传染性牛支原体肺炎流行的诊断方法

王忠琴

（辉南县辉发城镇畜牧兽医站，吉林通化135100）

传染性牛支原体肺炎流行的诊断方法

王忠琴

（辉南县辉发城镇畜牧兽医站，吉林通化135100）

本文主要探讨传染性牛支原体肺炎流行的诊断方法，分析了辉南县2013年新引进育肥肉牛呼吸道传染病进行病原学研究。总结传染性牛支原体肺炎防治当中要找准原因，加强疾病预防和饲养管理，早诊断早治疗，以此增强传染病防治效果。

传染性；支原体肺炎；诊断

牛支原体是危害养牛业的重要致病性支原体，目前已证实该病原体呈世界性分布，可导致牛群发生多种病症，致死率高，常规抗生素治疗效果差，且病情容易反复，犊牛及体弱牛病死亡率高［1］。

1 资料与方法

1.1 样本采集

采集血液和肺等各种内脏器官作为检查标本。采集途径：重症病牛或死后不久病牛，剖检取样；依据养殖户病情报告剖检具有典型症状病牛取样；养殖户直接送检病牛。

1.2 检测方法

1.2.1 支原体培养鉴定在PPLO固体培养基（Sigma公司生产）上涂抹小块组织样本，操作均在无菌环境中进行，培养基中放置PPLO肉汤粉（BD公司）、琼脂粉（BD公司）、酵母粉（BD公司），并将于含5%二氧化碳的细胞培养箱中放置固体培养基进行培养并采用光学显微镜观察。鉴定标准：支原体菌落形态发生变化，液体培养基发生颜色变化。

1.2.2 支原体种群鉴定在150毫升灭菌水的Ep-pendorf管中放入小块带支原体菌落的琼脂，先煮沸10分钟，再冰浴1分钟，行血清分离后取上清作为DNA模板。采用16SrRNA通用引物进行PCR扩增，其产物克隆至质粒pMD18-T中，通过专业生物工程技术公司进行序列测定。

1.2.3 细菌分离鉴定在103kPa高压下将40克TSA琼脂与1000毫升蒸馏水混合物蒸气灭菌，蒸气20分钟，制备出TSA固体培养基；在1000毫升蒸馏水中加入TSB粉30克混合，在103kPa高压下蒸气灭菌20分钟，制备出TSB培养基。在无菌操作标准下于TSA固体培养基表面涂抹小块组织样本切面，并采用接种环将组织对样本划线于37℃培养过夜，第2天观察细菌分离情况、菌落形态特征。另外，取纯化单菌落放置于TSB液体培养基离心（转速200转/分钟，时长30秒），然后行药敏测验。

1.2.4 牛结核诊断参照“动物结核病诊断技术GB/T18645-2002”鉴定牛结核菌素皮内变态反应、牛结核菌抗酸染色、牛结核菌培养情况。采用四抗原融合蛋白抗体ELISA进行牛结核抗体ELISA检测。

1.2.5 泰勒虫检测对血涂片进行姬姆萨染色并使用光学显微镜观察，依据18SrRNA基因序列设计特异性引物进行PCR扩增，对泰勒虫感染进行鉴定。

1.2.6 药敏试验对已经分离出的细菌与支原体进行药敏测验，主要方法为药敏纸片法，使用的试纸（杭州天和微生物试剂有限公司生产）包括恩诺沙星、氧氟星、洁霉素、头孢类、氨苄青霉素、氯霉素等。一切操作严格按照规定进行，判断标准参考说明书。

2 结果

2.1 病牛临床症状

牛群发病月龄集中于3月龄至1年左右，多数于引进1周后发病，发病品种多为西门答尔牛与本地黄牛的杂交品种。临床表现：发热（体温42℃）持续3～4天，食欲不振、毛粗乱无光泽、咳嗽气喘、腹泻（粪水样带血），伴随脓性鼻汁、关节炎等，犊牛、体质较差牛病情更为严重。经分析可见主要是病牛胸腔与肺部发生病理变化。

2.2 支原体检测结果

在不含青霉素支原体培养基中检测显示为阴性，另外一个培养基中肺组织病料均为支原体分离阳性。在16SrRNA扩增产物测序分析发现，牛支原体为所分离支原体，与GenBank中牛支原体16SrRNA序列、无乳支原体16SrRNA序列同源性高达99%。

2.3 牛结核检测结果

病牛肺组织抗酸染色、结核菌素皮内变态反应检测均为阴性，后对该地区育肥肉牛结核抗体检测均为阴性。

2.4 细菌分离鉴定结果

不同场所的育肥肉牛以及育肥肉牛不同器官组织细菌分离情况呈现差异。检出细菌为：葡萄球菌、链球菌、G-短杆菌。

2.5 血样泰勒虫检测结果

本研究中共采集了30个血样，22份呈现阳性，血样环形泰勒虫检出率为（73.3%）；采用显微镜深入检查，发现不同牛场中育肥肉牛红细胞中都存在泰勒虫。

2.6 药敏试验

细菌、支原体耐药性严重，不同牛场的牛支原体药敏性存在明显差异，其中环丙沙星居于第一位，其次为左氟沙星、四环素。针对细菌而言，先锋V、头孢拉定、丁胺卡那效果较为理想。

3 结语

传染性牛支原体肺炎既可使牛发生急性呼吸系统疾病，还会导致持续感染，常与细菌、病毒协同作用，导致多种抗生素治疗效果差。牛一旦感染，可持续带菌成为传染源，因此早期进行干预有助于传染病尽早控制，具有重要的临床意义［2］。早期应用抗生素治疗效果明显，可根据药敏实验结果使用敏感药物，例如可选择环丙沙星，部分菌株可使用四环素，另外用药时要保证足够的剂量和科学的疗程。此外本研究中还发现牛群中具有较高的泰勒虫感染率，可采用贝尼尔或咪唑苯脲针对性治疗，提高牛群的抵抗力［3］。

综上所述，传染性牛支原体肺炎防治当中要找准原因，加强疾病预防和饲养管理，早诊断早治疗，以此增强传染病防治效果。

［1］段甫美，赵加发，肖开顺，等.牛传染性支原体肺炎的诊治［J］.云南畜牧兽医，2012（03）：24-25.

［2］何金箭.传染性支原体肺炎在肉牛养殖中的诊断［J］.中国畜禽种业，2015，11（06）：77-78.

［3］李知新，王进香，闫小芹，等.宁夏牛支原体肺炎RT-PCR方法的诊断［J］.中国动物检疫，2012，29（01）：44-45.

S858.23

ADOI编号：10.14025/j.cnki.jlny.2016.18.038

王忠琴，大专学历，辉南县辉发城镇畜牧兽医站，兽医师，研究方向：动物检疫。