水黄皮胶囊剂的制备工艺和质量标准

肖成燕， 朱 毅， 董 志*

（1.重庆医科大学药理教研室，重庆400016；2.海南省药品检验所，海南海口570216）



水黄皮胶囊剂的制备工艺和质量标准

肖成燕1， 朱 毅2， 董 志1*

（1.重庆医科大学药理教研室，重庆400016；2.海南省药品检验所，海南海口570216）

摘要：目的 建立水黄皮胶囊的制备工艺及其质量标准。方法 以休止角、吸湿率、临界相对湿度、堆密度为考察指标，确定水黄皮胶囊的处方组成；TLC法对胶囊中的水黄皮进行定性鉴别；紫外分光光度和HPLC法分别测定总黄酮和水黄皮次素的含有量。结果 最佳处方为10％微粉硅胶，临界相对湿度为63.9％，选用0号胶囊即可满足胶囊剂装填要求。TLC鉴别斑点清晰，无干扰。每粒胶囊剂含总黄酮不低于162.42 mg/g，水黄皮次素不低于39.56 mg/g。结论 该工艺路线合理可行，质量控制方法专属性强、重复性好，可用于控制水黄皮胶囊的质量。

关键词：水黄皮胶囊；制备工艺；总黄酮；水黄皮次素；TLC；HPLC；紫外分光光度

水黄皮Pongamia pinnata（L.）Merr.（异名Pongamia glabra）为豆科水黄皮属的半红树植物［1］，具有抗菌、抗炎镇痛、抗溃疡、抗氧化、降血糖以及降血脂等作用。现代研究表明，水黄皮主要含黄酮、三萜、生物碱、脂肪酸及类固醇，其主要活性成分为黄酮类化合物［2-4］，尤其在治疗胃溃疡中，水黄皮次素具有独特的效果［5］。本实验在前期对水黄皮有效部位总黄酮提取、分离、纯化研究［6-7］的基础上，以休止角、吸湿率、临界相对湿度、堆密度为考察指标，进一步对其胶囊剂的制备进行研究，并采用TLC进行定性鉴别，紫外UV和HPLC进行含有量测定，建立合理可行的质量标准，为其工业生产提供理论依据。

1 仪器与试药

XFB-200高速中药粉碎机（吉首市中诚制药机械厂）；标准筛（上虞市申克试验仪器厂）；手工胶囊填充板（长沙市雨花区中诚制药机械厂）；BPH9200A高温鼓风干燥箱（上海蓝豹试验设备有限公司）；AE240电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；SK8200HP超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；EVOLUTION 300紫外可见分光光度计（美国赛默飞世尔科技公司）；LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津公司）。

药用乳糖、糊精、预胶化淀粉、微晶纤维素、微粉硅胶（安徽山河药用辅料股份有限公司）；0号空心胶囊（浙江绿健胶囊有限公司）。水黄皮次素对照品（美国Chroma-Dex公司）；水黄皮总黄酮粉（总黄酮含有量56.39％，水黄皮次素含有量13.74％，自制，水黄皮茎醇经D101大孔树脂纯化后浓缩，减压干燥，即得）。乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 辅料的选择 预试验表明，水黄皮总黄酮原粉的流动性差、吸湿性强，故选用乳糖、糊精、预胶化淀粉、微粉硅胶和微晶纤维素作为辅料，按表1配方混合药粉，过筛，考察流动性和吸湿性，以确定辅料种类。

表1　辅料与水黄皮总黄酮原粉的配方组成

2.1.1 休止角的测定［8］采用固定漏斗法，将3只漏斗串联，使最底端距水平坐标纸1 cm，将药粉沿漏斗壁倒入最上层的漏斗，直到药粉圆锥尖端接触到漏斗口为止，结果见表2。

表2　不同辅料的休止角及吸湿率

2.1.2 吸湿率的测定［9］将底部盛有NaC1饱和溶液的玻璃干燥器于实验前1天，放入25℃恒温培养箱中。精密称取各配方，平铺于已恒重的扁形称量瓶中，厚度约2 mm，瓶盖打开，置于玻璃干燥器中，间隔一段时间称量，结果见表2。

由表可知，水黄皮总黄酮原粉中加入辅料后，其流动性和吸湿性都有所改善。其中，以微粉硅胶为辅料时，其休止角可达到30°左右，而且在75％湿度环境中放置6 h后，仍呈粉末状。因此，选择微粉硅胶为辅料制备胶囊剂。2.2 辅料用量的筛选 为了确定微粉硅胶的最佳用量，按表3配方混合药粉，考察不同配方的流动性和吸湿性，结果见表3。

