食管鳞癌组织miR-193b表达及其与患者临床病理特征的关系

齐海亮，安晓颖，李晓霞，宋鑫亮，齐科雷，董稚明

(1 河北省胸科医院，石家庄050041；2 河北医科大学第四医院)

食管鳞癌组织miR-193b表达及其与患者临床病理特征的关系

齐海亮1，安晓颖1，李晓霞1，宋鑫亮1，齐科雷1，董稚明2

(1 河北省胸科医院，石家庄050041；2 河北医科大学第四医院)

目的 探讨miRNA-193b(miR-193b)在食管鳞癌发生、发展中的作用。方法 采用SYBR Green qRT-PCR技术检测56例食管鳞癌患者癌组织及癌旁正常组织miR-193b表达，分析癌组织miR-193b表达与患者临床病理特征的关系。结果 食管鳞癌组织miR-193b相对表达量为0.052±0.004，癌旁正常组织为0.089±0.005，二者比较P<0.01。食管鳞miR-193b表达与肿瘤TNM分期有关(P<0.05)，与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度和淋巴结转移均无关(P均>0.05)。结论 食管鳞癌组织miR-193b表达下调，且与肿瘤TNM分期有关；miR-193b可能作为抑癌基因参与食管鳞癌的发生、发展。

食管鳞癌；微小RNA；微小RNA-193b

微小RNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA，能通过核酸序列的互补性结合到特定的靶mRNA上，并调节、翻译或降解靶mRNA来调控基因表达，参与细胞的分化、增殖、凋亡等[1，2]。研究发现，miRNA还可作为癌基因或抑癌基因，调控肿瘤的发生、发展和转移[3]。miRNA-193b(miR-193b)是miRNA家族成员之一，其表达变化与胃癌、结肠癌、子宫内膜癌等密切相关，但目前鲜见其与食管鳞癌关系的报道。2014年9月～2015年6月，我们观察了食管鳞癌组织中miR-193b的表达，现分析结果，探讨其在食管鳞癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取同期河北省胸科医院手术切除的食管鳞癌组织及癌旁正常组织(距癌组织边缘>5 cm)各56例份，均经组织病理学检查明确诊断。患者男36例、女20例，年龄39～77岁、中位年龄60岁；组织分化程度：高、中分化23例，低分化33例；无淋巴结转移32例，有淋巴结转移24例；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期40例，Ⅲ、Ⅳ期16例。所有患者术前未行放疗、化疗及生物治疗等。

1.2 食管鳞癌组织及癌旁正常组织miR-193b表达检测 取食管鳞癌组织及癌旁正常组织标本，TRIzol法提取组织总RNA。紫外分光光度计测定RNA的浓度、纯度和完整性，经检测所提取的总RNA无降解，标本合格，可用于后续实验。按照逆转录试剂盒说明书进行逆转录反应。反应体系20 μL，其中总RNA 1.5 μL、特异性茎环反转录引物2 μL、RNA酶抑制剂1 μL、缓冲液4 μL、逆转录酶1 μL、10 mmol/L dNTP Mix 2 μL、DECP水8.5 μL。反应条件：42 ℃ 60 min，25 ℃ 5 min，70 ℃ 5 min。逆转录反应后合成cDNA，-20 ℃保存备用。使用Primer Premier5.0软件设计miR-193b和内参基因U6的引物序列，由中国北京赛百盛基因技术有限公司合成。按照TaqMan PCR试剂盒说明进行PCR反应。PCR反应体系20 μL，其中cDNA模板2 μL、上下游引物各0.6 μL、2×taqman universal pcr master mix 10.0 μL、DECP水6.8 μL。PCR反应条件：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40个循环；72 ℃延伸7 min。每个样本做3个复孔。记录每个荧光反应管中的荧光信号达到所设定的阈值时所经历的循环数即Ct值，将原始数据取3次重复的平均值，以U6为内参，ΔCt=CtmiR-193b-CtU6。以2-ΔΔCt法计算miR-193b的相对表达量。分析食管鳞癌组织miR-193b表达与患者临床病理特征的关系。

2 结果

2.1 癌组织、癌旁正常组织miR-193b表达比较 癌组织miR-193b相对表达量为0.052±0.004，癌旁正常组织为0.089±0.005，两者比较P<0.01。

2.2 食管鳞癌组织miR-193b表达与患者临床病理特征的关系 见表1。

表1 食管鳞癌组织miR-193b表达与患者 临床病理特征的关系±s)

3 讨论

miRNA是一类非编码小分子RNA，其主要功能是参与并调控基因的表达，通过识别靶基因mRNA的3′-非翻译区，抑制靶基因表达[4]。自从首个miRNA功能被确认以来，miRNA已成为生命科学研究领域的热点之一。miRNA几乎参与了所有的生物学过程，维系着生物正常基因表达和生理功能;其表达异常可导致疾病的发生。近年研究发现，很多miRNA通过调控肿瘤细胞的增殖、分化、迁移等生物过程，参与肿瘤的发生、发展过程[5，6]。

miR-193b的编码基因位于人16号染色体上，是非编码的小分子RNA。作为一种重要的调节因子，miR-193b参与了机体诸多生理病理过程[7]。研究发现，miR-193b参与了软骨的新陈代谢，随着年龄增长其表达上调[8]；但Ⅱ型肌萎缩患者miR-193b-3p表达下调[9]；miR-193b在非小细胞肺癌组织中表达下调，当其过表达时可显著降低肺癌A549细胞的增殖、侵袭与转移能力[10]。Rauhala等[11]研究发现，miR-193b是前列腺癌的肿瘤抑制因子。Li等[12]报道，在乳腺癌细胞内下调miR-193b表达，可明显增加尿纤维蛋白溶酶原激活物，进而刺激瘤细胞的恶性表型发生。Lenarduzzi等[13]研究发现，在敲除头颈部鳞状细胞癌FaDu细胞系的miR-193b基因，可使癌细胞增殖、侵袭、转移能力提高，并且在体内可抑制瘤细胞的形成。miR-193b在胃癌、胰腺癌、子宫内膜癌等组织中表达下调，导致uPA、STMN1、MMP-2、MMP-9等靶基因表达上调；而这些靶基因都是引起肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的主要分子。因此认为，miR-193b在多种恶性肿瘤中起到负调控作用，可作为一种肿瘤抑制因子。但目前其在食管鳞癌组织中的表达鲜见报道。

本研究结果显示，食管鳞癌组织miR-193b的相对表达量明显低于癌旁正常组织；miR-193b表达与肿瘤TNM分期有关，而与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移无关。因此认为，miR-193b在食管鳞癌组织中表达下调可能引起某种促癌机制活化，导致食管鳞癌发生、发展，但是其具体机制尚不清楚，有待进一步研究。

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河北省科技支撑计划项目(132777221)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.32.026

R735.1

B

1002-266X(2016)32-0074-02

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