尿培养产ESBLs大肠埃希菌的耐药特点及对磷霉素的敏感性分析

许元元，曹小利，程　莉，周万青，张之烽，沈　瀚



尿培养产ESBLs大肠埃希菌的耐药特点及对磷霉素的敏感性分析

许元元1，曹小利2，程莉2，周万青2，张之烽2，沈瀚2

[摘要]目的：分析尿培养产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药特点，了解磷霉素对产ESBLs大肠埃希菌的体外抗菌活性，并与其他种抗菌药物进行比较。方法：从菌株库复苏2010-2014年尿培养大肠埃希菌821株，使用ESBLs的表型确认实验筛选产ESBLs菌株，用K-B法测定磷霉素等15种抗菌药物对其的体外抗菌活性。结果：821株大肠埃希菌中465株产ESBLs，对亚胺培南敏感性较高(91.4%)，其次是磷霉素(88.0%)，然而对左氧氟沙星、青霉素类和头孢菌素类抗生素的敏感性较差。结论：碳青霉烯类抗生素依然是敏感率最高的药物，磷霉素对尿培养产ESBLs大肠埃希菌有良好的体外抗菌活性，具有一定的临床应用价值。

[关键词]大肠埃希菌；超广谱β内酰胺酶；耐药性；磷霉素

尿路感染是常见的感染性疾病，大肠埃希菌是引起尿路感染最常见的致病菌[1]。近年来，随着抗菌药物的广泛应用，产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌检出率不断升高，往往导致青霉素类、单环类和第二、三代头孢菌素等药物的治疗无效。因此，如何选用细菌耐药率低、疗效好、不良反应少的抗生素是治疗尿路感染的挑战性课题。目前，临床多使用酶抑制剂复合制剂和碳青霉烯类抗生素给予经验性治疗，而碳青霉烯耐药菌的频繁出现，导致细菌的耐药性更加严重。国内外专家开始审视传统抗菌药物作为多重耐药菌感染备用治疗手段的可能性，其中磷霉素备受关注。近几年国内外报道[2-4]指出磷霉素对产ESBLs的革兰阴性菌具有良好的体外抗菌活性。本研究对临床尿液标本中分离的465株产ESBLs的大肠埃希菌进行了药物敏感性(药敏)试验，现将结果作一报道。

1材料与方法

1.1菌株来源从南京鼓楼医院菌株库复苏2010-2014年临床尿液标本非重复分离的大肠埃希菌821株，其中产ESBLs大肠埃希菌465株。

1.2仪器及试剂ATB半自动微生物鉴定仪，Vitek 2 compact全自动细菌鉴定仪及其配套GN鉴定卡和GN13药敏卡(法国生物梅里埃公司)。药敏纸片为Oxoid公司产品，包括氨苄西林/舒巴坦、阿米卡星、头孢他啶、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟、头孢噻肟/棒酸)、头孢呋辛、头孢西丁、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、哌拉西林、头孢吡肟、左氧氟沙星、替卡西林/克拉维酸、氨曲南。磷霉素药敏纸片(FOS 200 μg/葡萄糖-6-磷酸50 μg)购于杭州微生物试剂有限公司。MH琼脂平板(法国生物梅里埃公司)。

1.3菌种鉴定所有菌株用ATB半自动微生物鉴定仪、Vitek 2 compact全自动细菌鉴定仪及其配套的革兰阴性(GN)鉴定卡进行细菌鉴定。

1.4ESBLs的表型确认实验采用美国临床实验室标准化协会规定的标准双纸片法测定[5]。对5年来复苏的细菌同时测定头孢他啶、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟、头孢噻肟/棒酸纸片的抑菌环大小，任意一组含酶抑制剂复合制剂的抑菌环直径大于单药者5 mm以上，即确证该菌产ESBLs。

1.5药敏试验用K-B法测定15种抗菌药物对465株产ESBLs大肠埃希菌的抑菌环直径。根据2014年美国临床实验室标准化协会的标准进行结果判读。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922。

2结果

2.1ESBLs的检出情况本院菌株库中821株大肠埃希菌自2010-2014年的株数分别是181株、35株、314株、158株、133株，经确认实验，产ESBLs的菌株有465株(56.6%)，按年度分布分别是91(50.3%)株、23(65.7%)株、159(50.6%)株、107(67.7%)株、85(63.9%)株。

