荧光试剂在潜血手印显现中的增强效果及程序研究

陈蕊丽，　逄文耀，　朱威龙，　李　波

(中国人民公安大学刑事科学技术学院， 北京　100038)



荧光试剂在潜血手印显现中的增强效果及程序研究

陈蕊丽，逄文耀，朱威龙，李波

(中国人民公安大学刑事科学技术学院， 北京100038)

摘要目的 为探求荧光试剂在潜血手印显现中的二次增强效果和操作流程。方法 按照客体类型即渗透性客体和非渗透性客体针对不同显现方法进行正交实验，从显现结果筛选出最佳显现流程。结果 按照显现效果筛选显现流程，得出DFO和酸性黄荧光试剂具有较好的二次增强效果。结论 在传统潜血手印显现试剂显现效果不理想的情况下，按照流程图可以进行荧光试剂的二次增强。

关键词潜血手印； DFO； 酸性黄； 显现

0引言

在案件现场，血迹印痕除了要提取DNA外，对于纹线不清晰的指纹，往往要进行处理和增强。本文着重探讨对于案件现场不同的客体上潜血印痕最适合的显现增强方法。潜血印痕泛指用肉眼和常规方法不能看清纹线或数量足够多的细节特征时，需要采用特殊方法增强的血迹印痕。

潜血印痕常规处理路径为：先进行犯罪现场血迹印痕的常规拍照记录，光学检验如果清晰则尽量先采用无损的提取方法，再提取DNA，如果现场血迹足够多，可以先在纹线不清晰的印痕处提取DNA。对于其他印痕可以按承痕客体的类型决定显现方法，对于常规客体首先进行光学检验，并按照不同的客体选择固定方式。固定就是在血迹增强处理时，为了防止血迹扩散而采取的将血迹变性的处理方法。最为常见的方法为无水乙醇固定法，还有加热变性法及紫外照射法等。由于血迹增强后一般纹线都为深色，所以对于浅色客体显现试剂较多，如最为常见的是四甲基联苯胺、氨基黑10B、溴甲酚绿、考马斯亮蓝等；对于渗透性浅色客体最为常用试剂为四甲基联苯胺；对于效果较差或背景复杂、颜色较深的客体可以采用具有荧光效果的试剂较为理想，如DFO、酸性黄等；对于深色非渗透性客体上的潜血手印是血迹显现的难点，常用为酸性黄、二氧化钛悬浮液等。下面将通过实验加以验证其显现效果和合适的显现程序。

1材料与方法

1.1器材和试剂

FYFC-Ⅲ微电脑502手印熏显柜、多波段光源、电热恒温干燥箱、尼康单镜头反光数码相机D7100、蒸锅等。

四甲基联苯胺(TMB)、 DFO、 氨基黑、酸性黄、过氧化氢、无水乙醇、甲醇、冰醋酸、纯净水、二氧化钛 、茚三酮、荧光粉末、有机试剂等。

1.2方法

1.2.1客体选取

渗透性客体为：白纸、报纸；非渗透性客体为：白色塑料购物袋，黑色塑料垃圾袋。

1.2.2制作样本

将样本制作成宽约3 cm，长约25 cm的长条若干，志愿者双手用洗手液洗干净后自然晾干，将10%比例的稀释血均匀的涂抹于一个手指表面(不能堆积)，然后在样本表面顺序捺印5～6枚手印。捺印手印时，尽量保持接触时间、捺印力度和捺印方式一致。捺印后，分别将每种不同的客体样本一分为二，并且用相同的数字编号，相同编号的两半样本为一组，将样本存留15天。

1.2.3配制溶液

四甲基联苯胺(TMB)溶液甲液：称取1.2 g四甲基联苯胺放于烧杯中，加入100 mL无水乙醇，用玻璃棒搅拌均匀；乙液：30%过氧化氢；按照甲液∶乙液=10∶1比例混合使用(建议现配现用，保存最多不要超过5天)。

