人参益智片质量标准研究

雷明明，刘恬佳，李长惠，于秀华*

(1.长春中医药大学，长春 130117；2.吉林修正药业集团产业总公司，吉林 通化 134000)



人参益智片质量标准研究

雷明明1，刘恬佳1，李长惠2，于秀华1*

(1.长春中医药大学，长春 130117；2.吉林修正药业集团产业总公司，吉林 通化 134000)

目的制定人参益智片质量标准草案，控制制剂成品质量。方法采用薄层色谱法对制剂中的人参、补骨脂等进行鉴别，采用HPLC法测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素总含量。色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-2%冰乙酸溶液(30∶70)为流动相；检测波长为246 nm。结果TLC法对制剂中鉴别药材专属性强、斑点分离清晰、重现性好，阴性无干扰；HPLC测定补骨脂素在0．019～0．19 μg范围、异补骨脂素在0．023～0．23 μg范围内呈良好的线性关系，回收率为97．50%，RSD为2．95%。结论质量检测方法简便易行，专属性强，重复性好，可作为制剂的质量控制标准。

人参益智片；薄层色谱法；高效液相色谱法；补骨脂素；异补骨脂素

人参益智片由人参、酸枣仁、益智仁、补骨脂、当归等中药组成，具有补气活血，安神益智的功效。主要用于认知功能障碍等疾病的治疗[1-3]。笔者采用正交实验设计法、薄层色谱法、紫外分光光度法、红外光谱法，对部分提取工艺参数进行优选和验证，并采用高效液相色谱法( HPLC)对制剂中补骨脂的活性成分补骨脂素和异补骨脂素含量进行测定，使制剂质量可控。

1　材料

1．1仪器LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-10AVP检测器，C18柱(4 mm×25 cm，5 μm)，Lambda25型紫外分光光度计(美国PE分析仪器厂)，CP225D型双量程电子分析天平(德国Sartoris)，AMW220D型电子分析天平(日本岛津)，CAMAG型薄层色谱成像仪(瑞士CAMAG公司),101-1A型数显式电热恒温干燥箱(上海阳光实验仪器有限公司),KQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1．2药品补骨脂素对照品(110739-201115)，异补骨脂素对照品(110738-201012)，人参皂苷Rb1(110704-201223)、人参皂苷Rg1(110703-201128)、人参皂苷Re(110754-201123)，购于中国药品生物检定所，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2．1薄层鉴别

2．1．1人参薄层色谱鉴别[4-5]取本品20片，研细，加水3 mL搅拌均匀，加水饱和的正丁醇30 mL，超声处理30 min，放冷，吸取上清液，加3倍量氨试液洗涤2次，弃去碱液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材0．5 g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品加甲醇制成每1 mL含2 mg的混合溶液，作为对照品溶液1。照薄层色谱法[6]试验，吸取上述溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。分别至日光和置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点和荧光斑点。

2．1．2补骨脂薄层色谱鉴别[7]取本品20片,研细，加甲醇30 mL,加热回流 1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，挥干乙醚，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂对照药材0．5 g，同法制成对照药材溶液。再取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[6]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2．2含量测定[8-10]

2．2．1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-2%冰乙酸溶液(30∶70)为流动相；检测波长为24 nm。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于5 000。

2．2．2对照品溶液的制备分别取补骨脂素、异补骨脂素对照品约10 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密0．1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。

2．2．3供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，取约2．0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2．2．4专属性考查取不含木香的阴性对照液，依法测定，结果阴性对照液色谱在与对照品峰相应的保留时间处无色谱峰，表明无干扰，方法可行。

2．2．5检测波长的确定根据对照品的紫外吸收图，最大吸收峰为246．56 nm，故确定检测波长为246 nm。

2．2．6方法学考察

2．2．6．1标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液2．0、4．0、8．0、10．0、15．0、20．0 μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线。补骨脂素回归方程:Y=8 333 131．55X+11 025．82,r=0．999 9，线性范围:0．019～0．19 μg。异补骨脂素回归方程:Y=5 796 175．73X-4 3421．68,r=0．999 6，线性范围:0．023～0．230 μg。

