过敏性休克死亡豚鼠IgE、P物质水平及其法医学意义

谢洪波

(南昌铁路公安局，江西 南昌 330002)

许小明

(南昌大学基础医学院，江西 南昌 330006)



过敏性休克死亡豚鼠IgE、P物质水平及其法医学意义

谢洪波

(南昌铁路公安局，江西 南昌 330002)

许小明

(南昌大学基础医学院，江西 南昌 330006)

[摘要]目的：探讨IgE、P物质在过敏性休克死亡豚鼠脏器中的表达及法医学意义。方法：实验选取成年健康豚鼠20只，以数字表法随机各抽取10只豚鼠，分为观察组与对照组，观察组进行过敏原注射制造模型(过敏性休克死亡)，对照组进行注射生理盐水后使用脊椎脱臼法处死，解剖两组尸体，收集标本固定后，以免疫组化法测定IgE、P物质表达情况并进行比较。结果：观察组过敏原注射1min内出现过敏性休克，30min死亡率为80%(8只)。对照组未有变化；解剖两组尸体，观察组存在心腔扩张、喉头水肿表现，镜检显示肺泡壁薄、肺泡扩张。对照组未有变化；观察组的IgE物质含量和P物质含量较对照组高，差异存在统计学意义(P<0.05)。结论：IgE、P物质在过敏性休克死亡豚鼠脏器中的表达较高，以免疫组化法测定IgE、P物质表达情况，可为过敏性休克死亡提供依据。

[关键词]过敏性休克；IgE；P物质；脏器；法医学

为探讨IgE、P物质在过敏性休克死亡豚鼠脏器中的表达水平及其法医学意义，笔者选取成年健康豚鼠，建立过敏性休克模型，测定IgE、P物质含量。现报道如下。

1材料与方法

1.1材料

实验选取成年健康豚鼠20只，随机分为观察组、对照组各10只，无性别限制，重量155～198g。

多人混合血清、冰醋酸液(0.5%)、电阻培养箱、高速离心机、光学显微镜、发光免疫分析系统、制片仪器。

1.2方法

制备致敏原注射液，取多人混合血清，离心(1500r/min)，取上清液，生理盐水稀释(1∶9)为致敏原，液氮(-70℃)保存；动物致敏，观察组给予致敏原注射(0.2mL)，位置为右侧后爪内。对照组给予注射生理盐水(0.2mL)。置于相同环境下饲养观察21d；动物发敏，第29天，观察组尾静脉注射致敏原注射液(1mL)，对照组给予注射生理盐水(1mL)。观察组60min内未死亡的再次注射致敏原。对照组使用脊椎脱臼法处死；样本处理，两组标本死亡冷藏48h内，或冷冻7d内，选取标本组织(脾、胃、肺、气管等器官组织)甲醛 (4%)固定→he染色→切片→镜检→脱蜡→盐酸分离→水洗→脱水处理；免疫组化处理(IgE、P物质)，免疫组化法[1]测定血清IgE含量：收集死亡后观察组和对照组标本右心血，静置，每分钟1500r离心，收集上清液，置于低温下(-70℃)保存，依照ELISA法实施检测[2]，测定P物质含量。

2结果

2.1豚鼠死亡情况和重要脏器病理学变化

观察组过敏原注射1min内出现过敏性休克，30min死亡率为80%(8只)。对照组未有变化。

表1　两组IgE、P物质含量比较

注：因本实验中试剂盒灵敏度是1U/mL，故0代表<1U/mL。

解剖两组尸体，观察组存在心腔扩张、喉头水肿表现，镜检显示肺泡壁薄、肺泡扩张。对照组未有变化。

2.2两组IgE物质含量和P物质含量

观察组IgE物质含量和P物质含量较对照组高，差异存在统计学意义(P<0.05)。见表1。

3讨论

过敏性休克为超敏反应，症状严重，极易猝死，临床较常见。药物及生物制剂等是导致过敏性休克的主要致病原因，其中青霉素为引起过敏性休克的主要药物。由于敏性休克和多种因素相关，患者极易死亡，但很难找到死亡证据，给法医学鉴定带来不便[3]。过敏性休克发生机制为：抗原刺激作用，IgE类抗体产生(B细胞)，抗体结合受体，出现过敏状态。当机体受再次接触到抗原，会将肥大细胞激活，产生组胺等生物活性物质，出现变态反应(Ⅰ型)。目前临床主要依靠实验测定，靶向目标为IgE抗体、释放因子(肥大细胞)等，需要注意选择靶向目标，部分靶向目标(组胺等)，易被降解、自溶，无法得到准确结果。使过敏性休克死亡诊断难度增加。高效、准确诊断敏性休克死亡，成为相关领域研究重点[4]。

