猪食道口线虫与猪圆环病毒2型混合感染的诊断

徐 国，曾智勇＊，代振江，叶百川

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

猪食道口线虫与猪圆环病毒2型混合感染的诊断

徐 国，曾智勇＊，代振江，叶百川

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

食道口线虫病是由盅口科、食道口属的线虫寄生于反刍家畜和猪的大肠所引起的一类线虫病，由于某些种类的食道口线虫的幼虫可在寄生部位的肠壁上形成结节，故又称为结节虫病[1]。重度感染食道口线虫幼虫可使仔猪发生持续性腹泻，粪便呈暗绿色，含有多量黏液，有时带血，严重时引起死亡；慢性病例患畜则表现为便秘和腹泻交替发生，渐进性消瘦，最后可因机体衰竭而死亡。猪圆环病毒病感染是指由猪圆环病毒(Porcine circovirus ，PCV) 引起的猪的一种新的传染病，其主要临床症状特征为母猪繁殖障碍、体质下降、消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸、生长发育不良、腹泻、内脏器官及皮肤的广泛病理变化，特别是肾、脾脏及全身淋巴结的高度肿大、出血和坏死[2]。PCV分PCV1和PCV2两个血清型，PCV2危害极大。猪圆环病毒自2000年由郎洪武等[3]在国内首次报道以来，全国各省（市）先后有PCV2 感染病例报道 。猪圆环病毒病在世界范围内广泛流行，给养猪业带来巨大危害。

2016年6月贵州省遵义市某种猪场发生一起猪严重腹泻导致猪只死亡的病例。笔者通过猪场工作人员对猪场饲养情况、免疫程序以及病死猪的临床症状进行了解后开展了相关检测，报道如下。

1 材料

1.1 病料

病死猪一头。

1.2 主要试剂

TakaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver 4.0、Prime Script One Step RTPCR Kit Ver.2.0、DL2000；其他试剂均为国产分析纯。

2 方法

2.1 流行病学调查与临床症状

通过猪场工作人员对猪场饲养情况、免疫程序以及病死猪的临床症状进行了解并记录。

2.2 解剖病变观察

对病死猪进行剖检，沿腹白线切开，观察宿主肠道及其他组织器官病理变化，剖解肠道进行虫体采集。

2.3 病原核酸检测

2.3 .1 病料的处理及核酸的提取

采集送检病死猪组织混合样品，碾磨匀浆，反复冻融3次之后，12 000 r/min离心10 min，取上清，用 TakaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver 4.0试剂盒提取核酸。

2.3.2 引物合成

相关引物为由本实验室所保存的参考GenBank中关于CSFV(猪瘟病毒)、PCV2和PRRSV(猪繁殖与呼吸综合征病毒)序列设计并合成的特异性引物[4]。

2.3.3 病原检测

参照一步法RT-PCR试剂盒说明 书， 对CSFV、PCV2和PRRSV进行PCR扩增。反应总体系为50 μL ：2×1 Step Buffer 25 μL， 模板7.0 μL，上下游引物各1.0 μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μ L，Release Free H2O 14 μL；反应条件均为：50 ℃ 40 min； 95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35个循环；72 ℃ 10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。

3 结果

3.1 流行病学调查结果与临床症状

该猪场存栏生猪300头左右，已对CS、PRRS、PR和FMD进行了普免，未曾免疫PCV2。据述，该猪场仔猪少数4～5 d，多数断奶后开始腹泻，粪便呈暗绿色，含有多量豁液，持续性腹泻，消瘦，生长迟缓，抗生素治疗无效，病程长的发病10 d后才死亡，吻突两边有黑色痂块。

3.2 解剖病变观察结果

解剖后可见脾脏柔软、边缘锐薄，肺脏表面塌陷；结肠可见大量白色米粒大小的结节；肠系膜淋巴结肿大、出血；剖解肠道采集到了结节虫虫体；其余脏器未见明显病理变化（见图1）。

3.3 病原核酸检测结果

通过对送检样品进行病原核酸检测（见图2）。电泳结果显示，CSFV和PRRSV的检测结果均为阴性；PCV2检测结果为阳性，扩增条带与预期的1767 bp扩增片段相符，表明送检病死猪存在PCV2感染。

4 小结

结合临床解剖特征及病原检测结果可知，送检病死猪存在猪食道口线虫和猪圆环病毒2型（PCV2）混合感染。临床腹泻可能与PCV2引起的多系统衰竭综合征（PMWS）和寄生虫感染均有一定关系，其中与猪结节虫的感染关系更为密切。食道口线虫幼虫在大肠黏膜下形成结节所致的危害最大，形成结节的幼虫周围发生局部性炎症，当继发细菌感染时，则发生化脓性结节性大肠炎。因此，建议一方面要加强猪群的基础免疫，做好免疫效果及时监测；另一方面要注重加强猪场养殖环境卫生及消毒和驱虫。抓好母猪配种前、产仔前、哺乳仔猪和保育猪四个阶段的驱虫。每个阶段内服伊维菌素或阿维菌素，每千克体重0.3 mg（或按厂家产品推荐剂量），连服5～7 d。

图1 解剖病变结果

[1] 杨 光 友.动 物 寄 生 虫 病 学[M].3版.成都：四川科学技术出版社，2009.1(2013.2年重印)：158.

[2] 陈溥言.兽医传染病学[M].5版.北京：中国农业出版社，2006.8(2014.6重印)：231.

[3] 郎洪武，张广川，吴发权，等. 断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测[J].中国兽医科技，2000（3）：3-5.

[4] ZENG Z， LIU Z， WANG W， et al. Establishment and application of a multiplex PCR for rapid and simultaneous detection of six viruses in swine[J]. Journal of Virological Methods， 2014， 208：102 106.

2016-09-20）

图2 病原检测结果

M：DL2000 Maker ；1：CSFV检测结果，阴性；2：PCV2检测结果，阳性 ；3：PRRSV检测结果，阴性

省校合作计划项目, 黔科合LH字[2014]7670号

徐国（1988—），男，在读硕士，研究方向：动物传染病病原分子生物学

曾智勇（1978—），男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究