恩施土家族人群血管内皮生长因子基因多态性和吸烟在2型糖尿病中交互作用研究

邓仁生，朱小琴，于　静

(湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院，湖北 恩施 445000)

恩施土家族人群血管内皮生长因子基因多态性和吸烟在2型糖尿病中交互作用研究

邓仁生，朱小琴，于静

(湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院，湖北 恩施 445000)

[摘要]目的探讨恩施土家族人群血管内皮生长因子(VEGF)-460C/T多态性与2型糖尿病关联性及其与吸烟的交互作用。方法采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析120例土家族2型糖尿病患者和180例土家族正常人VEGF-460C/T基因型分布情况。非条件Logistic分析各基因型与2型糖尿病发病的易感性关系以及与吸烟的交互作用。结果C基因携带者(CC型+CT型)患病风险是非C基因携带者(TT型)的1.65倍[OR=1.65,95%CI( 1.45,4.32),P=0.005;校正OR=1.79,95%CI(1.51,5.11),P=0.000];非条件Logistic分析表明CC型+CT型吸烟个体2型糖尿病罹患风险是TT型非吸烟个体的3.73倍[OR=3.73,95%CI(2.92,6.54)；RERI=2.38,95%CI(1.24,3.59);API=0.69,95%CI(0.34,0.98);S=1.44,95%CI(1.09,3.18)]。结论VEGF-460C/T多态性增加恩施土家族个体2型糖尿病罹患风险,且在2型糖尿病发病中与吸烟存在协同效应。

[关键词]血管内皮生长因子;多态性;2型糖尿病;易感性;交互作用

2型糖尿病(T2DM)是一种以机体胰岛素抵抗敏感性降低为主要特征的代谢性疾病，是个体遗传因素与外界环境因素共同作用的结果,患者本身可以合并多种疾病,同时也可以增加高血压、冠心病等心血管疾病的罹患风险[1-2]。现已明确T2DM发病主要与能量代谢紊乱、胰岛素抵抗以及炎症反应紧密相关[1-2]。近年来研究发现基因多态性在T2DM发病中起着至关重要的作用[3]。血管内皮生长因子(VEGF)是一种可以促血管内皮细胞分化、移行、增生和最终促进新生血管形成的细胞因子，其同时还可调节能量代谢、胰岛素抵抗以及炎症[4]。为此,本研究通过采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法探讨了土家族人群VEGF-460C/T多态性与T2DM易感性关系以及与吸烟的交互作用，现将结果报道如下。

1临床资料

1.1一般资料选取2014年2月—2015年8月于恩施土家族苗族自治州中心医院内分泌科住院土家族T2DM患者120例作为T2DM组，T2DM诊断符合1999年WHO颁布的糖尿病诊断标准。选取同期在本院体检中心体检健康土家族个体180例作为对照组，均无血糖调节受损。 受试者年龄均为38～76岁。

1.2研究方法

1.2.1一般资料的收集通过询问及形态学测量，收集受试者的年龄、性别、吸烟史以及体质量、身高、腰围。

1.2.2生化指标检测抽取所有受试者的空腹静脉血,采用日本东芝全自动生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG) 以及空腹胰岛素(FINS)水平，并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),HOMA-IR=FBG×FINS/22.5。

1.2.3VEGF -460C/T多态性检测采取酚-氯仿经典方法提取外周血基因组DNA。根据VEGF基因的核苷酸序列设计各个位点的扩增引物，使用PCR扩增目的基因片段。PCR扩增引物序列:VEGF-460C/T引物，上游:5’-CTCTTTAGCCAGAGCCGGGG-3’，下游:5’-TGGCCTTCTCCCCGCTCCGAC-3’;PCR反应体系(25 μL)包含100 ng提取DNA,1.0 IU Taq酶,2 μL上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反应条件:95 ℃变性6 min;94 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s 30个循环;最后72 ℃延伸10 min。限制性内切酶BsaHI,NlaⅢ酶切。酶切产物进行3%琼脂糖电泳;EB染色成像以此判定酶切基因型。

1.3统计学方法本研究中的资料均采用SPSS 19.0软件进行分析。基因型和等位基因频率比较采用非条件Logistic回归分析，基因型Hardy-Weinberg平衡法2检验。计量资料符合正态分布则采用均数±标准差表示，用t检验，运用Logistic分析VEGF-460C/T多态性在T2DM中作用。通过非条件Logistic以及Bootstrap方法评估VEGF-460C/T多态性与吸烟间的相加交互作用[5]，计算相对超额危险度比(RERI)、归因比(API)和交互作用指数(S)及其95%CI。如RERI和API值95%CI包括0、S值95%CI包括1，表明不存在相加交互作用。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1一般情况2组性别、年龄、体质量指数、TC、TG、LDL-C比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，而2组吸烟史、腰围、HDL-C、 FBG、HOM-IR比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

2.2VEGF-460C/T多态性与T2DM易感性关系T2DM组VEGF-460C/T基因型中TT型60例，CT型31例，CC型29例；对照组VEGF-460C/T基因型中TT型98例，CT型43例，CC型39例。2组VEGF-460C/T基因型频分布均符合Hardy-Weinberg平衡法(2=0.12,P=0.23；2=0.37,P=0.56); CT型的患病风险是TT型的1.31倍[OR=1.31,95%CI(1.11,1.68),P=0.034]；CC型的患病风险是TT型的1.34倍[OR=1.34,95%CI( 1.23,3.18),P=0.021];C基因携带者(CC型+CT型)患病风险是非C基因携带者(TT型)的1.65倍[OR=1.65,95%CI(1.45,4.32),P=0.005]。利用非条件Logistic回归分析校正腰围、体质量指数、HDL-C以及吸烟等因素，CT型的患病风险是TT型的1.42倍[OR=1.42,95%CI(1.17,2.11),P=0.025]；CC型的患病风险是TT型的1.57倍[OR=1.57,95%CI(1.31,4.01),P=0.009];C基因携带者(CC型+CT型)患病风险是非C基因携带者(TT型)的1.79倍[OR=1.79,95%CI(1.51,5.11),P=0.000]。

