梅毒抗体筛查结果分析及其检测方法联合应用评价*

闵少菊， 徐　梅， 谭玉洁,2*

(1.贵州医科大学附属白云医院 检验医学科， 贵州 贵阳　550014； 2.贵州医科大学附院 中心实验室， 贵州 贵阳　550001)

梅毒抗体筛查结果分析及其检测方法联合应用评价*

闵少菊1， 徐梅1， 谭玉洁1,2*

(1.贵州医科大学附属白云医院 检验医学科， 贵州 贵阳550014； 2.贵州医科大学附院 中心实验室， 贵州 贵阳550001)

[摘要]目的： 分析梅毒抗体(TP-Ab)筛查阳性率及侵入性检查前检测的必要性,评价其检测方法联合应用的临床价值。方法： 对6 584例患者血清样本采用梅毒酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)初筛TP-Ab，阳性样本再以梅毒螺旋体明胶吸附试验(TPPA)、胶体金法及甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)检测，观察不同性别、年龄段、侵入性检查前、输血及术前阳性率差异；比较4种梅素筛查方法阳性率差异,以及在ELISA初筛不同吸光度值(OD值)区间各方法阳性率的差异。结果： TP-Ab初筛阳性率为3.2%，40岁以上人群高于40岁以下人群，差异有统计学意义(P<0.05)，但男女性别间、侵入性检查前、输血及术前比较差异无统计学意义(P>0.05)；23例临床确诊梅毒病例TP-ELISA、TPPA及胶体金法阳性率均为100%，TRUST阳性率为65%；TP-ELISA 与TPPA、胶体金法阳性率分别在0.14≤OD<2组和0.14≤OD<1组中比较；差异有统计学意义(P<0.05)。结论： TP-ELISA法适用于患者侵入性检查前、输血和术前TP-Ab筛查，多种检测方法联合应用可为临床筛查梅毒提供更准确全面的实验诊断依据。

[关键词]梅毒； 梅毒血清诊断； 抗体； 酶联免疫吸附测定； 梅毒螺旋体明胶吸附试验； 甲苯胺红不加热血清试验

梅毒是由梅毒螺旋体(treponemapallidum,TP)感染引起的传染性强、危害较大的性传播疾病[1]。近年来，我国梅毒的发病人数呈上升趋势，严重危害了人类和社会的健康[2]。梅毒可通过性接触、血液及体液等传播。因而，胃镜、肠镜及纤支镜等侵入性检查前对被检者进行梅素抗体(TP-Ab)筛查不仅可保护患者，也可保护医务人员。目前，梅毒的最常用实验室检测方法仍是血清学检测，多为非特异性及特异性抗体联合检测[3]。但怎样合理地选择各种检测方法、正确解释检测结果、避免误诊、漏诊一直是亟待解决的问题。本研究首先统计接受侵入性检查及输血、术前患者经免疫吸附试验(ELISA)筛查TP-Ab的阳性率，再采用梅毒螺旋体明胶吸附试验(TPPA)、胶体金法及甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)方法进行检测，评价各种方法联合应用的临床价值。

1资料与方法

1.1对象

选取2013年10月1日～2014年10月31日进行TP-Ab初筛的门诊及住院患者6 584例；1～103周岁，平均48.6岁，男3 557例、女3 027例；参照中华人民共和国卫生部《梅毒诊断标准(中华人民共和国卫生行业标准)WS273-2007》选取23例临床确诊梅毒病例。

1.2试剂和主要仪器

胶体金、TP-ELISA试剂盒购自厦门英科新创科技有限公司，TRUST及TPPA试剂盒购自上海荣盛生物药业有限公司和日本富士瑞必欧株式会社；上海科华有限公司ST360酶标仪及ST36W洗板机，江苏金坛市佳美仪器有限公司的ZW-A微量振荡器，上海跃进医疗器械有限公司的电热恒温水温箱及济南鑫贝西生物技术有限公司的BSC1500ⅡB2-X生物安全柜。

1.3方法及观察指标

TP-ELISA、TPPA、胶体金及TRUST法均严格按照试剂盒配备的说明书操作。TP-ELISA结果按照说明书在酶标仪相匹配的软件中，设置阴阳性判断公式判读，另3种方法结果由从事该项检测工作两年以上人员，按照说明书要求判读。室内质控选用贵州省临检中心提供的弱阳性质控血清，各项目均参加卫生部临检中心的室间质评取得满意成绩。TP-ELISA检测阳性标本经TPPA、胶体金法及TRUST复检，结合临床资料、电话随访及实验室检测结果确诊梅毒患者，比较不同性别、年龄段及侵入性检测前与输血前、术前TP-Ab初筛阳性率差异，比较4种方法对临床确诊梅毒病例的检出率差异，以及ELISA初筛在不同吸光度值(OD值)区间(0.14≤OD<1、1≤OD<2、OD≥2)各方法检出率的差异。

