪海.结核分枝杆菌潜伏感染诊断方法的新进展[J].生物技术通讯，2010,21(1):107．

[7]文霞,柳爱华,宝福凯,等.结核感染T细胞检测应用于结核病诊断的研究进展[J].中国病原生物学杂志,2011,7:542．

文章编号：1007-4287(2016)06-1013-02

(收稿日期：2015-07-25)