HPLC测定安宫牛黄丸中黄芩苷和黄芩素的含量

秦胜萍

【摘 要】 目的：研究HPLC测定安宫牛黄丸中黄芩苷和黄芩素的含量。方法：色谱柱：Hypersil ODS （250mm×4.6mm，5μm）；流速：1.0ml/min；温度：室温；进样量：10μl；流动相：乙腈-0.4%磷酸（黄芩苷、黄芩素流动相比例分别为21∶79、35∶65）；波长：277nm，进样前脱气0.5h。结果：黄芩苷在80～2400mg、黄芩素在5.10～40.80mg范围内回收效果良好。结论：本方法可用于安宫牛黄丸中黄芩苷和黄芩素的含量测定。

【关键词】 安宫牛黄丸；黄芩苷；黄芩素；

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）06-0026-02

安宫牛黄丸是中医 “温病” 范畴的急救药物，对其质量的要求也较高。临床主要用于病毒性脑炎、胰岛素不足型糖尿病、脑中风、原发性高血压、精神障碍、婴幼儿肺炎、股血症、败血症和重型颅脑损伤等[1]。安宫牛黄丸的配方包括牛黄、水牛角、麝香、珍珠、雄黄、朱砂、郁金、黄连、黄芩、栀子和冰皮，其中黄芩的主要成分是黄芩苷和黄芩素，其主要活性为抗菌消炎、增加免疫力、保肝利胆、清热去火等[2]。利用高效液相色谱（HPLC）对安宫牛黄丸中的黄芩苷和黄芩素含量进行测定已取得显著效果[3]。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高压液相色谱仪（美国Agilent 1100型）；精密电子分析天平（AMY 220）；超声波震荡仪（KQ-250B）。

1.2 材料 安宫牛黄丸（国药准字Z21020627，沈阳红药制药有限公司）；黄芩苷标准品（批号：110715-200413，中国药品生物制品检定所）；黄芩素对照品（批号：TCM015080118，南京替斯艾么中药研究所）；乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸为分析纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Hypersil ODS （250mm×4.6mm，5 μm）；流速：1.0ml/min；温度：室温；进样量：10μl；流动相：乙腈-0.4% H3PO4（黄芩苷与黄芩素分别为21∶79、35∶65）；波长：277nm，进样前脱气0.5h。

2.2 溶液的制备

2.2.1 样品溶液的制备 将安宫牛黄丸破碎，准确称0.400g，转移至5ml玻璃瓶中，加5ml CH3OH，超声提取15min，离心后保留上清液，该操作重复2次。将上述三次收集的上清液合并，定容至25ml。在上样前，用0.45μm的过滤器去除大的残渣。

2.2.2 标准品溶液制备 分别准确称取黄芩苷和黄芩素标准品5mg与2.5mg，分别用CH3OH稀释并定容至5ml，浓度为1mg/ml和0.5mg/ml。

2.3 标准曲线 分别精确量取黄芩苷、黄芩素标准品溶液，然后配置系列溶液，并分别吸取20μl进样，根据色谱峰面积Y对浓度X（μg/ml）做线性分析。黄芩苷的回归方程为Y=32160X-3.9419 （r=0.9999），线性范围为80～2400mg；黄芩素Y=41796X-162.87 （r=0.9999），线性范围5.10～40.80mg。

2.4 精密度试验 精确吸取标准品20μl。连续重复6次，测定黄芩苷和黄芩素的峰面积并进行精密度计算，结果见表1。

2.5 稳定性试验 取同一样品，分别于0、1、3、5、7、9h分别加样20μl，测定黄芩苷和黄芩素的峰面积，结果如表2。

2.6 重复性试验 准确称取0.6g的安宫牛黄丸，总共6份。按之前的方法制备成溶液并进行峰面积分析。黄芩苷和黄芩素的峰面积结果见表3。

2.7 回收率试验 准确称取0.2g的已知样品，总共5份，分别加入黄芩苷和黄芩素的标准品，制备成溶液，测定黄芩苷和黄芩素的含量，计算两者的加样回收率分别为100.02%和98.823%，RSD%分别为0.63和1.29，结果见表4。

2.8 样品含量测定 依次取3颗安宫牛黄丸，按上述条件进行制备样品，并按标准曲线计算黄芩苷和黄芩素的含量。结果见表5。

3 讨论

中药制剂成分复杂，且各组分的预处理方式不同，加工方式不同，单纯的将组方药掺杂在一起很难发挥药效[4]。鉴于中药制剂各组分之间的协调性、互补性和相互制约性，必须建立一种检测方法可以对中药组方中的活性物质含量进行测定[5]。尤其是多指标成分的定量分析，可保证临床用药的安全性、有效性和可靠性。目前使用的质量标准都是以生化药物为基础的化学成分分析和测定，与中药的临床疗效的相关性不高，不能完整的反应中药中有效成分的含量[6]。且复方药的成分极为复杂，其有效成分的含量测定会因提取和测定方法的不同而出现差异。安宫牛黄丸由11种药物组合而成，其药理作用机制复杂，药物与药物之间的作用目前还不能得到科学的解释，而黄芩苷和黄芩素是该药的有效成分，必须对两者的含量进行严格的检测，保证药品的质量[7-8]。

研究采用HPLC法对安宫牛黄丸中的有效成分黄芩苷和黄芩素的含量进行分析，确定最佳的优化条件，并对影响HPLC结果的各方面因素进行考察，结果表明HPLC的检测结果准确，可重复性高。利用分光光度计对标准品溶液在200～400nm波长内扫描检测，结果在280nm处有最大吸收峰。研究尝试多种提取方法以寻求更适合的提取方式，结果表明超声波和加热回流提取两种方式的回收效果最高，而超声提取的杂质更少，因此选择超声提取，时间选为15min。分别用甲醇和乙醇进行提取，根据过滤时的难易程度及回收率结果，甲醇的效果更好。流动相经过探索确定为乙腈-0.4%磷酸。综上所述，本法具有精密性、稳定性和重复性好的特点，可用于安宫牛黄丸中黄芩苷和黄芩素的含量测定。

参考文献

[1] 厍宇，郜峦.安宫牛黄丸在中风阳闭证中的应用[J].世界中西医结合杂志，2012，7（2）：155.

[2] 崔爱瑛.安宫牛黄丸的药理及临床研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2012，8（20）：342-343.

[3] 郜清.HPLC法测定安宫牛黄丸中黄芩苷含量[J].安徽医药，2013，17（5）：766-767.

[4] 李文烈，曹海芳，魏刚.中药制剂质量控制的研究进展[J].中国执业药师，2012，9（7）：32-35.

[5] 林辉.HPLC 法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量[J].海峡药，2012，24（11）：79-80.

[6] 杨华，李希，高华娟，等.中药质量生物活性检测的发展现状及思考[J].中药与临床，2014，5（1）：50-53.

[7] 叶世龙，刘爱芹.安宫牛黄丸的实验药理学研究[J].中华中医药学刊，2011，29（9）：1954-1957.

[8] 杨仕珉，詹雪艳，冯欣，等.基于牛黄特征峰的安宫牛黄丸特征指纹图谱研究[J]. 中华中医药杂志，2014，29（9）：2923-2926.

（收稿日期：2016.01.07）