茚三酮试剂称取2 g茚三酮放于烧杯中，先后加入50 mL丙酮和50 mL乙醚(注意先丙酮后乙醚，顺序不可逆)，玻璃棒搅拌至充分溶解。

DFO试剂称取0.19 g DFO放于烧杯中，分别加入50 mL无水乙醇，50 mL乙酸乙酯，10 mL冰醋酸，390 mL正己烷，用玻璃棒充分搅拌至溶解。

氨基黑显现液称取1 g氨基黑10 B，放入容量为1 000 mL的烧杯中，量取50 mL冰醋酸，倒入盛有氨基黑10 B的上述烧杯中，最后量取450 mL的甲醇，倒入上述烧杯中，用玻璃棒搅拌约30 min，溶液呈蓝黑色即可。

考马斯亮蓝G250试剂称取0.5 g考马斯亮蓝粉末放入400 mL烧杯中，然后量取10 mL醋酸和90 mL无水乙醇分别倒入上述烧杯中，用玻璃棒搅拌至完全溶解即可。

酸性黄试剂固定液：量取1 000 mL蒸馏水倒入到容量为2 000 mL的烧杯中，称取20 g 5-磺基水杨酸溶于蒸馏水中并用磁力搅拌器搅拌至充分溶解；染色液：称取1 g酸性黄晶体放置于容量为1 000 mL的烧杯中，用量筒量取50 mL乙酸加入烧杯中，再取250 mL无水乙醇加入烧杯中，量取700 mL蒸馏水加入烧杯中并用磁力搅拌器搅拌至完全溶解即可；漂洗液：用量筒量取40 mL乙酸、200 mL无水乙醇和560 mL蒸馏水先后倒入同一个烧杯中混合均匀。

溴甲酚绿试剂称取2 g溴甲酚绿放入容量为2 000 mL的烧杯中，量取750 mL无水乙醇和250 mL蒸馏水倒入上述烧杯中，用搅拌至溶液呈黄色透明状即可。

二氧化钛悬浮液取10 g二氧化钛加入足够大烧杯中，加入300 mL无水乙醇充分搅拌，再往烧杯中加入0.2 g十二烷基硫酸钠和少许乙酸搅拌至溶液成悬浮状即可。

1.2.4操作方法

(1)渗透性客体显现方法

渗透性客体显现试剂有3种，分别是四甲基联苯胺、DFO、和茚三酮，按照编号1～30的顺序，将30组样本分别用无水乙醇固定并自然晾干，然后每种试剂各显现10组样本。

四甲基联苯胺显现方法将配制好的四甲基联苯胺溶液倒入培养皿中，深度要适中，大约5～8 mm深为宜，用镊子夹取固定好的待显样本迅速在试剂中浸泡一遍，只要保证样本完全浸润即可，然后将样本自然晾干。

DFO显现方法将配制好的DFO溶液倒入精雾化喷壶中，均匀的喷撒在固定好的待显样本上，自然晾干后放入电热恒温干燥箱中，用150 ℃温度加热1 min，取出样本在蓝绿光下观察，指纹呈亮黄色。

茚三酮显现方法将配置好的茚三酮溶液倒入大小适中的培养皿中，深度适中，用镊子夹取固定好的待显样本迅速的在茚三酮溶液中浸泡一遍，保证样本完全浸润，自然晾干后用蒸锅(使用蒸锅时注意避免有水珠滴落在样本上)加热加湿，保证印痕在短时间内快速显现出来。

(2)非渗透性客体方法

显现分为深色和浅色两类客体。

浅色客体显现方法浅色客体显现试剂有四种，分别是氨基黑10B、考马斯亮蓝、酸性黄和溴甲酚绿。按照编号1～60的顺序，将氨基黑10B、考马斯亮蓝、酸性黄和溴甲酚绿的共60组样本分别用无水乙醇喷雾固定后自然晾干，然后每种试剂各显现15组。

氨基黑10B显现方法将配制好的氨基黑10B溶液倒入培养皿中，深度适中，然后将待显样本浸泡在氨基黑10B溶液中，大约3 min将样本夹出，放入无水乙醇中漂洗，漂洗过程中可以轻轻晃动容器，将过量的氨基黑从背景上洗掉。当无水乙醇过度污染时，可以处理掉，换为新的溶液。

