鼻敏康颗粒对肺气虚变应性鼻炎大鼠IL-4、IL-12的影响

孙晋茜，毋桂花（山西中医学院，山西太原030024）



鼻敏康颗粒对肺气虚变应性鼻炎大鼠IL-4、IL-12的影响

孙晋茜，毋桂花
（山西中医学院，山西太原030024）

摘要目的：探讨鼻敏康颗粒对肺气虚变应性鼻炎（AR）大鼠白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素12（IL-12）水平的影响，从而分析鼻敏康颗粒的作用机制。方法：建立肺气虚变应性鼻炎大鼠模型，采用酶联免疫吸附实验检测大鼠鼻黏膜中IL-4、IL-12的含量，观察鼻敏康颗粒对鼻黏膜T淋巴细胞的影响。结果：与模型对照组比较，西药组与中药治疗组IL-4水平均降低，IL-12水平均升高，差异具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结论：鼻敏康颗粒可下调肺气虚AR大鼠鼻黏膜IL-4水平、上调IL-12水平，通过平衡细胞因子水平发挥疗效。

关键词变应性鼻炎；鼻敏康颗粒；肺气虚；IL-4；IL-12

变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）属IgE介导的I型变态反应，以发作性喷嚏、流涕和鼻塞为主要症状［1］。AR本身虽非严重的致命性疾病，但因其病情反复，若长期不愈，可导致变应性鼻窦炎、鼻息肉、哮喘和慢性支气管炎等一系列呼吸道并发症，严重影响人们的健康和生活质量［2-3］。所以，如何提高AR的防治水平，减少复发频率，已引起社会各界的广泛关注，成为迫切需要解决的社会问题。中药制剂治疗AR疗效肯定，但作用机制尚未明确。为进一步研究鼻敏康颗粒治疗AR的机制，本文从细胞因子水平入手，以肺气虚型AR大鼠为研究对象，观察鼻敏康颗粒对大鼠鼻黏膜白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素12（IL-12）水平的影响，为鼻敏康颗粒的临床应用提供实验依据和支持，现报道如下。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，雌雄各半，SD大鼠60只，2月龄，体质量（200±20）g，以标准大鼠饲料喂养。

1.1.2仪器和药物超净工作台（型号：SW-CJ-1F），显微镜（型号：Olympus AX80），烟熏箱（100 cm ×85 cm×85 cm，容积为72 L）。卵白蛋白（OVA）（美国SIGMA公司生产，北京索莱宝科技有限公司分装），脂多糖（LPS）（美国Sigma公司生产），Al（OH）3粉末（广州化学试剂厂生产），PBS（磷酸盐缓冲液）（上海亨代劳生物有限公司），甲醛溶液、戊二醛（上海化学试剂公司生产），试剂盒（上海森雄科技实业有限公司），红金龙香烟（湖北中烟工业有限责任公司）。鼻敏康颗粒（山西医科大学第一附属医院制剂室提供，江阴天江药业有限公司生产），氯雷他定片（山西中医学院附属医院药房提供，上海先灵葆雅制药有限公司生产）。

1.2实验方法

1.2.1分组大鼠自由喂养1 w后，将大鼠按体质量随机分为4组，每组15只，即空白组、模型对照组（肺气虚+AR模型）、中药治疗组（鼻敏康颗粒）、西药组（氯雷他定）。

1.2.2造模先建立肺气虚模型，再进行AR鼻炎模型的复制。

肺气虚模型的建立：参照教材《实用中医证候动物模型学》“烟熏肺气虚造模法”［4］，具体如下：除空白组不作处理外，其余组（模型对照组、中药治疗组和西药组）分别于第1天将LPS 200 μg/200 μL注入大鼠气管内，第2～13天每日上午将大鼠置于容积72 L烟熏箱内用红金龙牌香烟熏0.5 h；第14天时再次注入同样剂量LPS，第15～28天每日上午同样方法烟熏大鼠0.5 h。观察大鼠的食量、活动量均减少，体质量增幅减轻，蜷缩拱背，呼吸急促，频发性咳嗽，行动迟缓等提示造模成功。

