气相色谱法测定参芎葡萄糖注射液中甘油含量*

冯广卫， 付思红， 孙　绪， 朱　迪， 郑　林， 李勇军， 王爱民**

(1.贵州医科大学 基础医学院， 贵州 贵阳　550004； 2.贵州医科大学 药学院， 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心， 贵州 贵阳　550004)

气相色谱法测定参芎葡萄糖注射液中甘油含量*

冯广卫1， 付思红2， 孙绪2， 朱迪2， 郑林2， 李勇军2， 王爱民2**

(1.贵州医科大学 基础医学院， 贵州 贵阳550004； 2.贵州医科大学 药学院， 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 建立参芎葡萄糖注射液中甘油含量方法的测定。方法： 采用气相色谱法对参芎葡萄糖注射液中甘油的含量测定进行测定,色谱柱为AT-624毛细管柱、初始140 ℃保持13.5 min、120 ℃/ min升至255 ℃、保持5 min；分流进样，分流比5.0，进样口温度250 ℃，进样量1 μL，FID检测器温度300 ℃，柱流量6.0 mL/min，载气高纯氮气。结果: 成功建立了气相色谱法测定参芎葡萄糖注射液中甘油的方法，所测甘油浓度在1～10 g/L内线性关系良好，平均回收率为102.5%，RSD为2.0%；精密度试验RSD为0.9%，重复性试验RSD为2.4%，稳定性试验RSD为4.2%。结论： 气相色谱测定参芎葡萄糖注射液中甘油含量的方法，操作简便、准确可靠。

[关键词]甘油; 葡萄糖； 参芎； 色谱法,气相

参芎葡萄糖注射液为已上市的注射剂，由丹参提取物、盐酸川芎嗪配伍组成，具有抗血小板聚集，扩张冠状动脉作用，用于闭塞性脑血管病及其它缺血性血管疾病的治疗、疗效确切[1-3]。现行参芎葡萄糖注射液质量标准仅对其中丹参素和盐酸川芎嗪进行定量控制，难以全面控制产品内在质量[4]。课题组前期建立了参芎葡萄糖注射液中6种主要成分的含量测定方法以及指纹图谱测定方法[5-6]。甘油作为参芎葡萄糖注射液中的主要辅料，具有调节渗透压，增溶等作用。有研究指出，高浓度甘油对中枢神经有直接作用和渗透障碍，可引起溶血或其他毒副作用，这在参芎葡萄糖注射液质量标准[WS-10001-(HD-1136)-2002-2012]中并未加以控制[7]。本研究在前期多成分含量测定和指纹图谱研究的基础上，采用气相色谱测定参芎葡萄糖注射液中甘油，为本产品的质量控制提供参考依据。

1仪器与试药

GC-2010Plus气相色谱仪，配置氢火焰离子化检测器，GC-Slution色谱工作站(日本岛津)。甘油分析标准品(阿拉丁试剂公司，含量>99.5%)，二甘醇(分析纯，阿拉丁试剂公司，含量>99.0%)，无水乙醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，8批次参芎葡萄糖注射液均由贵州景峰注射剂有限公司提供。

2方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1对照品储备溶液制备称取甘油对照品2.020 8 g，置100 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得储备液。

2.1.2内标溶液制备精密称取二甘醇150 mg，置50 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得内标液。

2.1.3对照品溶液制备精密量取甘油对照品储备液2 mL，置10 mL量瓶中，精密加入内标液1 mL，加无水乙醇稀释至刻度、摇匀，得每1 mL含甘油4.042 mg的对照品溶液。

2.1.4供试品溶液的制备精密量取供试品5 mL，置10 mL量瓶中，再精密加内标溶液1 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.1.5阴性对照溶液制备 按“参芎葡萄糖注射液”处方配制缺甘油的阴性样品，照2.1.4项下方法制备阴性对照溶液。

2.2色谱条件

色谱柱 AT-624毛细管柱(30 m ×0.53 mm，3 μm)，载气为氮气，流速6 mL/min；柱温140 ℃，保持13.5 min，再以120 ℃/min升至255 ℃，保持5 min；分流进样，分流比10∶1；进样口温度250 ℃；氢火焰离子化检测器，温度300 ℃；进样体积1 μL。

2.3专属性试验

分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液及不加二甘醇(内标物)的供试品溶液，照2.2项下色谱条件测定。结果显示在供试品溶液色谱中，与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，阴性对照溶液色谱无此峰，供试品溶液和阴性对照液在与内标物相同保留时间处也无干扰峰，表明方法专属性良好，见图1。

注：1.二甘醇(内标物)，2.甘油，A.对照品溶液，B.供试品溶液，C.阴性对照溶液，D.不加二甘醇(内标物)的供试品溶液图1　甘油含量测定气相色谱图Fig.1　Gas chromatograms of the determination of glycerol contents

2.4线性试验

精密量取甘油对照品储备液 0.5、1、2、4、8 mL，分别置于5个10 mL量瓶中；分别精密加入内标液1 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得每1 mL含甘油1.010、2.021、4.042、8.083及16.17 mg 的系列工作溶液。分别量取前述工作液1 μL，按照2.2项下的色谱条件测定，记录色谱图。以甘油色谱峰峰面积与内标物(二甘醇)的峰面积比值(Y)为纵坐标，以甘油浓度(X)为横坐标，进行线性回归，回归方程为Y=0.247 1X+0.019 8，r=0.999 9，表明在1.01～16 .2 g/L的甘油浓度范围内线性关系良好。

