连理汤对感染后肠易激综合征患者结肠黏膜NLRP-3及PGRP-4的影响

廉洁

山西省中医院，山西 太原 030000

连理汤对感染后肠易激综合征患者结肠黏膜NLRP-3及PGRP-4的影响

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山西省中医院，山西 太原 030000

目的：探讨连理汤对感染后肠易激综合征患者结肠黏膜NLRP-3及PGRP-4的影响。方法：将感染后肠易激综合征患者48例分为2组，治疗组予连理汤，对照组予得舒特，连续4周。采用半定量症状计分法，记录治疗前、治疗后2周及4周症状计分变化；采用荧光定量PCR技术和Western-blot技术检测结肠NLRP-3、PGRP-4变化。结果：治疗组总有效率为83.33%，对照组总有效率为79.16%，2组总有效率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗前，PI-IBS患者结肠黏膜NLRP-3表达上升、PGRP-4表达下降；治疗后，治疗组患者结肠黏膜NLRP-3表达下降、PGRP-4表达上升，与治疗前比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：连理汤具有明确缓解PI-IBS患者腹痛、腹泻症状的效用，其疗效靶点考虑与上调NLRP-3、PGRP-4表达，提高肠道先天免疫反应，维持肠黏膜免疫屏障完整相关。

感染后肠易激综合征；连理汤；NOD样受体-3（NLRP-3）；肽聚糖结合识别蛋白-4（PGRP-4）

部分肠道感染患者在急性肠道感染恢复后，仍存在腹痛、腹部不适、腹泻等症状，即所谓感染后肠易激综合征(post-infectious irritable bowel syndrome，PI-IBS)，这类患者占消化科就诊患者20%以上[1～2]。生理情况下，肠道处于弱炎症状态，弱炎症主要是先天免疫(innate immune)发挥重要作用，它主要通过模式识别相关危险分子，激活巨噬细胞、NK细胞等，启动防御机制，通过抵御外来抗原对消化道损害，维持肠黏膜屏障完整，减少有害物质透过肠道屏障，渗入黏膜下层，从而保证肠道共生菌群正常[3]。病理状态下，肠道先天免疫失衡，模式识别分子如NOD样受体家族(NLRs)、Toll样受体家族(TLRs)、肽聚糖结合识别蛋白家族(PGRPs)表达异常，均有可能导致肠道防御机制受损，导致大量外来抗原入侵消化道，引起肠道功能失调[4]。笔者在中医药理论指导下，从“湿热邪毒留恋，其泻乍发乍止”角度出发，结合上述研究进展，应用随机、对照设计，观察连理汤对于PI-IBS患者临床症状、NOD样受体-3(NLRP-3)、肽聚糖结合识别蛋白-4(PGRP-4)表达的作用。

1 临床资料

1.1 一般资料 全部病例均源自于山西省中医院门诊患者48例，采用随机、对照、开放试验设计：随机号应用简明统计分析软件设计随机数字表后取号将患者分为2组各24例，治疗组男14例，女10例；平均病程(1.41±0.29)年，平均年龄(46.73±13.21)岁。对照组男16例，女8例；平均病程(1.36± 0.38)年，平均年龄(47.10±12.94)岁。2组年龄、病程、性别及症状计分等基线资料经统计学处理，差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 诊断标准 参照2006年功能性胃肠病罗马Ⅲ诊断标准关于肠易激综合征中相关内容[5]。中医诊断标准参照中华中医药学会发布《中医内科学常见病诊疗指南·西医疾病部分》中关于肠易激综合征中医辨证论治内容，符合脾虚湿盛证[6]。

1.3 纳入标准 符合诊断标准；年龄18～65岁；签署知情同意书。

1.4 排除标准 不符合诊断标准；伴有心脑血管疾病、精神病，肝肾功能障碍者；伴有消化道肿瘤者；孕妇或近3月有意怀孕者；不能理解知情同意书者。

2 研究方法

2.1 治疗组 给予免煎中药制剂，连理汤(黄连、炙甘草各8 g，茯苓12 g，白术15 g，人参、干姜各6 g，江苏江阴天江药业有限公司生产)，用200 mL水冲服，每天1剂，分2次服用，连续4周。

2.2 对照组 给予匹维溴铵(法国苏威制药生产，国药准字：H20120127，商品名：得舒特)，50 mg，每天3次，连续4周。

3 观察指标与统计学方法

3.1 症状计分 参照罗马Ⅲ标准以及中华中医药学会发布《中医内科学常见病诊疗指南·西医疾病部分》中关于肠易激综合征相关内容，采用半定量计分法，将PI-IBS症状列为主要症状即腹泻(0分：无症状、2分：大便每天3次；4分：大便每天3次以上)；次要症状即腹部不适(0分：无症状；1分：偶有腹部不适，不影响工作；2分：腹部不适频繁，严重影响工作)，腹痛(0分：无症状；1分：偶有腹痛，不影响工作；2分：腹痛频繁，严重影响工作)。

3.2 PI-IBS患者结肠黏膜NLRP-3、PGRP-4蛋白及 mRNA表达 采用 Real-timePCR技术和western-blot技术检测患者结肠黏膜 NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表达，具体实验步骤严格按说明进行。NLRP-3、PGRP-4及GAPDH引物委托广州吉坤生物技术有限公司完成。NLRP-3、PGRP-4一抗购自美国SanTa公司，二抗购自武汉博士德生物有限公司。

表1NLRP-3、PGRP-4及GAPDH引物序列

3.3 统计学方法 应用SPSS18.0 for Windows统计软件，数据以()表示，符合正态分布资料采用单因素方差分析(ANOVA)检验；若为非正态分布资料采用Mann-Whitney U秩和检验。

