猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定技术探讨

杨 恒

（河南省济源市动物卫生监督所，河南 济源 454650）

猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定技术探讨

杨 恒

（河南省济源市动物卫生监督所，河南 济源 454650）

目的：研究和探讨猪场副猪嗜血杆菌感染的分离培养鉴定的相关技术问题。方法：从山西省多个猪场送检的270例疑似样品实施副猪嗜血杆菌检测。然后再用琼脂扩散的试验对分离菌株实施血清型进行鉴别和评定。结果：在270例疑似样品中最后分离鉴定出了75株副猪嗜血杆菌，分离率为27.8%。结论：目前，副猪嗜血杆病有不同程度的感染，有血清1，4、5，12，13型，其中最为流行的是血清4型和血清5型。患上此类疾病跟季节以及猪的日龄是有关系的。

猪场；副猪嗜血杆菌；分离鉴定；技术探讨

定居在健康猪的上呼吸道的一种常在菌是副猪嗜血杆菌，它在相应的条件下侵入机体并且引发病猪的多发性浆膜炎，关节炎以及脑膜炎等疾病，近年来，随着养猪业发展的越来越大，患此疾病的病猪也越来越多，这不仅增加了断奶到保育阶段仔猪的发病率以及死亡率，也增加了养猪业的经济损失。此类疾病现已得到越来越多的关注[1]。本文对相应疑似品种采用细菌分离培养结合多聚酶链式反应技术对从山西省11个市的多个猪场送检的270例样品实施副猪嗜血杆菌的分离鉴定，然后再用琼脂扩散的试验对分离菌株实施血清型进行鉴别和评定，以分析此类疾病的发生跟季节以及猪日龄的关系，了解到副猪嗜血杆菌疾病的流行情况，以达到对此病的防控以及治疗，具体报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

从山西省11个市的多个猪场送检的270例疑似样品的病猪，具体是采集它们的鼻拭子以及疑似发病猪，病死猪或者发病猪的脑，肺脏，关节，心脏等。

1.2 方法

副猪嗜血杆菌的标准阳性血清是山东省农业科学院畜牧兽医研究所保存提供的。一对特异引物是由上海生物工程有限公司合成的。其中上游引物是5-GTGATGAGGAAGGGTGGT-GT-3；下游引物为5-GGCTTCGTCACCCTCTGT-3。通过无菌的操作采集了多个猪场的鼻拭子和疑似副猪嗜血杆菌病的病死猪或者发病猪的脑，肺脏，关节，心脏等。在肿瘤特异性移植抗原培养基上划线接种NAD和新生的牛血清，把它放在37℃的培养箱中36～72 h，观察其菌落特征。然后用革兰氏染色镜检验其中圆形，光滑湿润，无色透明的露珠样菌落，把检验出可疑的菌落采取纯培养的方式进行培养。然后从副猪嗜血杆菌中分离株培养物中提取其DNA，采取直接煮沸的方法[2]。

1.3 观察指标

为了确定各分离株的血清类型，根据特定的方法制备来分离菌株的血清学分型抗原，用各种血清型标准血清对各种分离株，以此来进行琼脂扩散的试验。最终统计副猪嗜血杆菌分离出的阳性率。阳性率=（阳性数/分离株数）*100%。

1.4 统计学分析

组间差异采用ANOVA对不同时间以及不同年龄段的猪副猪嗜血杆菌的感染阳性率进行分析检验，组间差异具有统计学意义（P<0.05），调查分析副猪嗜血杆菌所分离的菌株不同血清型流行病学的情况。

2 结果

2.1 不同时间的副猪嗜血杆菌分离出菌株的检测结果

在270例疑似样品中最后分离鉴定出了75株为阳性。此种疾病发病率最高的时候是在每年3，4，10，11，12月份（P<0.05）。由此说明，此疾病的发病率最低是在夏季，其他季节发病率都较高。详见表1。

表1 不同月份副猪嗜血杆菌分离菌株的检验情况

2.2 不同日龄猪副猪嗜血杆菌感染的情况

对75份副猪嗜血杆菌阳性样品进行统计，有23例的日龄是0～30日，35例日龄是31～50日，13例日龄是51～80，4例日龄是81日以上。从此统计可看出，31～50日龄的小猪是副猪嗜血杆菌的主要感染保育所舍的。

3 讨论

现在已知的副猪嗜血杆菌的血清型已经有15种，与国内外流行的血清型还都不尽相同，所以对此疾病的防治有很大困难。它是猪上呼吸道的一种常在菌，在特定的条件下会侵入机体，从而引起全身性的疾病。其所影响的是2～4周龄的小猪，发病阶段是在断奶后和保育的时候。本文研究得知，在270例疑似样品中最后分离鉴定出了75株副猪嗜血杆菌，阳性率为27.8%，通过血清型的鉴别和评定，显示有血清1，4、5，12，13型，其中最为流行的是血清4型和血清5型，这跟蔡旭旺等人的研究结果有一定的不同，也许是因为地域不同，环境差异所导致的。本研究还发现此种疾病发病率最高的时候是在每年3，4，10，11，12月份。由此说明，此疾病的发病率最低是在夏季，其他季节发病率都较高，并且此种疾病多发于31～50日龄的小猪。所以通过本研究可以判定的是此疾病多发的季节以及猪的日龄，这为副猪嗜血杆菌病的防治提供了重要线索。

[1]张勇，赵兴绪.陕西省规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选[J].河南农业科学，2016，（4）.

[2]杨春蕾，池晶晶，张莉.天津部分猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定[J].动物医学进展，2016，（3）.

（编辑：尹 云）

S858.28

B

1006-799X(2016)22-0099-02

杨 恒（1987-），男，河南济源人，助理兽医师，主要从事动物、动物产品的检疫工作和其他有关动物防疫的监督管理执法工作。