2.5精密度试验

取参芎葡萄糖注射液，照2.1.4项下方法制备供试品溶液，按2.2项下色谱条件连续测定6次。计算甘油峰面积与内标二甘醇峰面积的比值，测得峰面积比值平均值的RSD为0.90%，表明本方法的精密度良好。

2.6重复性试验

取同一批号参芎葡萄糖注射液，分别精密量取3、5、7 mL，照2.1.4项下供试品溶液的制备方法，每个浓度分别制备3份供试品溶液，共9份，照2.2项下色谱条件测定并计算甘油含量，结果供试品中甘油平均含量为11.68 g/L，RSD为2.4%，表明方法重复性良好。

2.7稳定性试验

取参芎葡萄糖注射液，按2.1.4项下制备供试品溶液，并按2.2项下仪器条件测定并计算含量。分别于室温放置0、1、2、4、8、12及24 h，分别进样测定，结果显示甘油与内标二甘醇峰峰面积比值平均值RSD为1.8%，表明供试品溶液中甘油在24 h内稳定性良好。

2.8回收率试验

精密量取已知甘油含量的参芎葡萄糖注射液2.5 mL，按所取供试品中甘油含量的50%、100%和150%加入甘油对照品，每个浓度制备3份，照2.1.4项下供试品溶液的制备方法制备样品9份，并按2.2项下色谱条件测定并计算含量，结果为甘油的平均回收率为101.0%，RSD为2.3%，表明该方法准确度较好，表1。

表1　甘油回收率试验结果

2.9样品测定

取参芎葡萄糖注射液供试品，按2.1.4项下的制备方法制备供试品溶液各2份，按2.2项下色谱条件测定。按内标法以峰面积比值计算甘油含量，测定结果见表2。

表2　参芎葡萄糖注射液样品甘油测定结果(n=2)

3讨论

根据参芎葡萄糖注射液制备工艺，制得参芎葡萄糖注射液1 000 mL，甘油处方量为10 mL，样品含甘油应为12.6 g/L，从测定结果可见，其含量在11.68～13.70 g/L，即在处方量的90%～110%，说明本研究的生产工艺稳定。由于甘油的沸点高，采用恒温分离供试品甘油时，色谱峰较宽，柱效差，内标物与干扰成分不能分离，本研究在制备方法的基础上[8～10]，采用程序升温，使甘油的色谱峰形正常，柱效提高，获得较好的分离效果。

本文优化了载气流速、色谱柱温度、进样口和检测器温度、分流比等实验参数。成功建立了气相色谱法测定参芎葡萄糖注射液中甘油的测定方法。甘油浓度在1～10 g/L内线性关系良好，平均回收率为102.5%，RSD为2.0%；精密度试验RSD为0.9%，重复性试验RSD为2.4%，稳定性试验RSD为4.2%。本文建立的参芎葡萄糖注射液中甘油的含量测定方法，操作简便、结果稳定、准确可靠好，可应用于参芎葡萄糖注射液质量控制体系。为全面保证参芎葡萄糖注射液的质量奠定基础。

4参考文献

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[4] 参芎葡萄糖注射液[S].WS-10001-(HD-1136)-2002-2012.

[5] 郑林,庞秀清,兰燕宇,等.UFLC法同时测定参芎葡萄糖注射液中6种主要成分[J] .中成药, 2012(7):1276-1279.

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[10]李丹,周明辉,刘莹峰,等. 气相色谱法测定粗甘油中的游离甘油含量[J]. 分析测试学报, 2011(9):1055-1058.

(2016-03-03收稿，2016-05-26修回)

中文编辑： 刘平； 英文编辑： 周凌

Determination of Glycerol in Shenxiong Glucose Injection with Gas Chromatography

FENG Guangwei1, FU Sihong2, SUN Xu2, ZHU Di2, ZHENG Lin2, LI Yongjun2, WANG Aimin2

(1.SchoolofBasicMedicine,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.EngineeringResearchCenterofMinistryofEducationforDevelopmentandApplicationofEthnicMedicineandTraditionalChineseMedicine,SchoolofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To establish the method for determination of glycerol content in Shenxiong glucose injection. Methods: The concentration of glycerol in Shenxiong glucose injection was determined by gas chromatography using AT-624 capillary column. Temperature program for the column was set up as follow: initialize at 140 ℃ for 13.5 minutes, then rise to 255 ℃ by rate of 120 ℃ per minute and keep at 255 ℃ for 5 minutes.Shunt sample with the split ratio of 5.0, injection temperature at 250 ℃, sample volume 1 μL, FID detector temperature was 300 ℃, flow rate 6.0 mL/min, and high purity nitrogen as carrier gas. Results: The reliable and accurate method for determination of glycerol in Shenxiong glucose injection by gas chromatography was established, which show a good linear relationship in the concentration range of 1 g/L～10 g/L. The average recovery rate was 102.5% with RSD of 2.0%.Precision test RSD was 0.9%, duplicate test RSD was 2.4%, and stability tests RSD was 4.2%. Conclusion: A facile, accurate and reliable method was established for determination of glycerol, which can be used as quality control method on Shenxiong glucose injection.

[Key words]Glycerol; glucose; Shenxiong; chromatography, gas

*[基金项目]贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目[黔科合重G字(2013) 4001]； 贵州省教育厅项目黔教合协同创新字(2013) 04、黔教社发[(2013) 419号]

[中图分类号]R286

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)06-0664-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.010

**通信作者 E-mail:gywam100@163.com

网络出版时间：2016-06-16网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1639.016.html