AR鼻炎模型的复制：参照目前国内“卵白蛋白注射及鼻腔黏膜刺激造模法”［5］，结合预实验，确定最佳方式如下：①基础致敏：以0.3 mg OVA+30 mg Al（OH）3作佐剂，配入1 mL NaCl制备成的混悬液对大鼠行腹腔注射基础致敏，隔日1次（即第1天，第3天，第5天，第7天，第9天，第11天，第13天），共7次；②激发（强化致敏）：从第14天开始，以1%OVA滴鼻，每次50 μL，1次/d，连续14 d。空白组以生理盐水腹腔注射及滴鼻处理，方法及步骤不变。

1.2.3给药全身致敏造模结束后予以药物治疗，西药组和中药治疗组根据“实验动物人鼠剂量换算方法计算用药量”，分别给予大鼠成人等效量的10倍灌胃（10g/kg），每日1次，连续7 d。空白组和模型对照组用同等剂量生理盐水灌胃。

1.2.4鼻黏膜分离处理及检测各组大鼠在滴鼻结束后，麻醉（10%水合氯醛腹腔注射）游离上颌骨，沿鼻中线将鼻腔剪开，充分暴露鼻中隔，剥取鼻黏膜并称重。加入一定量的PBS（pH=7.4），用匀浆器将标本匀浆充分。离心20 min左右（2 000～3 000转/min）。收集上清，分装后一份检测IL-4含量、IL-12含量，其余冷冻备用。

1.3统计学方法

采用SPSS19.0统计软件，计数资料用χ2检验，计量资料采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结　果

各组大鼠鼻黏膜IL-4、IL-12含量比较，结果见表1。

表1　大鼠鼻黏膜IL-4、IL-12含量比较　（?±s）

由表1可见，与模型对照组比较，中药治疗组与西药组IL-4含量降低，IL-12含量升高，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），且中药治疗组的疗效较西药组更显著。

3讨　论

变应性鼻炎（AR）又称过敏性鼻炎，是耳鼻喉科的常见病、多发病。现代医学认为引起疾病的直接原因是变应原，同时还与遗传、环境因素相关。目前其发病机制尚未完全阐明，大量研究表明Th1/Th2的平衡在机体免疫调节中起关键性作用，Thl/Th2细胞失衡是AR发病的生物学基础［6］。IL-4由活化的Th2细胞产生，被公认为是参与AR发生过程中最重要的细胞因子，它可通过刺激B细胞生长促进IgE的合成，激活中性粒细胞和巨噬细胞的协调影响IgE分泌，加强Th2的促炎症功能，导致变态反应炎症。IL-12是由单核细胞、B淋巴细胞对细胞内寄生物发生反应而产生的一种异源二聚体分子，具有广泛的免疫活性，并能促进炎性组胺释放减少，是AR发病过程中重要的抗炎因子，最终抑制AR发生［7-8］。因此，细胞因子水平变化在AR发生过程中起着不同的调节作用。

变应性鼻炎根据临床症状与祖国医学的“鼻鼽”“鼻嚏”相类似，中医认为本病多由脏腑亏损，正气虚弱，腠理疏松，外邪侵袭所致。风寒之邪乘虚犯鼻，肺气失宣，气不摄津，津水外溢，而致鼻痒、喷嚏、流清涕，因此其病变部位在肺。刘华平等［9］搜集整理“万方数据库”关于AR的相关文献，对该病的辨证进行频数统计分析，纳入的102篇文献中以肺气亏虚型最多。鼻敏康颗粒是导师毋桂花副教授多年总结的有效经验方，由黄芪、防风、白术、白芷、藿香、陈皮、

