丹参多酚酸盐对阿托伐他汀钙在心肌缺血大鼠体内的药动学影响

杨彩艳，邹 堃，李宏辉，王 博，杨小英，贺 罡（.银川市第一人民医院药学部，宁夏 银川 75000；.宁夏医科大学公共卫生学院，宁夏 银川 750004；.宁夏医科大学总院药剂科，宁夏 银川 750004）



丹参多酚酸盐对阿托伐他汀钙在心肌缺血大鼠体内的药动学影响

杨彩艳1，邹 堃1，李宏辉2，王 博1，杨小英3，贺 罡（11.银川市第一人民医院药学部，宁夏 银川 750001；2.宁夏医科大学公共卫生学院，宁夏 银川 750004；3.宁夏医科大学总院药剂科，宁夏 银川 750004）

[摘要]目的：探讨丹参多酚酸盐对阿托伐他汀钙在心肌缺血大鼠体内的药动学影响。方法:选取雄性SD大鼠给予腹腔注射垂体后叶素建立心肌缺血损伤模型，将其随机分为两组：单用阿托伐他汀钙组（30 mg·kg-1）与联合用药组（阿托伐他汀钙30 mg·kg-1+丹参多酚酸盐200 mg·kg-1），每组5只。分别于给药前及给药后0.083、0.17、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、36 h从尾静脉采血1 mL，并分离血浆0.5 mL，采用LC-MS/MS测定阿托伐他汀钙的血药浓度，比较两组间药代动力学参数，利用DAS 3.0软件进行统计学处理。结果:合用丹参多酚酸盐后阿托伐他汀钙在心肌缺血大鼠体内药代动力学参数AUC0-t、AUC0-∞增加显著（P < 0.05），其它药代动力学参数无显著性差异（P > 0.05）。结论：在心肌缺血的病理状态下，丹参多酚酸盐能显著提高阿托伐他汀钙的生物利用度，但对其体内的消除无显著影响。

[关键词]丹参多酚酸；阿托伐他汀钙；药代动力学；心肌缺血

阿托伐他汀是HMG-CoA还原酶抑制剂，具有调节血脂水平，保护血管内皮、抗炎、稳定斑块等作[1-2]，主要经细胞色素P450代谢，联合其他药物使是其发生不良反应的高危因素[3]。丹参多酚酸盐是中药丹参的主要有效成分，具有活血、化瘀、通络等功能，临床常将其联合他汀类药物治疗冠心病且疗效显著[4]。温金华等[5]研究发现，大鼠体内丹参可影响瑞舒伐他汀的药代动力学特性。因此，丹参多酚酸盐是否影响在心肌缺血病理状态下阿托伐他汀的药代动力学过程值得深入探讨。本研究拟采LC-MS/MS法测定垂体后叶素（Pit）所致心肌缺血模型大鼠体内阿托伐他汀的血药浓度，考察丹参多酚酸盐在心肌缺血病理状态下对阿托伐他汀药代动力学的影响。

1　材料

1.1仪器

LC-30A高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；API4000串联四极杆质谱仪（配有电喷雾离子源，Analyst 1.5.1分析操作软件，美国Applied Biosystems公司）；Eppendorf 5804R低温高速离心机（德国Eppendorf公司）；XW-80A涡旋混合器（姜堰市康健医疗器具有限公司）；梅特勒AE240电子天平（瑞士梅特勒托利多仪器上海有限公司 ） 。

1.2药品与试剂

1.3实验动物

健康SD雄性大鼠，体质量（230±15） g，购自宁夏医科大学实验动物中心，合格证号：SCXK（宁）2011-0001。

2　方法

2.1给药方案及血样采集

参考文献[6]方法，所选大鼠在给药1 d前先进行Pit敏感性筛选，腹腔静注Pit 21 U ·kg-1后观察大鼠Ⅱ导联心电图ST波抬升情况，以ST段抬高0.1 mV为敏感大鼠。将10只雄性大鼠随机分为2组，每组5只，分别为单￵阿托伐他汀￴组与联合￳药组（阿托伐他汀￲+丹参多酚酸盐），给药前大鼠禁食12 h，自由饮水。正式实验时先给予腹腔静注Pit 21 U·kg-1，5 min后阿托伐他汀￱组灌胃给予阿托伐他汀￰30 mg·kg-1，联合￯药组则在腹腔注射丹参多酚酸盐200 mg·kg-15 min后给予阿托伐他汀￮30 mg ·kg-1灌胃，两组分别在灌胃给药前及给药后0.083、0.17、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、36 h时从尾静脉采血1 mL，血样置于含有EDTA的试管中离心处理后，血浆样品于–20 ℃冰箱中保存。

