HPLC法测定天麻宁眩胶囊中芍药苷的含量

李娜刘瑞丽张明洁



HPLC法测定天麻宁眩胶囊中芍药苷的含量

李娜1,2刘瑞丽2张明洁1,2

【摘要】目的 建立测定天麻宁眩胶囊中芍药苷含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Waters C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（12：88，v/v），流速：1.00 ml/min，检测波长：230 nm，柱温：30℃。结果 芍药苷在0.097 34～1.557 50 μg（r=0.999 9）范围内呈良好的线性关系，平均回收率为97.85%（RSD=0.54%）。结论 所建立的含量测定方法简便、准确、专属性强，可用于天麻宁眩胶囊中芍药苷的含量测定。

【关键词】天麻宁眩胶囊；高效液相色谱法；芍药苷

天麻宁眩胶囊为焦作市温县第二人民医院的自制制剂，由天麻、莪术、白芍、赭石、龙骨，牡蛎、半夏、地黄、仙鹤草等13味中药材组成。具有平肝息风，燥湿化痰作用。临床用于治疗肝肾阴虚，肝阳上亢型眩晕[1]。天麻宁眩胶囊检验标准中无质量控制项，制剂中白芍为主要有效成分，白芍主要入肝脾经，具有养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳等功效[2]，白芍中含有单萜及其苷类、三萜类、黄酮类等化学成分，据研究发现白芍中的有效成分具有抗炎，调节心血管，以及调节中枢神经等作用[3-6]，这些有效化学成分中芍药苷性质稳定，易于检测[7-11]，为有效控制产品质量，提高医院制剂质量控制标准，对本剂中白芍的主要有效成份芍药苷进行了含量测定的方法学研究，建立天麻宁眩胶囊中芍药苷的含量测定的高效液相色谱法。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器 岛津LC-20A型高效液相色谱仪、岛津SPD-M20A型二极管阵列检测器、CPA225D型电子天平（赛多利斯）、KQ-300VDV超声波清洗机（昆山超声）。

1.1.2 试剂 乙腈为一级色谱纯；超纯水；磷酸为分析纯；乙醇为分析纯。

1.2 材料

1.2.1 对照品 芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，含量以96.0%计，使用前无需干燥处理，批号：110736-201136）。

1.2.2 样品 天麻宁眩胶囊（温县第二人民医院，批号：20150810、20150570、20150829）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱Waters C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）， 流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（12：88），进样量：10 μl，柱温：30℃，流速：1.00 ml/min。理论塔板数按芍药苷峰计算不低于3 000。用甲醇溶液溶解芍药苷对照品，在200～300 nm处进行紫外扫描，在19 min 230 nm处有最大吸收，供试品溶液在230 nm处亦有最大吸收，故确定扫描波长230 nm。见图1。

图1　芍药苷对照溶液紫外吸收3D图

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品10.14 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取天麻宁眩胶囊内容物约1.6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按天麻宁眩胶囊的处方工艺，不加白芍，制成阴性样品，同2.2.2方法制成阴性溶液。

2.3 操作方法

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.4 结果

试验结果表明，供试品与芍药苷对照品溶液均有一保留时间相同的色谱峰，并且阴性对照在芍药苷对照品附近无干扰，芍药苷峰与其它组分达到基线分离，分离度符合要求。理论塔板数n ＞3 000。

2.5 方法学考察

2.5.1 方法的专属性考察 在上述的色谱条件下，将芍药苷对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl注入液相色谱仪中，得HPLC图，结果显示阴性对照无干扰。结果见图 2。

图2　A：芍药苷对照品溶液；B：阴性对照溶液；C：供试品溶液

2.5.2 线性关系考察 取2.2.1对照品溶液1 μl、2 μl、4 μl、8 μl、16 μl测定色谱峰面积，得回归方程（n=6）为Y=12 193.8X-20 401.9（r=0.999 9），在0.097 34～1.557 50 μg，呈良好线性关系，结果见表1。

