探寻“抑菌能手”

向昌亮

近年来，随着各大媒体对食品中违法使用添加剂、防腐剂现象的曝光，人们对食品和生活用品的安全感持续降低，食品和日化行业的原料也从化工合成逐渐向天然提取发展，且需求量与日俱增。

柑橘类果皮中含黄酮类物质，具有抗菌消炎、抗过敏、镇痛、抗病毒、抗氧化、抗癌作用，既可用来制药又可作为食品添加剂。湘西盛产橙子、橘子和柚子，它们都属于柑橘类，它们的果皮萃取液是否可以作为抗菌剂？

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和芽孢杆菌等常见细菌易对日常生活造成困扰，所以我想通过实验研究不同柑橘类果皮萃取液的抗菌、灭菌效果。

一、材料与方法

（一）仪器与试剂

手套、烧杯、量筒、酒精灯、竹签、培养皿、超净工作台、高压灭菌锅、 紫外分光光度计、恒温振荡培养箱、恒温水浴锅等。去离子水、灭菌双蒸水、75%的乙醇、细菌基本培养基（LB）等。

（二）实验样品

1.橘皮。取自湘西本地产的橘子。

2.酸柚皮。取自湘西本地产的酸柚。

3.橙子皮。取自超市购买的普通食用脐橙。

称取橘皮、酸柚皮、橙子皮各200g。

（三）实验步骤

1.将橘子、酸柚、橙子的果皮分别捣碎，用200ml无菌水浸泡获得1g/ml果皮汁液。

2.把不同种类、浓度的果皮汁液添加到液体培养基中，以不加果皮汁的全培养基为对照组。

3.将添加不同果皮汁液和无菌水的培养基分成小份，分别接种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和芽孢杆菌，并置于37℃恒温振荡培养箱中，每隔6h取微量菌液，适当稀释，用紫外分光光度计测定其活菌浓度。

4.以时间为横坐标、菌体浓度为纵轴绘制生长曲线，根据观察比较不同柑橘类果皮汁液的抗菌效能。

二、结果与分析

比较分析三种柑橘类果皮萃取液不同浓度下不同接种菌株菌液中菌体的浓度，结果如下。

1.对金黄色葡萄球菌的抗菌情况

在无添加果皮汁的对照组中，每个时期菌液浓度都明显高于同一时期已添加果皮汁的菌液浓度。添加果皮汁后的该细菌生长速度明显延迟，至12h才达到对照组6h时的菌液浓度，且稳定期的菌液浓度始终处于对照组菌液最高值的一半左右，36h后进入衰亡期。

因此，三种果皮汁对金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用，且相差不大，酸柚皮汁原液和按1∶5进行混合时的抑菌效果最好。

2.对大肠杆菌的抗菌情况

柑橘类果皮萃取液对大肠杆菌的抗菌效果明显。在无添加果皮汁的对照组中，每个时期菌液浓度明显高于同一时期已添加果皮汁的菌液浓度。添加果皮汁后的该细菌生长速度明显延迟，至12h大部分加了果皮汁的培养基中菌液浓度都明显低于对照组6h时的菌液浓度，且稳定期的菌液浓度明显低于对照组菌液最高值的一半左右。

因此，三种果皮汁对大肠杆菌的生长具有明显的抑制作用且相差不大，其中最低值均出现在酸柚皮汁原液和按1∶5进行混合的培养基中。

3.对芽孢杆菌的抗菌情况

在无添加果皮汁的对照组中，每个时期菌液浓度都明显高于同一时期已添加果皮汁的菌液浓度。添加果皮汁后的该细菌生长速度明显延迟，且每种果皮汁不同浓度的抑菌效果区别也较明显，菌液最低值出现在酸柚皮汁原液的培养基中。

因此，三种果皮汁对芽孢杆菌的生长具有明显的抑制作用，并且酸柚皮汁原液的抑菌效果最好，与酸柚皮汁和液体培养基按1∶5进行混合时相差不大，橘皮汁原液次之，橙皮汁原液效果不明显。

三、结论

各生长时期菌液中菌体的数量均明显低于对照组，因此，三种柑橘类果皮萃取液的抗菌效果明显，且生长曲线的趋势与对照组基本一致，这与生长过程中抗菌物质的消耗有关。

抑菌效果与果皮萃取液的浓度呈正比，浓度越高抑菌效果越强。同时，不同柑橘果皮萃取液的抗菌效果存在差异，且对不同细菌的抑菌效果差异明显。

本实验只是初步探讨了三种柑橘类果皮萃取液的抗菌效果，验证了柑橘类果皮萃取液具有抗菌的作用，由于技术和设备受限未能对果皮萃取液进行标准化，即统一标定，因此无法比较各种柑橘果皮萃取液的抗菌差异，也无法准确给出柑橘果皮萃取液的抗菌效能。

萃取液中物质成分复杂，可能存在多种物质都具有抗菌作用的情况。因此，在进一步的探索中可将果皮萃取液进行标准化，从而比较各种柑橘果皮萃取液的抗菌差异和抗菌效能，进一步测定各种柑橘果皮萃取液中的化合物组成，确定其中的抗菌物质。（指导老师：杨生岩 康丽华 杜 盈）