关于猪源链球菌的分离与鉴定思考

许声豪

（福建省宁德市古田县鹤塘镇农业服务中心，福建 古田 352265）

关于猪源链球菌的分离与鉴定思考

许声豪

（福建省宁德市古田县鹤塘镇农业服务中心，福建 古田 352265）

猪链球菌病指的是有多种致病链球菌感染所引起的一种人畜共患病，其主要特征为败血症、脑膜炎和关节炎等，是造成养殖户减产的主要原因之一，若没有及时控制和治疗，还会威胁人的生命安全，给家庭和社会造成难以挽回的损失。当前，受市场因素的影响，当前我国养猪业不断发展和壮大，猪链球菌病的发病率随之升高。本文从某养猪场内分离到的多猪链球菌为研究对象，对其进行了分离和鉴定，系统的分析了猪源链球菌的病原学特性，希望能够为养猪业的稳定发展提供一些参考。

猪源链球菌；分离；鉴定；病原学特性

某养猪场饲养的40头仔猪突发猪链球菌病，主要表现为体温升高、呼吸不畅、食欲不振、嗜睡严重等症状，部分猪还出现了出血性红斑、粪便过稀的情况。经解剖检查可见，患者腹部皮下组织、腹股沟淋巴结、肺部出血明显[1]，脾胃肿胀、颜色变深，肾脏有少量红色出血点。为抑制病情进一步发展，该养猪场采用了抗菌药物和抗生素对患猪进行治疗，但收效甚微。本文从病原学入手，对收集到的患猪病样进行了生态学、培养特性和血清血鉴定等试验，具体情况如下。

1 材料和方法

1.1 材料

分离和鉴定所用的材料均取自于该猪场病猪，主要有脾胃、淋巴结和皮肤等组织，所选用的工具均购于市场，包括微量生化管、药敏纸片、链球菌乳胶凝集标准诊断试剂盒等，猪链球菌2型阳性血清、小白鼠由某农业大学生物部提供。以上材料均符合试验要求。

1.2 细菌学检查

取少量样本，将其分别涂抹于普通琼脂平板和鲜血琼脂平板上，放入温箱内培养1 d，室内温度维持在36～37 ℃，革兰氏染色后镜检。将镜检中发现的革兰氏阳性成双或短链状菌落接种到马丁琼脂平板和血清琼脂平板上，继续培养1 d，温度36～37 ℃，完成上述步骤后，选取某些较为可疑的菌落进行染色处理，镜检观察，然后接种到THB培养基中，进行增菌培养。THB培养基中应有葡萄糖（0.2%）、犊牛血清（1%）等辅助培养成分[2]，培养温度37 ℃，培养时间1 d。

1.3 生化和生长试验

将细菌学检查中分离出来的纯培养菌株取出，接种到血清琼脂培养基中，培养温度37 ℃，培养时间1 d，完成该步骤后，观察培养基中出现溶血现象的菌落，按照步骤，将其中的典型部分分别接种到葡糖糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、山梨醇、木糖等培养基中，进行常规生化试验和鉴别生化试验，记录所得结果。最后，将不同培养基中生长出的菌株分别接种到NaCl、马尿酸钠、七叶苷、明胶液化等培养基中，进行生长试验。

1.4 动物致病性实验

选取8只体重为20～22 g左右的小白鼠，将THB培养皿培养朱的菌株，注射到4只小白鼠体内，注射剂量为0.2 mL/只，另外4只注射生理盐水，剂量0.2 mL/只，对比以上8只小白鼠的生存状况。

1.5 溶血试验

溶血试验分为两种，及平板法和接触法。平板法指的是将链球菌接种在鲜血平板上（5%），培养温度37 ℃，培养时间1 d，观察菌落的生长情况，若其周围有明显的溶血环，则判断为阳性。接触法指的是将菌株接种在THB培养皿中，培养温度37 ℃，培养时间1 d，然后取50 μ L菌液，滴注在顶板上，将其与血红细胞混合，观察1 h后得出鉴定结果。

1.6 药敏试验

采用纸片扩散法，将选定的链球菌接种在THB培养基中，培养24 h后，将生理盐水稀释，放入振荡器中震荡，得出浑浊液，在无菌操作中，使用习惯吸取0.2 mL放于血清琼脂平板上，注意涂抹均匀，加盖静置5 min后将药敏试纸贴在平板上，轻轻按压，使其贴附在培养基表面。每个平板均贴5张药敏试纸，试纸与试纸之间的距离应在2 cm左右。完成以上操作后，将培养基放入温箱，培养20～24 h，观察实验结果。若抑菌圈直径达到了15 mm或以上，则判断为高度敏感，若抑菌圈直径在10～15 mm之间，则判断为中度敏感，若未超过10 mm，则判断为耐药[3]。

2 结果与分析

2.1 细菌学检查结果

细菌学检查结果显示，菌落中有大量的革兰氏阳性、短链状、散在的球菌。分离结果显示，菌落在鲜血琼脂培养基上生长情况良好，大部分菌落呈圆形，表面光滑，边缘整齐，颜色为灰色或者灰白色，并带有一些小的菌落有明显的β型溶血。普通琼脂培养基上菌落生长状况一般。

2.2 生化和生长试验结果

分离菌株受温度影响较大，36～37 ℃时生长良好，10 ℃或40 ℃时生长不良或者不能生长。分离菌株能够发酵葡糖糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、山梨醇、木糖，NaCL、马尿酸钠、七叶苷、明胶液化的生化结果均为阴性。

2.3 动物致病试验结果

接种病料的4四只白鼠均在20 h内死亡，剖检发现，白鼠的肝脾、肾脏组织明显变大，膀胱充盈，胸腔积液，心脏出血。对白鼠胸腔积液进行革兰氏染色镜检后发现，有很多单个或承兑的短链革兰氏阳性球菌。其余4只小白鼠存活情况良好，未出现不良反应，此结果表明，分离菌株有较强的致病性。

2.4 溶血试验结果

两种方法检测结果均显示为β型溶血。

2.5 药敏试验结果

分离菌株对头孢噻呋、头孢他啶、阿莫西林、氧氟沙星高敏，对阿米卡星、氯霉素、环丙沙星中敏，对青霉素、恩诺沙星、卡那霉素、红霉素、庆大霉素、强力霉素、新霉素抗药。

3 结论

根据以上检验结果，若出现猪链球菌病史，应先进行药敏试验，避免滥用抗生素，根据实际情况选择适当的给药途径，保证连续用药。同时，做好综合性的防护措施，搞好卫生，定期消毒，加强管理，定期免疫接种，提高猪的抗病能力。

[1]江甜，胡智斌，谷长勤，等.7型猪链球菌的分离鉴定及特性[J].中国兽医学报，2011，31（10）.

[2]赵海忠，王生奎，张以芳.猪链球菌的分离鉴定及药敏试验[J].湖北畜牧兽医，2008，（5）：1453–1457.

[3]李肖梁，马有智，方维焕，等.猪源链球菌的分离与鉴定[J].黑龙江畜牧兽医，2003，（10）：8-9.

（编辑：张淑凤）

S852.61

B

1006-799X(2016)18-0105-01

许声豪（1960-），男，福建古田人，兽医师，主要从事兽医工作。