灵芝多糖抗肿瘤作用的免疫分子机制研究

时冉冉 陈娇 宗自卫

（漯河医学高等专科学校生化教研室 河南漯河 462002）

灵芝多糖抗肿瘤作用的免疫分子机制研究

时冉冉 陈娇 宗自卫

（漯河医学高等专科学校生化教研室 河南漯河 462002）

灵芝多糖是一种从灵芝实体中被提取出来的多糖组份，灵芝多糖极易溶于水。很多科学研究表明，灵芝多糖具有一定的免疫调节功能以及一定的抗肿瘤等作用，并且认为在体外灵芝多糖并没有直接的对肿瘤细胞有抑制作用或者杀伤作用，反而在体内灵芝多糖则具有很好的抗肿瘤作用。所以，通常情况下，对灵芝多糖的抗肿瘤作用的研究主要就是通过增加免疫功能，尽管我国很多科学家已经从免疫功能的角度对灵芝多糖的抗肿瘤作用进行研究，但确切的机制并没有明确。因此文章结合具体实验对灵芝多糖的抗肿瘤作用的免疫分子机制进行深入研究。

灵芝多糖 抗肿瘤 免疫分子机制 研究

1 灵芝多糖抗肿瘤作用的实验研究方法

1.1 准备荷瘤小鼠

一般情况下，用于实验的小鼠选取的都是8至10周龄的BALB/ c纯系小鼠，并且用一次性的1ml的无菌注射器，把那些生长状态最佳的S-180腹水瘤传代细胞吸取出来，按照每一只抽取0.15ml的要求穿过小鼠肌肉在右边后肢的腹股沟皮下进行接种，正常喂食这些实验小鼠，一般10天之后把脾脏内或者腹腔内的巨噬细胞提取出来用于灵芝多糖的实验研究。

1.2 荷瘤小鼠脾脏细胞的培养

每次取2只BALB/c荷瘤小鼠，并且采用拉颈椎的方法把小鼠致死，在无菌的环境条件下，把小鼠的脾脏取出来，放在含有少量的Hank液的培养器皿中，通常都是采用两块载玻片夹持的方法把脾细胞碾碎，之后就移入离心管中，并且用吸管吹打一定的次数，用200目尼龙布进行细胞过滤，过滤之后的滤液要进行1500转离心来收集细胞，最后使用Hank液进行清洗三次，然而再通过使用含有10%的新生牛血清以及青霉素和链霉素的RPMI1640培养基进行培养，并且要按照一定的要求配成每毫升8000000个细胞，并且把上述细胞悬液加入在已经加好一定待试药物与对照试剂96孔板的每个小孔中，通常每个小孔需要加入0.1ml细胞悬液，并且总体积为0. 2ml，最后就把用于实验的培养箱放置在湿度饱和、5%的二氧化碳、温度在37摄氏度的环境条件下进行培养，要根据一定的培养时间要求。

2 灵芝多糖抗肿瘤作用的实验方案

2.1 灵芝多糖在体外对脾细胞增殖的量效关系

一般情况下，把实验分成6组，并且每个实验小组有6个样本，一组为对照组，其他5组则都是具有不同浓度的灵芝多糖GLB组，不同浓度通常设置为0.025mg/ml、0.050mg/ml、0.100mg/ml、0. 200mg/ml、0.400mg/ml。并且在96孔的培养板中选定6*6孔的区域加入不同浓度的灵芝多糖，第一列是实验的对照组，之后依次就是具有不同浓度的GLB组，事先要做的就是在对照组的孔内加入0. 1ml的RPMI1640培养液，在其他实验孔内依次加入0.1ml不同浓度的RPMI1640培养液。取两只BALB/c荷瘤小鼠，按照上述方法进行准备小鼠脾细胞悬液，并且在每个小孔内加入0.1ml的小鼠脾细胞悬液。最后培养72小时，检测细胞的增殖情况。

2.2 灵芝多糖提高荷瘤小鼠脾细胞血清中IFN-y的水平

根据实验的不同分组，取32只8至10周龄的小鼠，并且用一次性的无菌注射器取1ml生长状态最佳的S-180腹水瘤传代细胞，并且按照细胞数量为106/ml，0.15ml/只，穿过小鼠的右后肢腹股沟皮下的肌肉进行接种，到了第二天，随机的把32只小鼠进行分成4组，设置一个生理盐水为对照组，其他的小组按照小剂量GLB组，一般为50mg/kg，中剂量GLB组，一般为100mg/kg，大剂量GLB组，一般为200mg/kg。在小鼠的腹腔内分别注射一定的药物，灵芝多糖要用生理盐水进行配置，每天注射一次，连续注射9天。到了第10天，对小鼠进行抽血5ml放在离心管中，在室温的条件下放置3个小时使其在自然状态下凝固，并且剥离凝血块，进行1500转离心，取得上清液进行测量IFN-y的含量。一般采用的是单向方差分析，通过比较实验组和对照组的均数，检查小鼠血清的IFN-y的水平。

3 实验结果的具体分析

3.1 灵芝多糖在体外能够促进小鼠的脾细胞增殖

根据以上的研究分析，灵芝多糖在一定条件下能够促进正常小鼠的脾细胞增殖，文章为了从免疫学的角度进行深入研究灵芝多糖的抗肿瘤机制，首先就要检测灵芝多糖对小鼠脾细胞的增殖作用。实验结果表明GLB在0.05mg/ml-0.4mg/ml的浓度下都能够促进小鼠脾细胞的增殖，并且随着浓度的逐渐增大，促进的效果就越大。

3.2 灵芝多糖能够促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-a

TNF-a细胞一般都是由淋巴细胞以及巨噬细胞分泌产生的，通常情况下，在小鼠的脾细胞内既含有巨噬细胞，也含有淋巴细胞，因此，为了进一步更好的确定灵芝多糖作用的靶细胞，一般都是对小鼠的腹腔内脾细胞进行试验研究。试验结果检测出的数据表明，GLB在0.2mg/ml下对荷瘤小鼠的腹腔内巨噬细胞产生TNF-a具有明显的促进作用，以及统计学上的显著差异P=000，相比较于基础水平而言，增加了112%。

结语：

文章通过具体的小鼠作为试验对象，设置了不同组进行对比分析，并且根据相应的检测结果进行分析灵芝多糖具有抗肿瘤作用的免疫机制，文章首先对实验的相关准备工作进行了详细介绍，其次是实验的具体方案，最后对检测的结果进行分析，从小鼠脾细胞的免疫学角度进行分析灵芝多糖对肿瘤细胞的抑制作用，在一定条件下，不仅能够促进小鼠脾细胞的增殖，而且能够促进小鼠脾细胞的巨噬细胞以及淋巴细胞分泌TNF-a细胞。这次实验研究很好的表明了灵芝多糖具有抗肿瘤作用的免疫分子机制，从而能够对以后的肿瘤研究具有一定的参考价值。

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R73

A

1674-2060（2016）02-0317-01

时冉冉（1986-），女，汉族，河南漯河，漯河医学高等专科学校，研究方向：生物化学与分子生物学。