白血病干细胞介导的白血病耐药性及小白菊内酯的干预作用

宋培燕　刘倩平　章志福　魏　涛（广州市花都区人民医院　广州510800）



白血病干细胞介导的白血病耐药性及小白菊内酯的干预作用

宋培燕刘倩平章志福魏涛（广州市花都区人民医院广州510800）

摘要：目的：分析白血病干细胞介导的白血病耐药性及小白菊内酯的干预作用。方法：以在我院确诊为急性髓系白血病的30例患者作为研究对象，应用免疫磁珠分选法分离白血病干细胞，并将获得的白血病干细胞分为试验组（白血病干细胞+小白菊内酯）和对照组（未加小白菊内酯），应用流式细胞仪检测两组中粘附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表达情况。采用MTT法检测小白菊内酯对白血病干细胞增殖的抑制作用。结果：试验组白血病干细胞粘附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表率明显低于对照组，细胞增殖的抑制率明显高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：小白菊内酯可通过抑制白血病干细胞表面的粘附分子的表达，发挥促进白血病干细胞凋亡的作用。

关键词：白血病干细胞白血病耐药性小白菊内酯干预作用

白血病是一种造血系统恶性肿瘤，严重威胁人类生命、健康。近年来，国内外不断有临床研究结果显示，白血病患者机体内存在的白血病干细胞发挥着促进患者病情发展的作用，可增加白血病耐药性，认为白血病干细胞是白血病患者治疗耐药和复发难治的根源[1]。此外，国内外大量临床研究发现，小白菊内酯可促进白血病干细胞凋亡，对白血病干细胞介导的白血病耐药性也具有干预作用[2]。基于国内外上述研究，我院本次研究对白血病干细胞介导的白血病耐药性及小白菊内酯的干预作用进行了分析，以期能为临床对该课题的研究提供参考。

1　资料与方法

1.1一般资料：本次研究分别选取经病史、临床生化、骨髓穿刺等检查确诊的急性髓系白血病患者（包括初诊的及复发难治的）30例作为研究对象。30例患者中，包括男性17例和女性13例，年龄23～51岁，平均年龄（36.2±1.5）岁。本次研究已事先获得医院伦理委员会批准，患者已在知情同意书上签字。

1.2研究方法

1.2.1试验仪器及试剂：白血病干细胞体外培养基及试剂由Sigma Aldrich公司生产，细胞培养板由Nest公司生产，细胞检测试剂由美国Promega生产，CXCR4+蛋白一抗由美国Santa Cruz公司生产，流式细胞仪由美国Beckman-Coulter公司生产。

1.2.2细胞分组及相关指标检测方法：应用免疫磁珠法分离30例急性髓系白血病患者骨髓获得白血病干细胞CD34+、CD38-，并随机将白血病干细胞分成试验组（白血病干细胞+小白菊内酯）和对照组（未加小白菊内酯）。使用流式细胞仪检测两组中CXCR4的蛋白表达以及CD62L、CD44、CD49d的蛋白表达情况。使用MTT法检测白血病干细胞的增殖活性，具体检测方法为在细胞培养板上的每个孔内接种1.5×103个细胞，共接种96个孔板，培养24h后更换培养基继续培养48h，然后对培养的细胞进行处理，处理结束后加入50mg/mLMTT继续培养3h，最终计算细胞抑制率。

1.3对比指标：本次研究对比试验组和对照组白血病干细胞CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表达情况和细胞增殖抑制率。1.4统计学方法：本次研究过程中得到的符合正态分布的研究数据全部在计算机上用SPSS15.0统计软件包处理，计量资料均采用（±s）表示，均数检验采用t，率的对比指标采用X2检验，P< 0.05表示差异具有统计学意义。

2　结果

2.1两组白血病干细胞黏附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表达率比较：采用流式细胞仪检测两组白血病干细胞黏附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表达水平发现，试验组白血病干细胞黏附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d的蛋白表达率明显低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1所示。

表1　两组白血病干细胞黏附分子CXCR4+、CD62L+、CD44+、CD49d+的蛋白表达水平比较[β-Actin（%）]

2.2两组细胞增殖抑制率比较：采用MTT法检测发现试验组培养后不同时点的细胞增殖抑制率均高于对照组，差异显著（P< 0.05），详见表2所示。

表2　两组细胞增殖抑制率比较（%）

3　讨论

临床研究发现白血病干细胞的耐药性增强是导致白血病治疗失败的主要原因[3]。近年来，随着临床对白血病的不断深入研究，越来越多的学者发现白血病干细胞及其耐药性与白血病的发生和复发存在密切关系。采用传统化疗药物治疗白血病，只能杀死活跃在患者体内细胞周期中的白血病幼稚细胞，对活跃在外周血的白血病干细胞无明显作用，故不能取得显著治疗效果，复发率较高[4]。

小白菊内酯是存在于植物药野甘菊中的一种主要活性成分，本质是一种倍半萜烯内酯化合物。近年来，不断有临床研究发现，小白菊内酯具有抗肿瘤的作用，可诱发肝癌、结肠癌、白血病等恶性肿瘤的肿瘤细胞凋亡，对机体造血干细胞和造血祖细胞产生的影响较小[5]。分析小白菊内酯抗白血病的机制可能是通过抑制患者体内白血病干细胞上的黏附分子，抑制白血病干细胞增殖，促使白血病干细胞凋亡。

我院本次选取30例白血病患者作为研究对象，针对小白菊内酯对白血病干细胞的干预作用进行了研究。结果显示试验组白血病干细胞的粘附分子CXCR4、CD62L、CD44、CD49d蛋白（β-Actin；肌动蛋白）表达率明显低于对照组，采用MTT法检测发现试验组培养后不同时点的细胞增殖抑制率明显高于对照组。该研究结果与上述临床研究结果具有一致性，表明小白菊内酯可对白血病干细胞的增殖产生抑制作用，发挥促使白血病干细胞凋亡的作用。同时也提示对小白菊内酯抗白血病的药理作用进行研究，是探索白血病新治疗药物的一条重要途径。

参考文献

[1]梁英民.酪氨酸激酶抑制剂时代异基因造血干细胞移植在慢性髓性白血病治疗中的地位[J].中华血液学杂志，2014，35（2）：92-93.

[2]王玲玲.干扰素治疗慢性髓细胞白血病的研究进展[J].国际输血及血液学杂志，2014，37（2）：151-154.

[3]章志福.小白菊内酯促进CD34+CD38-白血病干细胞凋亡的表面粘附分子CXCR4机制研究[J].临床和实验医学杂志，2015，14（14）：1155-1158.

[4]李倩，彭琪，夏平方，等.白血病干细胞免疫表型在治疗急性髓系白血病方面的研究进展[J].中国输血杂志，2015，28（4）：462-466. [5]张焕新.磷酸酯酶与张力蛋白同源物和白血病干细胞关系的研究进展[J].国际输血及血液学杂志，2015，38（2）：119-122.

中图分类号：R733.7

文献标识码：B

文章编号：1672-8351（2016）01-0124-02