超高效液相色谱法在药物分析中的应用进展

天津市蓟县药品检验所（301900）霍玉荣

高效液相色谱法是上世纪六十年代产生的一种现代化分析方法，具有分析速度快、分离效率高等优势，是目前药物分析领域重要的检验手段和分析技术[1]。超高效液相色谱法是基于高效液相色谱法的基础上形成的药物分析新技术，它由高压输液泵、高效固定相、信息化、机械化以及高灵敏度的检测机械构成，具有分离速度快、分析效率高，灵敏度高且能反复测试的优点，已被广泛应用于各种药物质量检测中。

1 超高效液相色谱法概论

自2 0 世纪7 0 年代以来，随着高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)技术的不断发展，美国Waters公司于2004年的匹兹堡会议上推出了最新研制的ACQU ITY超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography， UPLC)，其采用细粒径的新型固定相，可获得高达2万块/m理论塔板数的超高柱效，并以系统整体设计的创新技术，全面提升了液相色谱的速度、灵敏度和分离度。超高效液相色谱技术的原理与高效液相色谱技术相同，都是以范德米特方程作为理论基础[2]。范德米特方程为：HETP=AdP+B/v+CdP 2v。其中HETP表示理论塔板高度，A表示涡流扩散系数，dP表示填料微粒直径，B表示分子径向扩散技术，v表示流动相线速度，C表示传质因子。超高效液相色谱仪优点[3]：①1.7μm小颗粒填充因此比高效液相色谱仪具有更好的分离能力。②1.7μm小颗粒提供的柱效比5μm颗粒的柱效提高了3倍。③超高效液相色谱仪采用1.7μm颗粒，比5μm颗粒柱长缩短3倍，柱效不变，结果分离时间缩短而分离度保持不变。④超高效液相色谱法减小颗粒度，使色谱峰变窄，信噪比增大，灵敏度提高。⑤超高效液相色谱能提高质谱离子化效率减小基质效应。

2 超高效液相色谱法在药物分析中的应用

2.1 用于药物的含量测定 李京峰等[4]用超高效液相色谱法测定紫杉肽中紫杉醇的含量。紫杉肽注射制剂以蒸馏水溶解，经2.0mol/L氢氧化钠溶液降解处理后，通过对紫杉醇降解产物的测定，间接标定紫杉肽注射制剂中紫杉醇mm的含量。采用Agilent SB C18（2.1mm×50mm，1.8μm）色谱柱，流动相为乙腈-水（10∶90，V/V），流速0.2ml/min，检测波长240nm参比波长360nm），柱温40℃（±0.5℃），自动进样器温度15℃（±0.5℃），进样体积2μl。结果：紫杉醇浓度在0.31～5.00mg/ml范围内与其降解产物的峰面积呈现良好的线性关系（r=0.9992，n=5）。不同批次紫杉肽注射制剂中每支含紫杉醇的量在26.77～33.19mg范围内。王宇驰等[5]用超高效液相色谱法测定阿奇霉素分散片的含量，此方法准确可靠，具有良好的专属性。陆小云等用超高效液相色谱法同时测定白芍药中芍药苷和芍药内酯苷的含量。

2.2 用于测定药物的有关物质 王勇跃等用超高效液相色谱-梯度洗脱法检测注射用阿洛西林钠的有关物质。色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18，2.1mm×100mm，1.7mm；流动相A为10mmol/L甲酸铵溶液(用氨水调节pH值至6.5)，流动相B为8mmol/L甲酸铵溶液(乙腈/水=200/50)；柱温为40℃；检测波长为210nm；流速为0.43mL/min。结果：阿洛西林钠主峰与其相关物质峰分离良好，检出杂质数量远多于中国药典2010年版二部各论方法；在0.3～90μg/ml范围内阿洛西林呈良好的线性关系(r2=0.9999)，方法的检测限为0.1μg/ml，重复性RSD为0.61%(n=6)。薛巧如等UPLC法测定奈韦拉平的有关物质，此法简便、准确，专属性强。

2.3 测定药物的血药浓度 鲁静，陈天朝用超高效液相色谱法测定血清中苯妥英钠、苯巴比妥和卡马西平的浓度。色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，流动相为乙腈-水（28∶72），流速：0.3ml/min，检测波长220nm，柱温20℃。结果苯妥英钠、苯巴比妥和卡马西平的血清浓度分别在2.5～80.0，5.0～160.0，1.0～32.0μg/m l 线性关系良好，日内、日间精密度（RSD）均小于7.28%，提取回收率为96.18%～103.89%。本方法简便、快速、准确。李碧艳用超高效液相色谱法测定环孢素A的血药浓度。本法操作简便，回收率高，精密度好。

2.4 用于体内药代动力学研究 唐进法等用超高效液相色谱法研究大鼠静脉注射丹红注射液后丹酚酸B的药代动力学行为。方法：大鼠静脉给予丹红注射液后，于不同时间点采血，血浆样品酸化后经乙酸乙酯萃取。色谱条件为BEH ShieldRP18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，流动相为甲醇-乙腈-0.5%甲酸水溶液(29∶10∶61)，体积流量0.3mL/min，检测波长286nm，柱温为30℃。结果：丹酚酸B在0.1705～31.40μg/ml的范围内线性关系良好，日内、日间精密度的RSD均小于7.6%，方法回收率90.0%～92.1%。丹酚酸B的t1/2和AUC0-t分别为(1.21±0.69)h和(4.32±1.06)μg·h/ml。丹酚酸B在大鼠体内的动力学过程符合二室模型。结论：所建立的测定丹酚酸B血药浓度的色谱法内源性干扰峰少，灵敏度较高。彭平等用超高效液相色谱法，PDA检测器同时测定大鼠血清中红景天苷及酪醇的含量。

2.5 用于药物的代谢产物分析 王子铭、胡志伟等用超高效液相色谱法测定大鼠粪便中的桦木醇。采用Waters BEH C18色谱柱(2.1mm×50mm，1.7μm)，流动相为乙腈-水(9∶1)，体积流量0.25ml/min，检测波长为210nm，进样量10μL，运行时间5min。健康大鼠灌胃给药500mg/kg后，在0～24h、24～48h、48～72h、72～96h时间点收集粪便样品，测定粪便样品中桦木醇。结果：测定数据使用分段线性回归方程计算，在低质量浓度1.25～20μg/ml和高质量浓度20～320μg/ml范围内线性关系良好(r＞0.99)，平均提取回收率≥97%，给药后96h内桦木醇累加排泄量为(47.21±5.07)%。本方法简单、快速、准确。张瑞、刘佳等用UPLC法测定小鼠粪便中的10-羟基喜树碱。

3 结语

超高效液相色谱法在药物分析中显示出广阔的应用前景和强劲的生命力，它具有超强的分离能力以及超高灵敏度。超高效液相色谱也有一定的缺点。超高效液相色谱仪器造价高影响了超高效液相色谱仪的进一步推广使用；而且超高效液相色谱技术对色谱柱的要求高，一般厂家很难生产;其进样量少又采用半环方式进样，峰面积重复性差，填充色谱柱的颗粒细，色谱柱容易堵塞，这就导致对样品的要求更高。随着色谱技术的发展，这些问题会得到克服。超高效液相色谱法在药物分析中将会发挥越来越重要的作用。