慢性乙型肝炎患者血清中颗粒溶素的变化及临床意义

柴晓哲 张雪华

慢性乙型肝炎患者血清中颗粒溶素的变化及临床意义

柴晓哲 张雪华

目的 探讨慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者血清中颗粒溶素含量变化的临床意义。方法 利用酶联免疫法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定20例CHB患者和40例健康人血清中颗粒溶素含量的变化，并进行相关性分析。结果 CHB组血清中颗粒溶素含量明显高于健康对照组（P＜0.01）。相关性分析表明，CHB组血清中颗粒溶素水平与乙肝患者HBV-DNA、血清谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平均无明显相关性。结论 颗粒溶素可能参与CHB的疾病进程，这为研究CHB的病情监控和有效治疗提供了新的线索。

慢性乙型肝炎；颗粒溶素；ELISA

乙型肝炎是一个严重的公共卫生问题。全球60亿人口中，约一半人口生活在高流行区，约20亿人证明有感染，3～4亿人为慢性感染，据估计全世界每年有超过100万人死于肝炎引发的肝癌[1-2]。中国是乙肝病毒的高流行区之一，其年发病数约66万例，仍然是一个不可小觑的公共卫生问题。

颗粒溶素(granulysin, GRA)是近年来发现的一种重要的溶细胞颗粒蛋白，属于皂素样蛋白(SAPLIP)家族成员，与穿孔素和颗粒酶共同表达于细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞中，参与多种免疫反应[3]。现有研究发现，GRA与多种感染性疾病如结核杆菌感染、病毒感染、细菌感染性疾病中具有非常重要的作用[4]。有研究证实GRA基因表达水平与急性乙型肝炎患者血清中谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)呈正相关[3]，提示GRA表达与急性乙型肝炎疾病进程相关，检测GRA有助于监测患者体内细胞免疫,目前GRA与慢性乙型肝炎病毒变化尚未见报道，GRA在慢性乙型肝炎病毒患者中的表达尚未阐明。有鉴于此，我们研究了慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中GRA含量的变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 CHB组选择2012年8月～2013年7月在苏州市第五人民医院住院的20例CHB患者，男16例，女4例，年龄27～63岁，平均年龄（41.30±11.04）岁。诊断标准参照2010年中华医学会肝病学分会、感染病学分会联合修订的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]。纳入标准：符合慢性乙型肝炎诊断标准者。排除标准：所有患者均排除了甲、丙、丁、戊型肝炎病毒重叠感染以及伴有心、肾、肺、内分泌、血液、免疫、代谢及胃肠道严重原发病者或精神病患者；合并其他病毒性肝炎或肝硬化、肝癌患者；免疫性肝病患者；长期饮酒史且每周饮酒折合酒精量超过40克者。健康对照组为40例健康体检者，其中男30例，女10例，年龄26～69岁，平均年龄（40.80±9.79）岁。2组性别、年龄等比较差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 观察指标 空腹采集静脉血5 mL，离心得到血清，放-80℃存放备用。采用酶联免疫法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）试剂盒（CUSABIO，产品编号CSB-E 00936 h）检测CHB患者和健康人血清中GRA的含量。

1.3 统计学方法 采用SPSS 14.0软件进行统计学分析。计量资料采用“s”表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。同时用Pearson法对GRA水平和HBV-DNA、ALT、AST的相关性进行分析。

2 结果

2.1 CHB组和健康对照组血清中GRA含量的变化CHB组血清中GRA的含量为（30.68±18.80）ng/mL，显著高于健康人对照组的（9.32±6.07）ng/mL，差异具有统计学意义(P=0.003)。此外，统计学结果表明，大三阳组和小三阳组HBVDNA、ALT、AST和GRA含量比较差异无统计学意义。见表1。

表1 CHB组中血清中GRA含量的变化

2.2 相关性分析 相关性分析结果显示，GRA与乙肝患者HBV-DNA、血清ALT、AST水平均无明显相关性（HBVDNA：P=0.816；ALT：P=0.888；AST：P=0.826）。

3 讨论

颗粒溶素是存在于人类细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞胞浆颗粒中的溶细胞蛋白质分子,它是在研究效应T淋巴细胞表达时通过负杂交方法而发现的[4-5]。T细胞受体激活后3～5天,静止T淋巴细胞转变为辅助性T细胞和细胞毒性T细胞,此时GRA开始表达。GRA定位于胞质颗粒中,具有溶解酶活性,可以溶解细菌、病毒、真菌、寄生虫等多种病原体，是参与机体细胞免疫的重要效应分子。

在乙肝病毒感染后，肝脏乙肝病毒的清除主要依靠体内免疫毒性细胞，而这个过程常常通过两个独立的通路：凋亡通路和穿孔素通路[6]。穿孔素通路的主要毒性颗粒成分包括穿孔素、GRA和颗粒酶。GRA主要存在于细胞毒性T细胞和自然杀伤细胞中，并且能够促进炎症反应[3]。颗粒溶素损伤细胞的机制可能是当颗粒溶素和靶细胞带负电荷的线粒体膜脂质结合导致溶解活性发生，并诱导细胞色素C的释放和线粒体功能的下降[4]。近年来，越来越多的研究发现，GRA在多种感染性的疾病如多发性肌炎、皮肌炎、急性乙型肝炎中起重要的作用[7]。钱垮等研究发现，急性期乙肝患者PBMC颗粒溶素表达水平显著高于体检健康者和HBV携带者缓解期患者[3]，但尚未见CHB患者中GRA水平的研究。我们对20例CHB患者和40例健康人血清中的GRA水平进行了检测，结果显示，CHB患者中GRA的水平显著高于健康人，提示GRA高表达不仅存在于急性乙型肝炎中，在CHB中GRA也发挥了一定的作用。异常升高的GRA可能与肝脏细胞中携带负电荷的线粒体膜脂质结核，从而释放细胞色素C，导致肝脏细胞线粒体功能的降低。同时，我们也发现，CHB患者中GRA水平与乙肝患者HBV-DNA、血清ALT、AST水平均无明显相关性，这可能与我们的样本量较小有关。

[1] 杨丽萍.浅谈乙型肝炎分子流行病学研究方法[J].科技创新与应用，2013(3):5.

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.5.007

2012年苏州市科教兴卫项目 （kjxw 2012031）

江苏 215007 苏州市第五人民医院 （柴晓哲 张雪华）