HPLC法同时测定四味姜黄汤散中3种成分

戎 蓉， 沈 熊， 黄琦芸

（1.上海市精神卫生中心药剂科，上海200030；2.复旦大学附属中山医院药剂科，上海200032）



HPLC法同时测定四味姜黄汤散中3种成分

戎 蓉1， 沈 熊2*， 黄琦芸2*

（1.上海市精神卫生中心药剂科，上海200030；2.复旦大学附属中山医院药剂科，上海200032）

摘要：目的 建立HPLC法同时测定藏药四味姜黄汤散（姜黄、小檗皮、余甘子、蒺藜）中盐酸小檗碱、槲皮素和姜黄素的含有量。方法 四味姜黄汤散甲醇-10％盐酸提取液的分析采用菲罗门Luna-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.1％磷酸-乙腈，梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min；检测波长为360 nm（盐酸小檗碱、槲皮素）和428 nm（姜黄素）；柱温30℃。结果 盐酸小檗碱、槲皮素和姜黄素的线性范围分别为39.6～198 μg/mL、0.326～1.63 μg/mL和25.6～128 μg/mL（r≥0.999 8）。3种成分的平均回收率在96.9％～98.9％之间。结论 该方法简单、灵敏、准确，可用于四味姜黄散的质量控制。

关键词：四味姜黄汤散，盐酸小檗碱；槲皮素；姜黄素；高效液相色谱

黄琦芸，女，主管药师，主要从事医院药学工作。E-mai1：huang.qiyun@zs-hospita1.sh.cn

网络出版日期：2015-08-28

四味姜黄汤散收录于卫生部药品标准——藏药第一册，由姜黄15 g、小檗皮12.5 g、余甘子和蒺藜各25 g组成，具有清热，利尿等功效，用于尿道炎、尿频、尿急［1-2］。目前已有文献报道采用高效液相色谱法（HPLC）分别测定其中姜黄的有效成分姜黄素［1-2］和余甘子中的有效成分没食子酸［3］，但尚未见测定其中小檗皮的有效成分盐酸小檗碱，以及蒺藜有效成分槲皮素的报道。本实验在参考文献［4-6］的基础上，采用HPLC法同时测定四味姜黄汤散中的盐酸小檗碱、槲皮素和姜黄素的含有量，为制定其质量控制标准提供参考。

1 仪器与试药

Agi1ent 1200高效液相色谱仪，包括G1312A二元泵、G1314D可见紫外光检测器等（美国安捷伦公司）；Agi1ent ChemStation B.04.02工作站；赛多利斯R200D电子天平（德国赛多利斯公司）；KQ-250E型医用超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。

四味姜黄汤散各味药材均购自上海市药材有限公司，由复旦大学附属中山医院药剂科中药房张晓康主管药师鉴定，并按文献［1］方法制成四味姜黄汤散。盐酸小檗碱、槲皮素和姜黄素对照品均购自中国食品药品检定研究院。甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 菲罗门Luna-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相A为0.1％磷酸溶液（每100 mL含0.15 g庚烷磺酸钠），流动相B为乙腈，梯度洗脱（0～45 min，25％～84％B）；检测波长为360 nm（0～32 min）、428 nm（32～45 min）；体积流量1.0 mL/min；柱温30℃；进样量20 μL。色谱图见图1。

1.盐酸小檗碱 2.槲皮素 3.姜黄素1.berberine hydroch1orid 2.quercetin 3.curcumin图1　高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatogram s

2.2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品16.3 mg于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得槲皮素贮备液。分别精密称取盐酸小檗碱对照品19.8 mg和姜黄素对照品12.8 mg，置同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解，精密吸取并加入上述槲皮素贮备液0.1 mL，再加甲醇稀释至刻度，即得混合对照品贮备溶液。每1 mL分别含盐酸小檗碱1.98 mg、槲皮素0.016 3 mg、姜黄素1.28 mg。冷藏，避光备用。

2.3 供试品溶液的制备 取四味姜黄汤散供试品约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇-10％盐酸（5∶1，V/V）溶液50 mL，称定质量，超声30 min，再称定质量，用同一溶剂补足减失质量，摇匀，滤过，续滤液用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4 阴性供试品溶液的制备 制剂中小檗皮含有小檗碱，蒺藜含有槲皮素，姜黄含有姜黄素。分别制备缺上述药材的阴性供试品，并按照“2.3”项下方法，制备各阴性供试品溶液。

将对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液分别按“2.1”色谱条件进样。结果显示，供试品溶液色谱中呈现与盐酸小檗碱、槲皮素、姜黄素对照品保留时间相对应的色谱峰，阴性供试品溶液无干扰，色谱图见图1。

2.5 线性关系 精密吸取“2.2”项下制备的混合对照品贮备溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 至10 mL量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件操作，记录峰面积，以峰面积值（Y）对进样质量浓度（X）进行线性回归，得盐酸小檗碱、槲皮素、姜黄素的回归方程（n =5）分别为Y=8 636.3X+125.8（r=0.999 8，39.6～198 μg/mL）；Y=2 178.2X+421.9（r=0.999 9，0.326～1.63 μg/mL）；Y=6 895.7X+392.7（r= 0.999 9，25.6～128 μg/mL）；