4 疗效评价与研究结果

4.1 疗效评价 主要症状腹泻改善为疗效评价终点，即采用单一疗效评价作为主要评价手段，综合考虑总体症状计分变化以判断临床疗效。

4.2 2组临床疗效比较 全部病例均完成本次临床观察，治疗组临床完全缓解6例，显效4例，有效10例，无效4例，总有效率为83.33%。对照组临床完全缓解5例，显效5例，有效9例，无效5例，总有效率为79.16%。2组总有效率比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

4.3 2组治疗前后主要症状计分比较 见表2 。治疗后，2组主要症状腹泻均明显改善，治疗后2周、治疗后4周症状计分与治疗前比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表2 2组治疗前后主要症状计分比较() 分

表2 2组治疗前后主要症状计分比较() 分

与治疗前比较，①P＜0.05

组别治疗组对照组n 24 24治疗前7.24±0.25 7.31±0.17治疗后2周3.65±0.42①3.89±0.38①治疗后4周2.14±0.16①2.61±0.20①

4.4 2组治疗前后 NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表达比较 见表3 。治疗前，PI-IBS患者结肠黏膜NLRP-3表达上升、PGRP-4表达下降；治疗后，治疗组患者结肠黏膜NLRP-3表达下降、PGRP-4表达上升，与治疗前比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；而对照组患者治疗后结肠黏膜NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表达与治疗前比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

表3 2组治疗前后NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表达比较()

表3 2组治疗前后NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表达比较()

与治疗组治疗前比较，①P＜0.05；与对照组治疗前比较，②P＞0.05

组别治疗组n对照组时间治疗前治疗后治疗前治疗后24 24 24 24 NLRP-3蛋白1.46±0.14 0.86±0.11①1.42±0.12 1.37±0.09②PGRP-4蛋白0.82±0.07 1.38±0.10①0.86±0.13 0.75±0.08②NLRP-3 mRNA 1.52±0.10 0.85±0.15①1.54±0.08 1.49±0.11②PGRP-4 mRNA 0.89±0.06 1.44±0.13①0.92±0.14 0.86±0.08②

5 讨论

流行病学资料已明确证实胃肠道感染与IBS之间存在密切联系，有学者依据罗马Ⅲ型标准将PI-IBS的定义为以前未患IBS个体，早期胃肠道感染恢复后出现IBS症状；胃肠道感染符合以下2条或2条以上特征：发热，呕吐，腹泻，粪便标本致病微生物培养阳性[7]。中医学将PI-IBS归属于泄泻范畴，诚所谓“泄泻之由，无不由于脾胃”。PI-IBS从临床特点看“其病乍发乍止”，与休息痢病机相似，《诸病源候论》指出其形成是由于肠胃虚弱，胃管有停饮，冷热气乘之而成。笔者在上述理论指导下，提出温中健脾为本，佐以清热化湿为标，应用连理汤治疗PI-IBS患者临床疗效可靠，该方具有明确缓解腹泻、腹痛及腹部不适的效用，其疗效与得舒特基本相似。

早期胃肠道感染导致的肠道黏膜损伤、肠道屏障功能受损、肠道通透性改变和肠道微生物失衡，以淋巴细胞浸润、炎症因子释放、肠神经内分泌细胞增殖等为主要表现的肠道持续性、低级别炎症反应状态，肠道感觉、运动功能和脑-肠轴功能异常等因素都可能参与PI-IBS的发病机制[8]。NLRP-3炎症小体是由NOD样受体分子3、IL-1β、ASC等分子构成蛋白复合体，主要表达于上皮细胞，属于一种可调节炎症反应的胞内受体，参与机体先天免疫防御[9]。有研究证实，PI-IBS患者小肠细菌过度生长，导致NLRP-3炎症小体表达上升，促使caspase-1活化，从而裂解前体形成的IL-1β使其成为有生物活性的IL-1β，同时，NLRP-3炎症小体可诱导激活Toll样受体识别后激活NF-κB途径，从转录水平增加固有层巨噬细胞中IL-1β前体的表达，从而引发肠道炎症反应[10]。本研究结果发现，治疗前，PI-IBS患者NLRP-3表达增加，该变化与患者临床症状呈正相关；而予中药连理汤治疗后，患者PGRP-4表达下降并伴随症状逐步改善。

肽聚糖作为先天免疫理想靶标，在宿主体内是不能自行产生的，而多源于外来抗原，是重要的病原相关模式分子，而肽聚糖结合识别蛋白(PGRPs)通过识别肽聚糖，水解肽聚糖，并阻断Toll样受体信号通路，诱导产生抗菌肽，发挥杀菌作用[11～12]。PGRP-4主要表达于肠黏膜上皮细胞，具有直接杀菌和清道夫作用，参与机体炎症反应，能够帮助机体维持健康的肠道菌群，保护宿主免受结肠炎的损害[13～14]。本研究发现，治疗前，PI-IBS患者结肠黏膜PGRP-4表达下降，该变化与患者临床症状呈正相关；而予中药连理汤治疗后，患者PGRP-4表达上调并伴随症状逐步改善。

综上，连理汤能缓解PI-IBS腹痛、腹泻等症状，笔者推测其效用靶点可能与下调NLRP-3表达，上调PGRP-4表达，提高肠道先天免疫反应，维持肠黏膜免疫屏障完整相关。

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（责任编辑：骆欢欢，李海霞）

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0256-7415（2016）05-0080-04

10.13457/j.cnki.jncm.2016.05.031

2016-01-22

廉洁（1983-），女，住院医师，主要从事脾胃病科临床工作。