2.2LC-MS/MS条件

色谱条件：色谱柱：Shim-pack XR-ODS柱（2.0 mm×100 mm，2.2 μm）；保护柱：Shim-pack GVP-ODS柱（2.0 mm×5 mm，2.2 μm），柱温40 ℃，地西泮为内标。流动相：A相为 0.1%甲酸，B相为乙腈，采梯度洗脱（0～0.6 min，10%B；0.6～1.2 min，10% →90%B；1.2～3.5 min，90%B；3.5～4.1 min，90% →10%B，5.5 min结束）；流速0.3 mL·min-1；进样量：10 μL。

质谱条件：离子源：离子喷雾离子化源；离子喷射电压：5500 V；温度：500 ℃；源内气体1（GS1，N2）压力：60 psi；气体2（GS2，N2）压力：30 psi；气帘气体（CUR，N2）压力：20 psi；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测（MRM）；于定量分析的离子反应分别为：m/z 559.3/440.0（阿托伐他汀）、m/z 285.0/192.5（地西泮），解簇电压（DP）分别为：85 V和90 V，碰撞能量（CE）分别为：30 eV和45 eV；碰撞气（CAD，N2）压力：6 psi；Q1、Q3分辨率均为UNIT。

2.3溶液制备

精密称取地西泮对照品10 mg，置于10 mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，配制成1 mg·mL-1的标准储备液。将1 mg ·mL-1的地西泮标准储备液乙腈稀释至1 ng·mL-1，作为沉淀血浆蛋白的乙腈溶液，置4 ℃冰箱保存。

2.4血液样本处理

取血浆50 μL，依次加入含内标的乙腈溶液150 μL、乙腈50 μL，振荡5 min，14 000 r· min-1离心10 min，离心后取上清液200 μL转移至进样瓶中进行LC-MS/MS分析。

2.5统计学分析

根据测定给药后各时间点的阿托伐他汀血药浓度，采DAS 3.0药代动力学软件的非房室模型法分析（统计矩法）药代动力学参数。药代动力学参数间的比较运SPSS13.0软件，采配对t检验。

3　结果

3.1方法专属性

取6个不同个体的混合空白血浆50 μL，加入150 μL不含内标的乙腈，其余按“2.4”项下方法处理，进行LC-MS/MS分析，获得空白血浆样品的色谱图，与含一定浓度对照品和内标的血浆生物样本获得的色谱图及大鼠给药后获得的色谱图比较，判断血浆内源性物质是否干扰待测物和内标的出峰。阿托伐他汀及内标的保留时间分别为2.58、2.69 min。血浆内源性物质对药物、内标物质的测定无干扰，详见图1。

3.2标准曲线和定量下限

图1　方法专属性A–空白血浆，B–空白血浆+药物，C–给药后0.5 h；1–阿托伐他汀，2–内标（地血泮）Fig 1 Specificity of methodsA–blank plasma, B–blank plasma + drug, C–0.5 h after administration; 1–atorvastatin calcium, 2–internal standard (diazepam)

3.3精密度实验

3.4加标回收率实验

3.5主要药代动力学参数

表1　急性心肌缺血大鼠单服阿托伐他汀钙与合用丹参多酚酸盐后阿托伐他汀钙的药代动力学参数. n = 5,± sTab 1 Pharmacokinetic parameters of atorvastatin calcium after single atorvastatin calcium administration and coadministration with salvianolate in the rat with acute myocardial ischemia. n = 5,± s

表1　急性心肌缺血大鼠单服阿托伐他汀钙与合用丹参多酚酸盐后阿托伐他汀钙的药代动力学参数. n = 5,± sTab 1 Pharmacokinetic parameters of atorvastatin calcium after single atorvastatin calcium administration and coadministration with salvianolate in the rat with acute myocardial ischemia. n = 5,± s

药动学参数　单阿托伐他汀组　联合药组　P AUC0-t/µg·L-1·h　511.635±94.8240 　872.265±214.788 　< 0.05 AUC0-∞/µg ·L-1·h　579.421±175.879 　927.822±211.728 　< 0.05 t1/2/h　10.600±2.22200 　10.055±7.15200 　> 0.05 tmax/h　0.333±0.22800　0.951±0.97100　> 0.06 CL/F/L·h-1·kg-1　53.914±13.0890　39.676±16.8430　> 0.07 Cmax/µg·L-1　170.100±83.5120　137.220±82.9340　> 0.08

3.6单用与联合用药组阿托伐他汀钙平均血药浓度-时间曲线

具体结果详见图2。

图2　急性心肌缺血大鼠单服阿托伐他汀钙与合用丹参多酚酸盐后阿托伐他汀钙的药-时曲线图Fig 2 Mean plasma concentration-time profiles of atorvastatin calcium after single atorvastatin calcium administration and co-administration with salvianolate in the rat with acute myocardial ischemia

