板蓝根类制剂抑菌生物效价测定方法的研究

●饶单平

板蓝根类制剂抑菌生物效价测定方法的研究

●饶单平

板蓝根是临床治疗中比较常用的一种中药制剂，具有较好的抑菌和灭菌效果。同时，板蓝根中包含了很多药理成分，只采用指纹图谱对其质量进行控制，会导致有效含量含义不足。本文将通过实验室研究，对其抗菌活性以及生物效价的测定方法进行了综述分析。

板蓝根类制剂；抑菌生物效价；测定方法

中药中的活性成分较多，使其具有多方面的药理作用。目前，理化测定是控制中药质量的主要方法，也就是对其中的化学方法进行检测。但是，中药的药效并不是某一种具体活性成分的单一作用，也不是多种活性成分的简单相加，复方制剂更是如此。所以，只对少数几种成分进行测量和控制并不能完全对其质量进行有效控制，也无法准确反映其临床疗效。为了提高中药的质量控制标准，确保药品临床使用的安全性，有必要在原来的质量控制标准上，增加新的测定方法——生物活性检测，对中药质量进行评价和控制。板蓝根具有清热解毒、利咽消肿等功效，本文就以板蓝根类制为例，对其抑菌生物效价的测定方法进行如下综述。[1]

1 测定设备和主要方法

1.1 测定设备

板蓝根类制剂抑菌生物效价的检测涉及到的检测设备和仪器较多，主要包括：①多功能微生物自动测量分析仪（北京先驱威锋，ZY-300IV）；②高效液相色谱仪（日本岛津，LC-2010A）和色谱工作站（LC Solution）；③生化培养箱（苏州威尔，HPY300）；④色谱柱、4.6mm×250mm Agilent C18和8453紫外可见分光光度计；⑤单人单净化工作台（苏州净化，VS-840-1（2））；⑥高压蒸汽灭菌器（英国AS，AMA440N）；⑦双频脱气智能型超声混均仪（深圳雷邦电子，PS-100AD）。[2]

1.2 测定方法

①制备板蓝根提取液。取4份10克板蓝根对照药材，各加入80克水、乙醚、乙醇与丙酮，放置在500W超声下提取30分钟后蒸干。将50毫升蒸馏水加入提取物后，再用超声提取60分钟，过滤，浓缩为含1g/ml生药的提取液，放置在4℃环境中密封保存。经试验发现，乙醇的提取效果最佳。

②选择实验菌株。板蓝根具有比较广泛的抗菌谱，其提取液对多种细菌，例如伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等，都有较好的抑制效果。采用国家规范文件中的二倍稀释法，对上述标准菌株的MIC（最小抑菌浓度）进行检测，并使用平板转染法测定其MBC（最小杀菌浓度）。

③制备双碟。取2个直径9厘米，高1.6～1.7厘米的平底碟，分别注入20毫升经湿热灭菌溶化后的培养基，使其在碟底内均匀分布，并放置在无菌水平工作台上，待其自然凝固后作为底层。然后再加热融化100毫升灭菌培养基，待其温度下降到48～50℃后，加入100μL枯草芽孢杆菌菌悬液106cfu/ml，将其摇晃均匀后，在2个碟内分别添加5毫升，并在底层上均匀分布，作为菌层，自然冷却即可。

上述操作完成后，依次进行培养基和缓冲液对抑菌影响的实验，根据实验结果，选择最佳的培养条件、中心浓度，然后经过多次对比实验确定生物效应的标准曲线，最后完成回收率实验，对板蓝根的抑菌生物效价和板蓝根片的HPLC进行评价。[3]

2 生物测定法的评价

2.1 适用范围

生物测定法在医药领域中的应用范围比较广泛，其中常见的有测定药物效价、建立检验方法、比较药物作用强度、检测微量生理活性物质和检测农药残留等方面。在有效物质不明确，或者有效物质含量较低，以及化学结构化的中药材、中药材制剂、生物制剂中，生物检测法是一种经常使用的质量控制方法。

2.2 选择合适的药材提取方法

在本次实验研究中，我们对生物检测法对板蓝根药材和相关制剂的质量控制进行了初步探索。因为中药的药用效果会受到提取溶液因素的较大影响，所以选择了4种具有不同极性的凸起溶剂来提取，对板蓝根类制剂使用生物测定法时，提取溶剂的选择进行了对比研究，结果发现，使用乙醇的提取效果最佳。在提取方法方面，本次实验对水煎和超生提取的结果进行了比较，结果显示，超声提取的效果优于水煎。

2.3 回收率和稳定性

生物检测法的重复性较差，所以很多文件都对其可信限率进行了规定。可信限率可以控制方法达到一定的精密度。因此可信限率的大小与实验的各个方面均有密切关系。本次实验研究发现，不同浓度的回收率均位于90～110%之间，可信限率均在10%以内，说明该检测方法具有一定的稳定性。

2.4 应用优势

首先，生物检测法能够对不同产地、不同生产厂家、不同生产批次样品的抗菌效力进行检测，准确有效地评价该药品的抗菌活性，进而准确反应出中药中有效组分的整体抗菌效力。其次，在中药质量控制和评价体系中引入生物活性检测法，既可以对中药的品种和质量进行鉴定，又可以有效提高药效评价。如果将该检测方法和传统的检验方法结合起来，还能够对药品的质量进行更好的控制。

（作者单位：解放军第184医院）

[1]李远,郭辉,李海滨,等. 基于生物热动力学分析的板蓝根抑菌效价检测方法的建立[J]. 世界中西医结合杂志,2012,01（27）:24-27.

[2]鄢丹,任永申,骆骄阳,等. 中药质量生物测定的思考与实践——以板蓝根为例[J]. 中国中药杂志,2010,19（06）:2637-2640.

[3]李寒冰,武彦舒,肖小河,等. 基于抗病毒活性检测的板蓝根质量生物评价方法及优化研究[J]. 中草药,2011,08（34）:1560-1565.