2.6 精密度试验 精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液0.5 mL至10 mL量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，按“2.1”项下条件测定，重复进样6次，记录峰面积。结果显示，盐酸小檗碱、槲皮素和姜黄素的峰面积RSD值分别为2.4％、2.9％和2.3％，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验 取同一批四味姜黄汤散6份，按“2.3”项下方法平行制备6份，按上述色谱条件测定，将测定盐酸小檗碱、槲皮素和姜黄素的峰面积代入“2.5”项下的回归方程。结果显示，盐酸小檗碱、槲皮素和姜黄素的RSD分别为2.1％、2.2％、2.9％，表明方法的重复性良好。

2.8 稳定性试验 取供试品溶液室温下避光放置，分别于0、2、4、6、8 h按照“2.1”项下色谱条件进样，测定各成分的峰面积。结果显示，盐酸小檗碱、槲皮素和姜黄素峰面积RSD值分别为2.5％、2.9％、1.8％，表明在室温避光条件下，供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.9 加样回收试验 取同一批已知含有量的供试品6份，每份1 g，精密称定。分别精密加入一定量的盐酸小檗碱（1.98 mg/mL）、槲皮素（0.016 3 mg/mL）和姜黄素（1.28 mg/mL）对照品溶液，按“2.3”项下方法制备，依法测定。结果见表1。

2.10 样品测定 根据处方比例分别制备3批供试品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下方法测定，结果见表2。

表1　加样回收率试验结果（n=6）Tab.1 Results of recovery tests（n=6）

表2　样品含有量测定（n=3）Tab.2 Determ ination of sam p le contents（n=3）

3 讨论

处方中小檗皮主要活性成分为盐酸小檗碱［7］，具有抗菌、消炎，降压等作用，可以用于治疗细菌性痢疾和肠胃炎［8-9］，盐酸小檗碱也是藏药四味姜黄汤散中发挥药效的主要成分。蒺藜中富含黄酮类和皂苷类化合物，黄酮类中的槲皮素具有保护内皮细胞及抗动脉粥样硬化的作用［10-11］。姜黄素是姜黄的主要有效成分之一，具有抗氧化，抗炎，尤其是抗肿瘤等生理学特性［12-13］。这3种成分与四味姜黄汤散的功效主治精密相关，因此本研究采用HPLC法同时测定这3种物质，方法简便、重复性好，以期提高和完善其质量标准。

根据文献［2-6］，考察了多种流动相系统，最终发现0.1％磷酸溶液（每100 mL含0.15 g庚烷磺酸钠）-乙腈组成的流动相体系，采用梯度洗脱的方法，可以达到比较好的分离效果。在波长选择上，经过比较发现，盐酸小檗碱和槲皮素在360 nm、姜黄素在428 nm具有比较强的吸收，且杂质干扰少，故采用可变波长的方法，测定3种物质。

在供试品提取方法上，根据参考文献，并适当调整提取参数，比较了单用甲醇超声提取［1］、甲醇-25％盐酸溶液（4∶1，V/V）超声提取［14］、甲醇-10％盐酸溶液（4∶1，V/V）加热回流［15］，以及甲醇-10％盐酸（5∶1，V/V）超声提取的方法。结果表明，后一种方法提取效果最优。同时，考察了提取时间，最终确定超声提取30 min。

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网络出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detai1/31.1368.r.20150828.1141.002.htm1

Simultaneous determ ination of three constituents in Siwei Jianghuangtang Powder

RONG Rong1， SHEN Xiong2*， HUANG Qi-yun2*
（1.Departmentof Pharmacy，ShanghaiMental Health Center，Shanghai2OOO3O，China；2.Departmentof Pharmacy，Zhongshan Hospital Affiliated to Fudan University，Shanghai2OOO32，China）

ABSTRACT：AIM To estab1ish an HPLC method for simu1taneous1y determining the contents of berberine hydroch1oride，quercetin and curcumin in Siwei Jianghuangtang Powder（Curcumae Longa L.，Berberis kansuensis Schneid，Phyllanthus emblica L.and Tribulus terrester L.）.METHODS The ana1ysis of Siwei Jianghuangtang Powdermethano1-10％ hydroch1oride extractwas conducted on Phenomenex Luna-C18co1umn（250 mm×4.6 mm，5 μm）maintained at 30℃，with 0.1％（v/v）phosphoric acid-acetonitri1e in a gradient e1ution mode as themobi1e phase at a f1ow rate of1.0 mL/min.The detection wave1engthswere set at360 nm for berberine hydroch1oride and quercetin and 428 nm for curcumin.RESULTS The 1inear ranges of berberine hydroch1oride，quercetin and curcumin were 39.6 -198 μg/mL，0.326 -1.63 μg/mL and 25.6 -128 μg/mL（r≥0.999 8），respective1y. The average recoverieswere within the ranges of 96.9％ -98.9％.CONCLUSION Themethod is simp1e，sensib1e，accurate and suitab1e for the qua1ity contro1of Siwei Jianghuangtang Powder.

KEY WORDS：Siwei Jianghuangtang Powder；berberine hydroch1oride；quercetin；curcumin；high performance 1iquid chromatography（HPLC）

*通信作者：沈 熊，男，博士，副主任药师，研究方向为药物新剂型和新技术。E-mai1：shen.xiong@zs-hospita1.sh.cn

作者简介：戎 蓉（1977—），女，药师，主要从事医院药学工作。E-mai1：663rr@sina.com

收稿日期：2015-04-07

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.018

中图分类号：R927.2

文献标志码：A

文章编号：1001-1528（2016）01-0088-04