过敏性休克的关键介质为IgE抗体。研究显示，正常健康人的血清内，IgE含量极少，普通仪器不易检出[5]。放射免疫法检测，当含量>800ng/mL时即判断异常。与正常健康人相比，血清IgE抗体含量上升，即判断为发生超敏反应。故临床根据血清IgE抗体总含量诊断过敏性疾病。但临床不能单纯依靠检测IgE水平来判断过敏性休克，还需要参考其他指标综合判断。

P物质为神经肽，在神经系统中易被检测到，广泛参与唾液分泌、痛觉传导、诱发炎症等反应。研究发现，神经递质P物质具有化学表达作用。过敏性休克机体内肥大细胞可分泌细胞因子、组胺，在过敏反应中发挥重要作用，影响神经元P物质释放，同时此类神经肽可导致神经源性炎症，继而产生炎性反应。可见，过敏性休克猝死涉及多个反应，激活免疫系统、神经系统，进行免疫神经调节。

IgE、P物质联合检测在过敏性休克诊断中具有重要意义。法医学判断过敏性休克，以病史、表现等因素为参考，结合实验检测分析，明确是否存在过敏反应，是否发生严重休克及关联性。IgE检测可明确是否存在过敏反应，但不能单独作为诊断依据，且IgE无法确定是否发生休克以及过敏与休克的关系。对过敏性休克鉴定具有一定局限性。过敏反应影响P物质含量，且与休克严重程度明显相关，和过敏与休克均有关联。本研究显示，给予过敏原注射制造过敏性休克死亡模型的观察组与给予注射生理盐水后使用脊椎脱臼法处死的对照组比较，观察组过敏原注射1min内出现过敏性休克，30min死亡率为80%(8只)。对照组未有变化；解剖发现，观察组存在心腔扩张、喉头水肿表现，镜检显示肺泡壁薄、肺泡扩张。对照组未有变化；观察组的IgE物质含量和P物质含量较对照组高(P<0.05)。

综上所述，IgE、P物质在过敏性休克死亡豚鼠脏器中的表达较高，以免疫组化法测定IgE、P物质表达情况，可为过敏性休克死亡提供法医学依据。

[参考文献]

[1]刘勇，李航，余舰.IL-4与IL-10在过敏性休克中的表达及意义[J]. 重庆医学, 2014, 43(15):1898～1900.

[2] 王红利.白细胞介素-4和白细胞介素-13基因多态性对哮喘患儿IgE表达的影响[J]. 儿科药学杂志, 2015, 22(4):7～9.

[3] 米丽，高卫民，杜中波,等. 大鼠过敏性休克死后血清IgE、类胰蛋白酶的变化[J]. 法医学杂志, 2015, 31(3): 181～184.

[4] 王晓丽，王夕娟.点刺试验与血清特异性IgE检测在蒿属花粉症中的诊断价值[J]. 潍坊医学院学报，2016, 38(1):57～59.

[5] 郭瑜修，蓝柳婷，冯尚克. 桂西及其周边地区变应性鼻炎儿童过敏原特异性IgE检测分析[J]. 右江民族医学院学报, 2016,38(1):63～65.

[编辑]刘阳

[收稿日期]2016-02-08

[作者简介]谢洪波(1982-)，男，主检法医师，硕士生，主要从事法医病理学和法医临床学的检案与研究工作，songjiaoyingg@163.com。

[中图分类号]R363；R89

[文献标志码]A

[文章编号]1673-1409(2016)18-0006-02

[引著格式]谢洪波, 许小明. 过敏性休克死亡豚鼠IgE、P物质水平及其法医学意义[J].长江大学学报(自科版)，2016，13(18)：6～7.