1.4统计学处理

数据采用SPSS 13.0软件包进行处理，检出阳性率的差异采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1室内及室间质评

TP-ELISA、TRUST、TPPA及胶体金法每次实验均设阴、阳性对照及室内质控，结果在控者证实为有效试验，各项目室间质评均取得满意成绩。

2.2TP-Ab阳性率

6 584例样本ELISA初筛TP-Ab阳性211例，阳性率为3.2%， 20岁以下人群最低(0.52%)，随年龄增长呈上升趋势，至40岁后基本达平台期(3.4%～4.11%)见图1。40岁以上被检者TP-Ab阳性率高于40岁以下人群，差异有统计学意义(P<0.05)，但不同性别、侵入性检查前与输血、术前比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

图1　各年龄段ELISA初筛TP-AbFig.1　The TP-Ab positive results tested by ELISA in different age

2.3TP-ELISA、TPPA、胶体金法与TRUST梅素诊断阳性符合率比较

23例临床确诊梅毒病例，TP-ELISA、TPPA与胶体金法阳性符合率均为100%(23/23)，TRUST阳性符合率为65%(15/23)。TP-ELISA初筛阳性的211例被检者再经TPPA、胶体金法及TRUST复检，以胶体金与TP-ELISA阳性符合率最高达92.42%(195/211)，TRUST最低为13.74%(29/211)，而TPPA与TP-ELISA阳性符合率为87.68%(185/211)。

表1　TP-ELISA初筛TP-Ab阳性率

2.4不同OD值区间TP-ELISA、TPPA、胶体金法梅毒检测阳性率

TP-ELISA 与TPPA、胶体金法阳性率分别在0.14≤OD<2组和0.14≤OD<1组中比较，差异有统计学意义(P<0.05)，说明TP-ELISA检测OD值在0.14～2时，TP-ELISA初筛结果与胶体金法、TPPA复检结果存在差异。见表2。

表2　比较不同OD值分组TP-ELISA、TPPA及胶体金法梅毒检测阳性率

(1)(2)TP-ELISA与TPPA分别在0.14≤OD<1组和1≤OD<2组中比较，P<0.05;(3)在0.14≤OD<1组中TP-ELISA与胶体金比较，P<0.05

3讨论

6 584例患者TP-ELISA初筛阳性率为3.2%，与其他地区报道的TP-ELISA初筛阳性率存在差异，可能与梅毒的流行情况存在地域差异如人们对性病防范意识存在差异、各地使用试剂盒的灵敏度及特异性不同有关[4-5]。尽管TP-Ab初筛阳性率在男女性别间比较差异无统计学意义，但40岁以上人群比例较40岁以下人群高，且 61～70岁阳性率最高，可能与老年人易患肿瘤、糖尿病及类风湿关节炎等疾病，导致体内某些特殊成分如甲胎蛋白、嗜异性抗体及类风湿因子等，引起TP-ELISA反应易出现假阳性结果，以及年长人群性行为安全防范意识较弱、IgG类梅毒螺旋体特异性抗体不规范治疗后持续存在等因素有关[6]。目前，胃镜、肠镜及纤支境等侵入性检查的临床应用越来越多。本文结果显示，侵入性检查前与输血及手术前被检者检测TP-Ab阳性率比较差异无统计学意义，说明侵入性检查前同样应进行梅毒抗体筛查，可降低血源性疾病的传播及减少医疗纠纷的发生。

在23例临床确诊梅毒病例中TP-ELISA、TPPA、胶体金法阳性率为100%，TRUST阳性率为65%。前3种方法检测梅毒特异性Ab，该类Ab持续时间长，可终身阳性，而TRUST检测梅毒非特异性抗体，其滴度变化与梅毒分期及治疗有关。TRUST检测呈阴性者多为隐性梅毒或梅毒已治愈，而阳性者多为Ⅱ期梅毒患者[7]。提示在临床检测中，TRUST法可作为梅毒患者疗效观察、判断复发及再感染的手段，而单独用于梅毒的筛查和诊断具有一定的局限性。本研究结果显示， TP-Ab初筛阳性样本经TPPA复检后，两者的阳性符合率为87.68%，刘青梅[8]、马连学等[9]报道的TPPA特异性为100%，说明TP-ELISA因其灵敏度高而存在生物学假阳性，但TP-ELISA便于样本批量检测。因胶体金法与TP-ELISA试剂购自同一厂家，两者包被重组抗原一致，使得该法与TP-ELISA阳性符合率最高达92.42%。由此可见，TP-ELISA进行大规模样本筛查后，应用胶体金法复检及TPPA确证样本中是否存在TP特异性抗体。