4　讨论

本实验参考相关研究[8]建立了简单、准确的测定血浆阿托伐他汀药物浓度的LC-MS/MS方法，该法专属性高，精密度、准确度、提取回收率等符合生物样品分析的要求。

除普伐他汀外，他汀类药物的生物转化主要是由微粒体细胞色素同工酶系统完成，对细胞色素P450酶的抑制或诱导作，可影响他汀类药物的药代动力学特性[9]，改变其血药浓度，导致不良反应的发生[10-11]。本实验结果显示丹参多酚酸盐与阿托伐他汀合后可增加阿托伐他汀的血药浓度，参数值AUC0-t与AUC0-∞明显增大，差异有统计学意义（P < 0.05）。丹参多酚酸盐系丹参素的衍生物，是中药丹参中重要的有效成分之一[12]。有研究[13]表明丹参素可能是CYP2C9的竞争性抑制剂。因此，阿托伐他汀血药浓度的增高可能是丹参多酚酸盐抑制了阿托伐他汀在心肌缺血大鼠体内的代谢，导致血药浓度上升。当然，也不排除其他机制引起阿托伐他汀血药浓度升高，相关机制仍尚待进一步研究。

[1] 杨娇妹，曾德明.阿托伐他汀治疗急性冠状动脉综合症的疗效分析[J].现代生物医学进展，2008，8（2）：317-320.

[2] Han SH, Kang EW, Yoon SJ, et al. Combined vascular effects of HMG-CoA reductase inhibitor and angiotensin receptor blocker in non-diabetic patients undergoing peritoneal dialysis[J]. Nephrol Dial Transplant, 2011, 26(11): 3722-3728.

[4] 唐群中，张学频，陈学智，等.丹参多酚酸盐联合阿托伐他汀对老年急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗术后血管内皮功能及炎性因子的影响[J].中国介入心脏病学杂志，2015，23（5）：282-285.

[5] 温金华，胡锦芳，蔡军，等.丹参对瑞舒伐他汀在大鼠体内药代动力学的影响[J].第二军医大学学报，2012，33（3）：320-323.

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[9] 钟雪，张亚同，程刚，等.辛伐他汀和阿托伐他汀与CYP3A4酶抑制剂/诱导剂在心内科患者中联情况调查[J].中国药物应与监测，2013，10（4）：189-192.

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[11] 裴斐，陈超，郭代红.阿托伐他汀致转氨酶异常升高的主动监测研究[J].中国药物应与监测，2014，11（1）：31-33.

[13] Qiu F, Zhang R, Sun J, et al. Inhibitory effects of seven components of danshen extract on catalytic activity of cytochrome P450 enzyme in human liver microsomes[J]. Drug Metab Dispos, 2008, 36(7): 1308-1314.

Effect of salvianolate on pharmacokinetics of atorvastatin calcium in rats with myocardial ischemia

YANG Cai-yan1, ZOU Kun1, LI Hong-hui2, WANG Bo1, YANG Xiao-ying3, HE Gang1(1. Department of Pharmacy, the First People's Hospital of Yinchuan, Yinchuan 750001, China; 2. Public Health Institute of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China; 3. Department of Pharmacy, General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

[ABSTRACT]Objective: To study the effect of salvianolate on the pharmacokinetics of atorvastatin calcium in rats with myocardial ischemia.Methods: The rat models of myocardial ischemia were established by injecting pituitrin into the peritoneal cavity of SD rats. Parallel control method was applied in this study. Ten model rats were evenly randomized into two groups: atorvastatin calcium (30 mg· kg-1) group and drug combination group (atorvastatin calcium 30 mg·kg-1plus salvianolate 200 mg·kg-1). Blood samples (1 mL) were collected from the caudal vein at 0.083, 0.17, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36 h after drug administration. LC-MS/MS was used to determine the plasma concentrations of atorvastatin calcium. The pharmacokinetic parameters of the two groups were compared, and statistical analysis was performed by DAS 3.0 software. Results: When combined with salvianolate, the AUC0-tand AUC0-∞of atorvastatin calcium were increased obviously (P ＜ 0.05）. The other pharmacokinetic parameters had no signifcant changes (P > 0.05). Conclusion: In the state of myocardial ischemia, salvianolate could apparently increase the bioavailability of atorvastatin calcium, while it almost had no effect on drug elimination process.

[KEY WORDS]Salvianolate; Atorvastatin calcium; Pharmacokinetics; Myocardial ischemia

[中图分类号]R969.1

[文献标识码]A

[文章编号]1672–8157(2016)02–0085–04

[基金项目]宁夏自然科学基金资助项目（NZ13206）

[通信作者]贺罡，男，主任药师，主要从事药事管理工作。E-mail：372438212@qq.com

[作者简介]杨彩艳，女，主管药师，主要从事临床药学工作。E-mail：13639596653@163.com

收稿日期：（2015-10-28 修回日期：2016-02-03）