表3　不同比例微粉硅胶的休止角及吸湿率

由表可知，随着微粉硅胶比例的增加，其流动性和吸湿性逐渐得到改善。当置于75％湿度环境中6 h后，微粉硅胶为5.0％的配方表面有少量黏结，其他配方均为粉末。根据休止角和吸湿率测定结果的综合分析，选择微粉硅胶的最佳比例为10％。

2.3 临界相对湿度的测定［10］将混合药粉干燥至恒重后，平铺于已恒重的称量瓶底部，厚度约2 mm，再置于不同相对湿度的玻璃干燥器中，7 d后称量。结果，相对湿度分别为0.59％、2.23％、3.78％、6.82％、15.41％、24.17％、29.65％。以吸湿率为纵坐标，相对湿度为横坐标，应用SPSS软件作图，测得其临界相对湿度为63.9％，见图1。

图1　不同相对湿度下的吸湿率

2.4 选择胶囊的型号 先称定量筒质量，将适量混合药粉置于其中，再称定其质量。上下振动，至体积不变时读出体积，计算3次，测得堆密度分别为0.618 5、0.616 1、0.610 8 g/mL，平均值为0.615 1 g/mL，RSD=0.39％。根据药效学实验研究结果，水黄皮总黄酮的有效剂量为（标准体质量60 kg）［11］150×0.162 =24.3 mg/kg，日服剂量每人约1.5 g。另外，每粒胶囊可装0.4 g，每日服用4粒，其所占体积约0.65 mL，与0号胶囊0.67 mL接近，故选用0号胶囊填充。

2.5 工艺验证［12］按照上述处方及工艺条件，对3批样品以外观、崩解时限、水分、含有量为工艺的评价指标进行验证，结果见表4。由表可知，各项指标均符合《中国药典》2010年版附录项下对胶囊剂的质量要求，表明该工艺可行，生产出的产品符合要求。

表4　水黄皮总黄酮胶囊工艺验证结果

2.6 薄层鉴别 取本品内容物0.5 g，置于具塞三角瓶中，加甲醇100 mL，超声（250 W、100 Hz）30 min，过滤，水浴蒸干，加水10 mL溶解，石油醚∶乙酸乙酯（92∶8）萃取3次，每次10 mL，挥干脂质部分，移取1 m L，用甲醇溶解，作为供试品溶液。另取水黄皮对照药材2.0 g，同法制成对照药材溶液。再取水黄皮次素对照品1.0 mg，加甲醇10 mL溶解，作为对照品溶液。上述3种溶液各取2～5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮（7.5∶2.5）为展开剂展开，于紫外灯（365 nm）下观察，结果见图2。由图可知，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，呈现出相同颜色的斑点。

1.供试品 2.对照品 3.对照药材图2　水黄皮胶囊的TLC色谱图

2.7 总黄酮含有量的测定

2.7.1 对照品溶液的制备 精密称取真空干燥24 h的水黄皮次素对照品3.61 mg，置于50 mL量瓶中，甲醇溶解，定容至刻度，超声（250 W、100 Hz）30 min，放冷，甲醇补足至刻度，摇匀，即得质量浓度为72.2 μg/m L的水黄皮次素对照品溶液。

2.7.2 供试品溶液的制备 精密称取本品内容物30 mg，置于100 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，超声（250 W、100 Hz）30 min，放冷，甲醇补足至刻度，摇匀，滤过，取滤液1 m L，置于25 m L量瓶中，甲醇定容，即得。

2.7.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.3、0.5、0.7、0.9、1.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，258 nm波长下测定。以吸收度为纵坐标（Y），水黄皮次素质量浓度为横坐标（X），得回归方程Y= 0.101 4X+0.012 5，r=0.999 8，表明在2.16～7.22 μg/mL范围内，线性关系良好。

2.7.4 精密度试验 精密移取对照品溶液0.9 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，258 nm波长下测定其吸收度，重复6次。结果，RSD为0.29％，说明仪器精密度良好。2.7.5 稳定性试验 取供试品溶液适量，每隔3 h测定1次，连续5次。结果，RSD为0.41％，说明该样品在15 h内稳定。

2.7.6 重复性试验 精密称取本品内容物30 mg，共6份，按“2.7.2”项下方法制备供试品溶液，重复6次。结果，RSD为0.65％，表明该方法重复性良好。

2.7.7 加样回收试验 精密称取含有量已知的内容物50 mg，共9份，分成3组，分别按80％、100％、120％的比例精密加入水黄皮次素对照品，按“2.7.2”项下方法制备供试品溶液，进行测定。结果，加样回收率为99.48％，RSD为1.11％。

2.7.8 总黄酮含有量的测定［13］按“2.7.2”项下方法制备3份供试品溶液，计算水黄皮胶囊中总黄酮的平均含有量为507.57 mg/g。根据生产实际，按平均含有量的80％计算，即不得低于406.06 mg/g。若每粒胶囊剂按0.4 g计算，则每粒含总黄酮应不低于162.42 mg。

