凤尾鸡冠花叶片快繁体系的建立

王霞 刘晓丹 王欢

摘要：为建立凤尾鸡冠花叶片快繁体系，以凤尾鸡冠花叶片为外植体，研究6-BA、NAA对愈伤组织和不定芽诱导以及NAA对不定根分化的影响。结果表明：凤尾鸡冠花叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.00毫克/升+NAA 0.50毫克/升，不定芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.50 毫克/升+NAA0.20 毫克/升，不定根分化的最佳培养基为1/2MS+NAA0.10毫克/升。

关键词：凤尾鸡冠花；叶片；6-BA；NAA；快繁

基金项目：吉林省教育厅“十二五”科学技术研究（吉农院合字[2013]第471号）

中图分类号： S685 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2016.19.032

凤尾鸡冠花又名鸡头、手花、芦花鸡冠等，为苋科青葙属一年生草本植物。作为常见的食药两用花卉，其富含蛋白质、膳食纤维、维生素、食用色素、黄酮类化合物等多种营养物质，具有止血、止痢、清热解毒和提高机体免疫力等功能[1-3]。凤尾鸡冠花花穗顶生，花色艳丽，分红色、黄色和白色不等，花期较长，是最常见的园林观赏花卉之一[4]。凤尾鸡冠花为异花授粉植物，因此很容易出现品种间的混杂，导致品种退化，加上传统的种子栽培方式繁殖系数低，周期长，进而影响了其观赏价值，增加了繁育成本[1]。建立凤尾鸡冠花的组培快繁体系不仅可以避免品种退化，而且可以不受季节、环境的影响在短时间内培育出大量的鸡冠花新个体，因此具有重要意义。目前关于凤尾鸡冠花组织培养研究的报道只有倪德祥对其茎段进行培养和快繁1例[5]，实验首次以凤尾鸡冠花叶片为外植体，研究植物激素（6-BA和NAA）对其愈伤组织诱导以及不定芽、不定根分化的影响，确定叶片快繁体系的最佳激素组合，为凤尾鸡冠花的快速繁育提供新的途径。

1 材料与方法

1.1 材料及处理

凤尾鸡冠花种子，购自长春农博会。

将种子用70%乙醇消毒30秒，0.1%升汞消毒9分钟，无菌水冲洗干净后，接种于MS培养基中，培养20天左右即可获得3叶期组培苗。

1.2 方法

1.2.1 培养方法 将凤尾鸡冠花组培苗叶片切成0.5×0.5厘米大小，按照叶面朝上的方向将其接种到愈伤组织诱导培养基中见表1，30天后统计愈伤组织的诱导率；将生长良好的愈伤组织切成小块接种到不定芽诱导培养基中见表2，30天后统计出芽率；将生长健壮的组培苗接种到生根培养基中培养见表3，21天后统计生根情况。

所有培养阶段每个处理接种30瓶，每瓶接种2个外植体。相关计算公式：

愈伤组织诱导率=长出愈伤组织的叶片数/接种叶片数×100%；

出芽率=长出不定芽的愈伤组织数/接种愈伤组织数×100%。

1.2.2 培养条件 愈伤组织和不定芽诱导培养基采用含有不同6-BA和NAA浓度配比的MS培养基，生根培养基采用含不同浓度NAA的1/2MS培养基，所用培养基中蔗糖浓度40克/升，琼脂7克/升，pH值5.8；培养温度为25℃，光照强度2500 lx、光照时间12小时/天，相对湿度80%。

2 结果与分析

2.1 不同6-BA和NAA浓度配比对叶片愈伤组织诱导的影响

凤尾鸡冠花叶片在愈伤组织诱导培养基中培养5～7天左右，在多数叶缘出现肉眼可见的愈伤组织，随培养时间延长，愈伤组织块逐渐增大，30天左右覆盖所有外植体。由表1可知，9个处理均可诱导出愈伤组织，但愈伤组织诱导率差异显著，其中处理5愈伤组织诱导率最高（93.33%），该处理愈伤组织生长旺盛，呈米白色，无褐变现象；而处理7、8、9则出现了不同程度地褐变现象，说明高浓度6-BA容易导致鸡冠花叶片愈伤组织褐变，综上，凤尾鸡冠花叶片愈伤组织诱导的适宜6-BA和NAA浓度依次为1.00 毫克/升和0.50毫克/升。