表1　2组一般资料比较

2.3VEGF-460C/T多态性与吸烟交互作用T2DM组非吸烟者57例，其中TT型37例，CC型+CT型20例；吸烟者63例，其中TT型24例，CC型+CT型39例。对照组非吸烟者104例，其中TT型70例，CC型+CT型34例；吸烟者76例，其中TT型46例，CC型+CT型30例。采用非条件Logistic分析VEGF -460C/T多态性与吸烟交互作用,与携带TT基因不吸烟者相比, CC型+CT型不吸烟个体罹患T2DM风险增加1.12倍[OR=1.12,95%CI(1.09,2.72),P=0.029],TT型吸烟个体罹患T2DM风险增加1.23倍[OR=1.23,95%CI(1.19,2.98),P=0.012]，CC型+CT型吸烟个体罹患T2DM风险增加3.73倍[OR=3.73,95%CI(2.92,6.54),P=0.000；RERI=2.38,95%CI(1.24,3.59);API=0.69,95%CI(0.34,0.98);S=1.44,95%CI(1.09,3.18)；RERI和AP值95%CI不包括0，S值95%CI不包括1]。相加交互作用分析结果表明OR=1.67,95%CI(1.21,2.87)。

3讨论

人类VEGF基因位于染色体6p21.3，其蛋白表达水平在不同个体间呈现一定的差异，这可能与VEGF多态性有关[6]。VEGF基因多态性的位点主要位于5’非翻译区和3’非翻译区。相关研究提示VEGF多态性与肥胖、多囊卵巢综合征易感性相关[7-8]，而肥胖及多囊卵巢综合征与T2DM的易感基因相类似[9-10]。目前认为T2DM发病主要与氧化应激以及炎症反应相关[1-2]，而遗传因素在T2DM发病中也有着重要作用[3]。从遗传易感性角度确定T2DM高危人群，并进行针对性的预防是目前降低T2DM发生风险的有效措施。Tiwari等[11]发现印度人群T2DM发病与VEGF-460C/T多态性相关，而我国学者发现上海地区人群T2DM发病与VEGF多态性无关[12]。上述结果提示不同地区VEGF基因多态性与T2DM的关联性表现出一定的差异。本研究结果发现，恩施土家族人群中，VEGF-460C/T多态性增加T2DM罹患风险。

吸烟作为T2DM的一个危险因素近年来得到重视,有报道显示吸烟个体罹患T2DM的风险增加[13]。此外,吸烟可以导致中心性脂肪堆积[14],而中心性脂肪堆积是T2DM发病重要的危险因素。VEGF-460C/T多态性和吸烟在T2DM及其他疾病中交互作用鲜见报道,其机制目前尚无法阐明。参照吸烟与肥胖易感性基因交互作用报道[15],分析吸烟可通过改变VEGF-460C/T多态性对T2DM易感性发挥协同效应。为了进一步探讨VEGF -460C/T多态性与吸烟对T2DM患病是否有交互作用，本研究采用非条件Logistic回归分析进行了验证，结果提示VEGF-460C/T多态性和吸烟存在相加交互作用而无相乘交互作用。但本研究存在一定不足,诊断只考虑了是否吸烟,而没有充分考虑吸烟的频率以及吸烟草的质量,更没有充分考虑是否存在被动吸烟等情况；且本研究仅考虑吸烟,而没有考虑其他环境因素。

综上所述,VEGF-460C/T多态性可以增加恩施土家族个体T2DM罹患风险,且和吸烟在T2DM发病中发挥着协同作用，但尚需要开展更大样本量、设计更严谨的研究。

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Interaction between smoking and VEGF polymorphisms in type 2 diabetes in tujia population

DENG Rensheng, ZHU Xiaoqin, YU Jing

(The Central Hospital of Enshi Tujia and Miao Autonomous Prefecture, Enshi 445000,Hubei,China)

Abstract:Objective It is to study the relationship between polymorphism in vascular endothelial growth factor (VEGF)-460C/T and susceptibility to type 2 diabetes (T2DM) and their interaction with smoking. Methods VEGF-460C/T genotypes of 120 case patients with T2DM and 180 control subjects were examined by polymerase chain reaction-based restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The unconditional logistic regression (ULR) was performed to assess the T2DM risk and interaction with smoking. Results A case-control analysis indicated that there was increased risk of developing T2DM for CC/CT genotype carriers compared with TT[OR=1.65,95%CI(1.45,4.32),P=0.008;Adjust OR=1.79,95%CI(1.51,5.11),P=0.000]. By using the ULR method, smoking-positive subjects with genotype CT/CC had an T2DM risk 3.73 times more than that of smoking-negative subjects with genotype TT[OR=3.73, 95%CI(2.92,6.54；RERI=2.38,95%CI(1.24,3.59);API=0.69,95%CI(0.34,0.98);S=1.44,95%CI(1.09,3.18)]. Conclusion VEGF-460C/T polymorphism is associated with T2DM risk, and its interaction with smoking have synergistic effects on risk of T2DM.

Key words:VEGF; polymorphism; T2DM; susceptibility; interaction

[作者简介]邓仁生，男，主治医师，主要从事2型糖尿病的研究工作。 [通信作者]于静，E-mail:1002844988@qq.com

[基金项目]湖北省自然科学基金资助项目(2013DC347)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.10.004

[中图分类号]R587.1

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)10-1037-03

[收稿日期]2015-10-20