2.8 水黄皮次素的含有量测定

2.8.1 对照品溶液的制备 按“2.7.1”项下方法制备。

2.8.2 供试品溶液的制备 精密称取内容物30 mg，置于500 m L量瓶中，甲醇定容至刻度，超声（250 W、100 Hz）30 min，放冷，甲醇补足至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.8.3 色谱条件［14］大连依力特Hypersi1-C18ODS2色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为0.1％甲酸溶液（三乙胺调pH=3.0）-乙腈（60∶40）；体积流量0.8mL/min；柱温35℃；检测波长258 nm；进样量20 μL，结果见图3。

图3　水黄皮胶囊中水黄皮次素的HPLC色谱图

2.8.4 线性关系考察 精密移取水黄皮素对照品储备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、10 mL，置于10 m L量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，在“2.8.3”项色谱条件下测定。以峰面积为纵坐标（Y），水黄皮次素质量浓度为横坐标（X）进行线性回归，得到回归方程Y= 149 292X+22 032，r=0.999 9。在7.22～72.2 μg/m L范围内，线性关系良好。

2.8.5 精密度试验 精密吸取水黄皮次素对照品溶液9 mL，置于10 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，测定其峰面积，重复6次。结果，RSD为0.15％，说明仪器精密度良好。

2.8.6 稳定性试验 取同一批号水黄皮胶囊内容物适量，按“2.8.2”项下方法制备供试品溶液，每隔3 h进样1次，共5次，记录峰面积。结果，RSD为1.69％，说明该样品在15 h内稳定，满足测定要求。

2.8.7 重复性试验 取同一批号水黄皮胶囊内容物适量，平行6份，按“2.8.2”项下方法制备供试品溶液。结果，RSD为1.78％，表明该方法重复性良好。

2.8.8 加样回收试验 精密称取含有量已知的水黄皮胶囊内容物15 mg，共9份，分成3组，分别按照80％、100％、120％比例准确加入水黄皮次素对照品，按“2.8.2”项下方法制备供试品溶液，测定含有量。结果，回收率为99.08％，RSD为2.50％。

2.8.9 水黄皮次素含有量的测定 按“2.8.2”项下方法制备3份供试品溶液，在“2.8.3”项色谱条件下测定，计算水黄皮胶囊中水黄皮次素的平均含有量为123.65 mg/g。根据生产实际，按平均含有量的80％计算，即不得低于98.92 mg/g。若每粒胶囊剂按0.4 g计算，则每粒含水黄皮次素应不低于39.56 mg。

3 讨论

目前水黄皮单味药材及其制剂并未收载于《中国药典》中，结合其现有的化学成分和药理研究，本实验对其提取、浓缩、干燥工艺进行了考察，用70％乙醇回流提取3次，减压浓缩至相对密度为1.25～1.30（60℃）的稠膏，然后用50～60℃的程序升温减压干燥，得到表面成蜂窝状、疏松、易粉碎的干膏粉。然后，考察了水黄皮总黄酮原粉的吸湿性和流动性，以休止角、吸湿率、临界相对湿度、堆密度为筛选指标，选用以10％微粉硅胶为最佳辅料的成型工艺。在该工艺下，药粉直接填充胶囊，减少了制粒过程中原料的损失，而且操作简单、稳定、可靠，可满足实际生产过程中胶囊制剂的要求。

基于水黄皮质量标准［15］研究的基础上，本实验采用薄层色谱对胶囊中水黄皮药材进行定性鉴别，发现用石油醚：乙酸乙酯（92∶8）萃取后得到的色谱图不仅较前期依次用石油醚、乙酸乙酯萃取后更清晰，斑点更分明，而且重现性更好。研究表明，水黄皮的主要活性物质为黄酮类成分，因此采用UV和HPLC法分别控制水黄皮胶囊中总黄酮和水黄皮次素的含有量，结果显示，这两种方法准确、可靠、重现性好，可有效控制水黄皮胶囊剂的质量，为水黄皮及其制剂的深入研究提供参考。

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*通信作者：董 志（1960—），男，教授，博士生导师，从事神经药理方面研究。Te1：（023）68486678，E-mai1：zhidong073@hotmai1.com

作者简介：肖成燕（1989—），女，硕士，从事热带天然药物的药理毒理研究。Te1：（0898）66832932，E-mai1：1063007138@qq.com

基金项目：海南省中药现代化专项项目（2011ZY020）

收稿日期：2014-09-09

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.049

中图分类号：R944

文献标志码：B

文章编号：1001-1528（2016）01-0200-04