泥鳅体表粘液中IgM的分离纯化与抑菌活性研究



泥鳅体表粘液中IgM的分离纯化与抑菌活性研究

免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)可以杀死细菌和病毒，增强机体免疫功能[1]，鱼类的体表粘液中存在大量Ig[2]。国内对鱼类体表粘液IgM的研究较多[3,4]，但目前对泥鳅体表粘液中IgM的研究报道很少。本文对泥鳅体表粘液中IgM进行分离纯化，然后对其抑菌性进行研究。

1　材料与方法

1.1材料与试剂。泥鳅，购自衡水市自强街水产市场；枯草芽孢杆菌、大肠杆菌，均由衡水学院微生物实验室提供；硫酸铵，北方天医化学试剂有限公司生产。

1.2试验方法

1.2.1粘液的澄清与干燥。将采集的泥鳅粘液在冰箱内(0℃~ 4℃)静置2 h，让其内部泥沙等杂质沉淀，取上清粘液，用纱布过滤。然后对过滤后的粘液用冷冻干燥机进行干燥处理，得泥鳅粘液粉末。

1.2.2IgM的分离纯化。采用硫酸铵沉淀的方法进行分离纯化，工艺流程如下：泥鳅粘液粉末→采用磷酸盐缓冲液溶解→磁力搅拌条件下，加入一定浓度的pH 7.0的饱和硫酸铵，4℃静置过夜→离心得到沉淀→冷冻干燥→得到泥鳅粘液IgM。

采用4因素3水平L9(34)试验设计，硫酸铵浓度、离心转速、离心时间见表1。采用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测定分离纯化后的泥鳅粘液IgM纯度，以确定最佳的提取条件。

表1　L9(34)正交试验因素水平表

1.2.3IgM的抑菌性研究。分别选取枯草芽孢杆菌(革兰氏阳性菌)和大肠杆菌(革兰氏阴性菌)，采用滤纸片法进行抑菌试验，检测硫酸铵分离纯化后的IgM抑菌效果。

2　结果与分析

2.1正交实验对IgM分离纯化效果影响的研究。正交实验对IgM分离纯化效果的影响见表2、表3。

由表2、表3可知，硫酸铵浓度对IgM提取纯度有显著影响。各影响因素大小顺序为：硫酸铵浓度＞离心时间＞离心转速。确定试验组合为A2B3C2，即硫酸铵浓度30%，离心转速8 000 r/min，离心时间10 min。采用此组合进行试验，得IgM纯度为54%。

表2　L9 (34)正交实验对IgM分离纯化效果的影响的分析

表3　L9(34)正交试验对IgM分离纯化效果的影响的显著性分析

2.2IgM的抑菌性测定。经过抑菌性测定得知，提取的泥鳅体表粘液IgM对大肠杆菌的抑菌效果较好，对枯草芽孢杆菌几乎没有抑菌效果。

3　小结

通过正交试验得知，提取泥鳅体表粘液IgM的最佳条件为：硫酸铵浓度30%，离心转速8 000 r/min，离心时间10 min，在此条件下，得IgM纯度为54%。提取的IgM对革兰氏阴性的大肠杆菌抑菌效果很好，但对革兰氏阳性菌的抑菌效果不理想，其原因还有待于进一步的研究。

参考文献

[1]金涌.免疫球蛋白在营养保健食品中的应用[J] .延边大学农学学报，2001，23 (4)：266~269.

[2]林娟娟.欧洲鳗鲡粘膜免疫球蛋白的纯化及其结构分析[D] .福州：福建农林大学，2006.

[3]杨桂文，安利国，温武军，等.鲤肠粘液与血清中免疫球蛋白的比较研究[J] .中国水产科学，1999，6 (4)：109～110.

[4]陈篧，王石泉，韩晓冬，等.鲫鱼血清和皮肤粘液IgM的分离纯化及部分性质的鉴定[J] .动物学研究，2003，24 (2)：111～115.

053000衡水学院生命科学学院柴琪琪李志涛次少涛张达

基金项目：衡水学院大学生科技创新(20160107008)。