TP-ELISA结果0.14≤OD<2时，与TPPA复检阳性率差异有统计学意义，即部分TP-ELISA检测阳性的标本，TPPA复检为阴性，而TPPA是目前被公认为梅毒血清学确证试验，可能因患者存在免疫功能异常、血清中类过氧化物酶增高及血浆蛋白紊乱等可导致TP-ELISA出现生物学假阳性[10]。TP-ELISA结果0.14≤OD<1时，与胶体金复检阳性率差异有统计学意义，可能因血清中TP-Ab含量低于胶体金法检测限时，该方法无法检出有关。而TP-ELISA阳性结果OD≥2时3种方法两两比较均差异无统计学意义，说明TP特异性抗体含量较高时，3种方法均能检出,因而，OD值<2时，可以胶体金法复检和TPPA进一步确证，以排除TP-ELISA的生物学假阳性。

如上所述，与输血、手术等前患者相同，拟行侵入性检查前患者有必要进行梅毒抗体筛查；而在选择梅毒血清学试验时，应以TP-ELISA作为初筛试验，阳性者用TPPA和胶体金法复查，同时TRUST区分是否为TP现症感染，多种方法的联合应用能为临床筛查梅毒提供更准确、全面的实验诊断依据。

4参考文献

[1] Workowski KA, Berman SM. Sexually transmitted diseases treatment guidelines [J]. MMWR Recomm Rep, 2006(11):1-94.

[2] 龚向东,邱晓丽,腾菲,等.2000-2013年中国梅毒流行特征与趋势分析[J].中华皮肤科杂志, 2014(5):310-315.

[3] 文海燕,张华荣,陈正明,等.梅毒检测方法的研究进展[J].中国皮肤性病学杂志, 2012(26)：354-356.

[4] 周守容,邓安彦,陈华平,等.4种梅毒血清学检测方法联合检测的应用价值[J].医学理论与实践, 2012(25):1967-1969.

[5] 杨瑞霞，凌芸，曾慧敏.3种梅毒特异性血清筛选试验的方法学评价[J].检验医学与临床， 2010(7)：239-241.

[6] 张佑贵.酶联免疫吸附试验检测梅毒抗体产生假阳性的原因分析[J].检验医学与临床, 2012(9):122-123.

[7] 陈桂兰,陆燕.输血前梅毒实验室检测技术与应用现状[J].检验医学与临床, 2012(9)：66-67.

[8] 刘青梅.梅毒三种检测方法的比较[J].实用预防医学, 2010(17)：152-154.

[9] 马连学,李艳菊.梅毒螺旋体抗体三种血清学方法应用评价[J].中国实验诊断学, 2010(14)：116-117.

[10]钟娜,张丽芳,郑文夏,等.梅毒血清学三种检测方法的比较[J].中国皮肤性病学杂志, 2009(10)：652-653.

(2016-01-02收稿，2016-04-10修回)

中文编辑： 刘平； 英文编辑： 赵毅

Analysis ofTreponemapallidumAntibody Screening Results and Evaluation of Joint Application of Detection Methods

MIN Shaoju1, XU mei1, TAN Yujie1,2

(1.ClinicalLaboratory,theAffiliatedBaiyunHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550014,Guizhou,China;2.Centrallaboratory,theAffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550001,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To analyze TP-Ab screening positive rate and the necessity of detection before invasion, and evaluate the clinical value of combined detection methods. Methods: TP-ELISA was used to preliminarily screen TP-Ab, and the TP-Ab positive samples were further detected by TPPA, colloidal gold method and TRUST. The differences of TP-Ab screening positive rates were compared in different gender, age, before invasive examination, and before blood transfusion and operation. Clinically diagnosed cases of syphilis were screened out and the differences of TP-Ab positive rates were compared between the 4 kinds of methods and between different OD value segmentation of ELISA test results. Results: The preliminary screening TP-Ab positive rate of 6584 cases was 3.2%. The positive rates were significantly higher in people of above the age of 40 than those in people of under the age of 40 (P<0.05). However, there was no statistically significant difference in positive rates between the male and the female, and between before the invasive detecting and before blood transfusion and surgery before (P>0.05). In 23 clinically diagnosed cases of syphilis, the positive rate of TP-ELISA, TPPA and colloidal gold method was all 100%, but TRUST positive rate was 65%. The positive rate differences were statistically significant in 0.14≤OD<2 and 0.14≤OD<1 group separately (P<0.05) between TP-ELISA, TPPA and colloidal gold method. Conclusion: TP-ELISA method is suitable for TP-Ab screening before invasive detecting, and before blood transfusion and surgery. Combined application of a variety of detection methods can provide more accurate and overall experimental data for clinical diagnose of Treponema pallidum.

[Key words]syphilis; syphilis serodiagnosis； antibodies; enzyme-linked immunosorbent assay; gelatin adsorption test for syphilis; toluidine red unheated serum test

*通信作者E-mail:tanyujie5@163.com

[中图分类号]R759.1

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)06-0714-04

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.021

网络出版时间：2016-06-16网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1712.040.html