2.2尿培养产ESBLs大肠埃希菌的耐药特点465株产ESBLs的大肠埃希菌对临床常用的15种抗菌药物的药敏试验结果见表1。结果显示，产ESBLs的大肠埃希菌对亚胺培南敏感性较高(91.4%)，其次为磷霉素(88.0%)；而对青霉素类和头孢菌素类及左氧氟沙星的敏感性较差，耐药率>60%。

2.3磷霉素耐药情况5年中所检测出的产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素的耐药率相对较稳定，其耐药率在10%左右，结果见表2。

3讨论

本研究发现，产ESBLs大肠埃希菌检出率达56.6%，与胡付品等[6]报道相符。产ESBLs大肠埃希菌对喹诺酮类，头孢二、三代抗生素，氨曲南等药物的耐药率较高，这与以往的文献[7]报道基本一致。也表明用于治疗尿路感染的临床药物在不断减少，迫切需要开发新的药物及重新评估现有的药物以缓解临床治疗的困境。

表1465株产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素等15种抗菌药物的敏感性分析

表22010-2014年我院尿培养中产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素的耐药率

磷霉素是1969年从链霉菌中分离得到的一种磷酸衍生物，具有独特的化学结构，能够不可逆地抑制二磷酸尿嘧啶-乙酰葡糖胺转移酶活性，导致细菌细胞壁合成的第一步被阻断，引起细菌裂解死亡[8]。国内专家研究指出磷霉素主要以原型经肾脏排泄，故尿中药物浓度较高，维持有效浓度时间长，因此可作为泌尿感染的选择药物之一。多家临床报告磷霉素治疗尿路感染取得好的效果，不良反应为较轻微的腹泻[9-10]。磷霉素由于对耐药菌仍然具有很好的抗菌活性、无交叉耐药性以及与其他抗菌药物联用时可呈现显著的协同作用的特性[11]，越来越受到关注。本研究发现，我院2010-2014年产ESBLs的大肠埃希菌对磷霉素的耐药率在10%左右，且连续5年来的体外抗菌活性相对较稳定，这与国内外研究[10，12]结果接近，提示磷霉素治疗产ESBLs大肠埃希菌泌尿系感染具有一定疗效。

综上所述，产ESBLs的大肠埃希菌已成为尿路感染的主要致病菌，碳青霉烯类抗生素依然是首选药物，同时考虑到磷霉素的药理学等特点及优势，临床医生在治疗尿路感染时应考虑使用磷霉素代替碳青霉烯类药物，以减缓多重耐药菌的进一步发展。

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(本文编辑刘璐)

The resistant characteristics and sensitivity analysis of ESBLs Escherichia coli produced by urine culture

XU Yuan-yuan1,CAO Xiao-li2,CHENG Li2,ZHOU Wan-qing2,ZHANG Zhi-feng2,SHEN Han2

(1.DepartmentofMedicalLaboratory,GeneralHospitalofWanbeiCoal-ElectricGroup,SuzhouAnhui234011;2.DepartmentofMedicalLaboratory,TheAffiliatedDrumTowerHospitalofNanjingUniversityMedicalSchool,NanjingJiangsu210008,China)

[Abstract]Objective:To analyze the resistant characteristics of ESBLs Escherichia coli produced by urine culture,investigate its antibacterial activity in vitro and compare with other antibacterial drugs.Methods:A total of 821 strains were cultured from the strain library,the ESBLs Escherichia coli produced by urine culture were screened according to the phenotype of ESBLs,the antibacterial activities in vitro of 15 antimicrobial agents,including fosfomycin,were detected by K-B method.Results:Among the 821 Escherichia coli strains,the sensitivities of the 465 ESBLs Escherichia coli strains produced by urine culture to imipenem were high(91.4%),following by fosfomycin(88.0%),the sensitivities of which to levofloxacin,penicillin and cephalosporin were low.Conclusions:The sensitivity of carbapenem is the highest drug,the antibacterial activity in vitro of fosfomycin to ESBLs Escherichia coli produced by urine culture is good,which has certain clinical value.

[Key words]Escherichia coli;extended spectrum beta-lactamases;resistance;fosfomycin

[文章编号]1000-2200(2016)03-0380-03·检验医学·

[收稿日期]2015-09-05

[作者简介]许元元(1984-)，女，主管技师.

[中图法分类号]R 378.21

[文献标志码]A

DOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.03.033

[作者单位] 1.皖北煤电集团总医院 检验科，安徽 宿州 234011；2.南京大学附属鼓楼医院 检验科，江苏 南京 210008