考马斯亮蓝和溴甲酚绿的显现方法参照氨基黑10B显现方法进行操作。

深色客体显现方法常用试剂为502、二氧化钛悬浮液和酸性黄。将一组待显客体直接放入502熏显箱中熏显。其他两组先用无水乙醇喷雾固定，再放入二氧化钛悬乳浊液浸泡3 min，之后用无水乙醇冲洗；将固定后的一组客体放入酸性黄试剂中浸泡3 min后，用专用漂洗液漂洗。

1.3实验设计

1.3.1正交试验

客体选用3种渗透性客体，两种非渗透性客体。渗透性客体正交试验：将第一次显现完的检材样本的右半部分分别用其他两种显现试剂显现各5组并做好标记；非渗透性客体正交试验：将第一次显现完的检材样本的右半部分分别用其他3种显现试剂显现各5组并做好标记。

1.3.2遗留时间实验

不同客体所做的样本材料各放入一个档案袋低温、干燥保存，在捺印15天之后进行显现操作。

2结果与分析

2.1效果比较

将上述客体按渗透性客体和非渗透性客体分为两组，每组先用上述试剂分别实验，在按顺序将显现结果正交，得出结果作出正交表。渗透性客体显现

效果正交表(见表1)，白纸上正交显现效果图(见图1)、报纸上正交显现效果图(见图2)。非渗透性客体按浅色和深色客体分类，分别为白色塑料袋和深色塑料袋。显现效果正交表分别为(表2和表3)，显现效果图分别为(图3和图4)。

表1　渗透性客体上显现效果统计表

注: +++表示纹线非常清楚; ++表示纹线可以鉴定; +表示纹线不清晰；-表示纹线被破坏。

图1　白纸上正交显现效果图

图2　报纸上正交显现效果图

一次显现氨基黑考马斯亮蓝溴甲酚绿酸性黄初显效果+++++++++二次显现氨基黑++++-考马斯亮蓝-+++-溴甲酚绿++++-酸性黄--++

注: +++表示纹线非常清楚; ++表示纹线可以鉴定; +表示纹线不清晰；-表示纹线被破坏。

表3　黑色塑料袋显现效果统计表

注: +++表示纹线非常清楚; ++表示纹线可以鉴定; +表示纹线不清晰；-表示纹线被破坏。

图3　白色塑料袋正交效果图

图4　黑色塑料袋显现效果图

2.2讨论

(1)由于氨基黑、考马斯亮蓝、溴甲酚绿的易污染背景，所以上述3种方法用于非渗透性客体的显现中。

(2)对于渗透性客体，通过正交实验可以得出最佳显现路线为：DFO+茚三酮，如果背景较为复杂，由于DFO的显现条件较为苛刻，可以先用茚三酮后再用DFO显现。流程图(见图5)。

图5　渗透性客体潜血手印显现流程图

(3)对于深色非渗透性客体，通过正交实验可以得出最佳显现路线为：酸性黄或502+酸性黄。流程图(见图6 )。

参考文献

[1]张艳杰.溴甲酚绿醇液显现潜血手印技术[J].科技资

图6　非渗透性客体潜血手印显现流程

讯,2013(7):210.

[2]水晶晶，罗亚平，王明超.酸性黄显现非渗透性客体上血手印研究[J].刑事技术，2012(5):35-37.

[3]夏育琴,冯浩.潜血手印的显现程序[J].海峡科学，2014(10).

[4]李贺，罗亚平. 酸性黄显现深色渗透性客体上潜血鞋印解析[J].云南警官学院学报，2014(2):75-78.

[5]王跃.二氧化钛显现深色客体表面的血潜手印的研究[J].中国人民公安大学学报:自然科学版，2004(4):25-27.

(责任编辑陈小明)

中图分类号D918.91

作者简介陈蕊丽(1968—)，女，吉林长春人，副教授，硕士生导师。研究方向为痕迹检验技术。