2．2．6．2中间精密度试验取同一对照品溶液，于不同时间、不同仪器、不同人员分布测定，进样量10 μL，结果RSD补骨脂素为0．8%、异补骨脂素为2．1%。试验结果表明精密度较好。

2．2．6．3稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，进样量10 μL，依法测定，RSD补骨脂素为1．54%、异补骨脂素为1．11%。表明补骨脂溶液在检测时间内较稳定。

2．2．6．4重现性试验取样品，独立依正文方法测定6次，结果每片中补骨脂素与异补骨脂素的总量分别为0．63、0．64、0．64、0．63、0．63、0．64 mg，RSD为0．86%。

2．2．6．5回收率试验取已知含量的样品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约1．0 g，精密称定，加入对照品溶液，按2．2．3方法进行测定，回收率平均值为97．5%，RSD值为2．95%，证明此方法可行。

3　小结

采用高效液相色谱法测定补骨脂素、异补骨脂素的总和，实验中进行了系统适用性实验，包括不同色谱柱、不同流动相、不同流速等条件，表明在一定实验条件下测定结果没有显著性差异，实验方法稳定，可靠，能够控制制剂的内在质量。

[1]肖姝云.轻度认知功能障碍的中西医研究进展[J].甘肃中医,2009,22(5):73-76.

[2]中国防治认知功能障碍专家共识专家组.中国防治认知功能障碍专家共识[J].中华老年医学杂志,2006,25(7):485-487.

[3]洪文.张景岳关于痴呆病的学术思想[J].河北中医,2000,22(7):551-552.

[4]郑飞,戴雨霖,王一博,等.醒酒益肝颗粒处方工艺及质量标准[J].中成药,2015,37(8):1708-1712.

[5]肖霞,曹俊凯.人参当归颗粒的薄层鉴别[J].中国实用医药,2012,7(9):249-250.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社,2015.

[7]迟明艳,何峰,黄勇,等.益肾养元颗粒的薄层鉴别方法研究[J].贵阳医学院学报,2014,39(1):43-45.

[8]黄霞,李振国,王晓燕,等.益身灵丸质量标准研究[J].中医研究,2014,27(12):63-66.

[9]郑楠,郭晏华,刘刈,等.补骨脂不同炮制品的指纹图谱研究[J].辽宁中医杂志,2015,42(4):823-825.

[10]赵婷,朱汀滢,吴斌.补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素测定[J].中成药,2015,37(5):1036-1040.

Quality standard of Renshenyizhi Tablets

LEI Mingming1，LIU Tianjia1，LI Changhui2,YU Xiuhua1*

(1.Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China;2.Jilin Xiuzheng Pharmaceutical Group,Tonghua 134000,Jilin Province,China)

ObjectiveTo draft the quality standard of Renshenyizhi Tablets,control quality of finished product.MethodsTo study the Ginseng Radix and psoralen by TLC;To establish a RP-HPLC method for the determination of psoralen and isopsoralen in preparation.The chromatographic column was C18,the mobile phase was Acetonitrile- 2%glacial acetic acid (30:70) at a flow velocity,and the detection wave length was 246 nm.ResultsThe linear concentration range of Psoralen was within 0.019 μg-0.19 μg,isopsoralen was within 0.023 μg-0.23 μg;The average recovery rate was 97.50% (RSD=2.95%,n=6).ConclusionTLC and HPLC procedures are simple,rapid and accurate,and they can be used for the quality control of Renshenyizhi Tablets.

Renshenyizhi Tablets;TLC;RP-HPLC;psoralen;isopsoralen

10.13463/j.cnki.cczyy.2016.04.016

吉林省卫生厅科研计划项目(2013Z059)。

雷明明(1982-)，女，硕士研究生，主要从事中药活性成分分离与鉴定。

于秀华，女，硕士研究生导师，电话-15843037288，电子信箱-50329313@qq.com

R284.3

A

2095-6258(2016)04-0706-02

2016-01-10)