2.5.3 精密度试验 取对照品溶液，按照上述色谱条件，进样量10 μl，重复进样5次，记录峰面积，芍药苷峰面积的RSD值为0.41%。2.5.4 重复性试验 取同一样品6份，按2.2.2制备供试品溶液，分别注入液相色谱仪10 μl，记录峰面积，芍药苷峰面积的RSD值为1.3%。

2.5.5 稳定性试验 取同一供试品溶液10 μl，分别在0 h 、4 h、8 h、 12 h、16 h注入液相色谱仪，记录峰面积，芍药苷峰面积的RSD 为0.59%。结果表明本品16 h内稳定性良好。

2.5.6 加样回收率试验 精密称取已测知含量（1.112 1 mg/g）的天麻宁眩胶囊（批号20150810）约1.6 g，共9份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入芍药苷对照品溶液1 ml、2 ml、3 ml（0.097 344 mg/ml）。按2.2.2项下供试品溶液制备的方法操作，同法测定，结果见表2。

表1　芍药苷线性关系

表2　天麻宁眩胶囊的加样回收率

3 讨论及小结

3.1 文中对于样品超声提取时间，通过分别测试超声时间10 min、30 min、50 min的供试品溶液的含量，10 min提取的含量较低，50 min提取的含量与30 min提取的含量相差不多，从效率上考虑，最终确定30 min为最佳提取时间。

3.2 对供试品的制备中，分别采用甲醇，乙醇和稀乙醇三种溶剂进行30 min超声处理，分别进行含量测定，根据峰面积可以确定稀乙醇作为溶剂提取效果最佳，同时又比较环保安全，因此最终选用稀乙醇作为溶剂。

3.3 经过对多批样品中芍药苷的含量测定表明，该方法简便、准确。可以控制产品的质量。

3.4 所建立HPLC法测定天麻宁眩胶囊中芍药苷的含量测定方法在芍药苷0.097 34～1.557 50 μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为97.85%，RSD为0.54%，简便、准确、专属性强，可用于该药中芍药苷的含量测定。

3.5 天麻宁眩胶囊中除白芍还含有天麻、山茱萸、五味子等其他中药成分，也可对这些中药材进行进一步的研究和考察，对本药药效药理作用能有更深的探索，同时建立更完善全面的质量控制标准，使之在疾病预防和治疗应用中有更广阔的前景。

参考文献

[1]河南省食品药品监督管理局.医疗机构制剂注册批件（批件号：2004Z01048）.河南省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准天麻宁眩胶囊[s].河南省：河南省食品药品监督管理局，2004.

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[11]董自亮，卢君蓉，高飞，等.芍药苷微囊的制备及其体外释药研究[J].中草药，2013，44（13）：1756-1760.

作者单位： 1 454000 焦作市食品药品检验所；2 453000 新乡医学院

Determination of the Content of Paeoniflorin in Tianmaningxuan Capsule by HPLC

LI Na1,2LIU Ruili2ZHANG Mingjie1,2, 1 Jiaozuo Municipal Food and Drug Inspection Institute of Jiaozuo City, Jiaozuo 454000, China, 2 Xinxiang Medical University, Xinxiang 453000, China

[Abstract]Objective To establish a method that is using HPLC for determination of the content of paeoniflorin in tianmaningxuan capsule.Methods Chromatographic condition about the HPLC analysis includes: Waters C18column(4.6 mm×250 mm, 5 μm), CH3CN-0.1% H3PO4(12: 88, v/v)as mobile phase, 1.00 ml/min of flow rate, UV detector wavelength at 230 nm and 30℃ column temperature.Results The standard curve of paeoniflorin showed a good linear relationship within the range of 0.097 34～1.557 50 μg (r=0.999 9), the average recovery rate was 97.85% (RSD =0.54%).Conclusion The method established that is sensitive, accurate and specific can be used for the determination of the content of paeoniflorin in tianmaningxuan capsule.

[Key words]Tianmaningxuan capsule, HPLC, Paeoniflorin

通讯作者：刘瑞丽，E-mail：lrl@xxmu.edu.cn

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.07.127

【文章编号】1674-9308（2016）07-0183-03

【中图分类号】R286

【文献标识码】A