2.2 不同6-BA和NAA浓度配比对叶片不定芽诱导的影响

将生长旺盛的愈伤组织切成小块接种于芽诱导培养基中见表2，培养17～20天左右，可在多数愈伤组织表面看到芽点，30天左右芽点可分化出芽。由表2可知，不同6-BA和NAA浓度配比可显著影响不定芽的分化，随6-BA浓度增加出芽率也逐渐增加，其中处理8出芽率最高（86.67%），该处理不定芽长势最好，质量最高，处理1、2、3、4尽管也能诱导出不定芽，但在愈伤组织边缘以及靠近培养基面存在褐变现象，综上可知，凤尾鸡冠花不定芽诱导的适宜6-BA和NAA浓度依次为1.5 毫克/升和0.2 毫克/升。

2.3 不同浓度NAA对叶片不定根诱导的影响

将长约3～4厘米的试管苗切下来接种到含有不同浓度NAA的1/2MS培养基中，21天后试管苗生根状况如表3所示，可知在不添加NAA的培养基中不能诱导不定根的分化，同时随NAA浓度的增加，生根率呈先增后降趋势，说明NAA具有促进凤尾鸡冠花试管苗生根的作用，NAA的浓度能够显著影响生根率，处理3生根率最高（100%），此时单株生根数最多，长势最旺，因此，凤尾鸡冠花不定根诱导的适宜NAA浓度为0.10毫克/升。

3 讨论与结论

植物生长调节物质的组成、比例是影响植物形态建成的关键因素[6]，实验发现不同6-BA和NAA浓度配比对凤尾鸡冠花叶片愈伤组织和不定芽的诱导均具有显著影响，愈伤组织诱导的适宜组合为6-BA 1.00 毫克/升+NAA 0.50毫克/升，不定芽诱导的适宜组合为6-BA 1.50毫克/升+NAA 0.20 毫克/升，可以看出，在一定范围内，较高浓度的NAA利于愈伤组织的诱导，较高浓度的6-BA利于不定芽的分化。由于不定根诱导对无机元素需求量少，同时细胞分裂素在一定程度上会抑制根的分化，因此实验以1/2MS为基本培养基，研究NAA浓度对不定根分化的影响，结果发现最佳NAA浓度为0.10毫克/升，低于湖北麦冬和维纳斯捕蝇草不定根诱导的最佳NAA浓度[7-8]。

参考文献

[1]郭丽，王军玲.鸡冠花的应用价值[J].现代农业，2015，（03）：52-55.

[2]连明德，党璇，赵洁，等.鸡冠花药学研究概况[J].安徽农业科学，2011，39（34）：20984-20985.

[3]邓日烈，王惠珍，吴文花，等.植物生长调节剂对鸡冠花愈伤组织生长季花色素苷积累的影响[J].生物技术通报，2008，（03）：170-173.

[4]王军玲.鸡冠花离体快繁及八倍体新种质的选育[D].西南大学，重庆，2008.

[5]倪德祥，易莹，张丕方.凤尾鸡冠花莖段培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯，1987，（01）：29-30.

[6]孙爱花，华玉伟，黄天带，等.不同激素配比对橡胶树叶片愈伤组织诱导的影响[J].中国农学通报，2012，28（04）：24-27.

[7]何家涛，刘传会.湖北麦冬叶片快繁体系的建立[J].安徽农业科学，2012，40（02）：769-771.

[8]林青萍， 陈雄庭.菊花离体叶片快繁体系的建立[J].热带农业科学，2006，26（03）： 25-28.

作者简介：王霞，硕士，吉林农业科技学院，讲师，研究方向：植物分子生物学及天然产物分离。