蝉蜕、细辛、五味子组成，方中黄芪为君益气固表，臣以白术补气健脾，防风、白芷散风通窍，细辛温肺化饮、宣通鼻窍，佐用蝉衣搜风止痒，五味子敛肺止涕，甘草调和诸药，共奏补益肺脾、祛风止痒之功。本方应用整体观念与专病专方结合，突出了中医药治疗肺气虚变应性鼻炎的优势。

本实验结果显示：模型对照组大鼠鼻黏膜IL-4含量检测值较空白组高，IL-12含量检测值较空白组低，这种改变提示AR的发生可能与IL-4升高、IL-12水平降低有关，证实了鼻黏膜中Th1/Th2细胞平衡遭到破坏，Th1/Th2细胞分泌的炎性因子比例失调是导致AR发病的主要因素之一。而中药可下调鼻黏膜IL-4水平，上调IL-12水平，且略优于西药。鼻敏康颗粒从鼻黏膜细胞因子水平的角度出发，通过平衡Th1/Th2细胞水平，达到治疗AR的目的，为鼻敏康颗粒临床应用提供了一定的实验依据。

参考文献

［1］中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会，中华医学会耳鼻咽喉科分会.变应性鼻炎诊治原则和推介方案［J］.中华耳鼻咽喉科杂志，2005，40 （3）：166-167.

［2］Bousquet N，Khaltaev A A.Allergic rhinitis and its impact on Asthma（ARIA）2008［J］.Allergy，2008（63）：8-160.

［3］门九章，李孝波.麻芥冲剂治疗大鼠变应性鼻炎的实验研究［J］.山西中医学院学报，2007，8（1）：20.

［4］陈小野.实用中医症候动物模型学［M］.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993：28.

［5］宋建明，黄秀清，林燕慧，等.变应性鼻炎大鼠模型的建立［J］.吉林大学学报：医学版，2012，38（6）：1 152-1 155.

［6］魏欣.变应性鼻炎的发病机制［J］.海南医学，2011，22（10）：8-11.

［7］彭华，陈勇挺，汪建，等.白介素4与白介素12在变应性鼻炎、哮喘和特应性皮炎中的表达及意义［J］.广东医学，2010，31（6）：727-728.

［8］魏燕高，肖喜艳，巴云鹏.变应性鼻炎患者血清IL-2、IL-4及IL-12含量及意义［J］.河南医学研究，2012，21（1）：88-92.

［9］刘华平.过敏性鼻炎-哮喘综合征中医证型分布研究初探［J］.中医药导报，2011，17（8）：37-38.

（编辑：梁葆朱）

The effects of Biminkanggranules on expressions of IL-4 and IL-12 in nasal mucosas of allergic rhinitis rat models with deficiency of lung-qi

Sun Jinqian，Wuguihua
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

AbstractObjective：To observe the effect of Biminkanggranules on interleukin 4（IL-4），interleukin 12（IL-12）of allergic rhinitis（lung-qi deficiency）rats and analyze the mechanism of Biminkanggranules.Methods：Rat models of allergic rhinitis with lung-qi deficiency were established，and the contents of IL-4 and IL-12 in nasal mucosa of rats were detected by enzyme linked immunosorbent assay.Results：Compared with the modelgroup，IL-4 levels were decreased，IL-12 levels were elevated in Western medicinegroup and Chinese medicinegroup，the difference is statistically significant（P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion：Biminkanggranules can down-regulate the level of IL-12 and up-regulate the level of IL-4.It plays the role on allergic rhinitis（lung-qi deficiency）through balancing cytokine levels.

Key wordsallergic rhinitis；Biminkanggranules；lung-qi deficiency；IL-4；IL-12

中图分类号：R285.5

文献标识码：A

文章编号：1671-0258（2016）02-0020-03

［基金项目］山西省自然科学基金（2013011055-6）

［作者简介］孙晋茜，在读硕士，E-mail：sjx351452671@qq.com

［通讯作者］毋桂花，副教授，硕士研究生导师，E-mail：wgh0306@163.com