中药单体抗肝纤维化实验研究概况

杨增艳

广西壮族自治区民族医药研究院，广西　南宁　530000



中药单体抗肝纤维化实验研究概况

杨增艳

广西壮族自治区民族医药研究院，广西南宁530000

【摘要】肝纤维化是指肝细胞发生坏死或炎症刺激时，由于肝脏中细胞外基质的增生与降解失去平衡，导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积的病理过程。对于肝纤维化的治疗，中医药临床疗效较好。随着相关研究的不断深入，应用分子生物学技术，针对肝纤维化作用机理的研究也不断增加。笔者从细胞学基础研究、细胞外基质研究、细胞因子、生化指标方面对中药单体抗肝纤维化作用的实验研究进展予以综述。

【关键词】肝纤维化；中药；单体；实验研究

肝纤维化(hepatic fibrosis)是因乙肝、丙肝等肝炎病毒的持续感染或其他化学物质、血吸虫等因素引起的肝脏纤维组织弥漫性增生，是慢性肝炎向肝硬化发展的必经阶段。随着对肝纤维化研究的不断深入，国内外学者认为，肝纤维化的形成与肝脏的实质细胞、非实质细胞及炎症细胞等密切相关。由于多种致病因子的作用激活了肝星状细胞(HSC)使之转化成肌成纤维细胞，同时大量合成胶原等细胞外基质(ECM)，从而造成ECM过度沉积，最终导致肝纤维化的发生。

中医药治疗肝纤维化在临床取得了确切的疗效，引起国内外学者越来越多的关注。文献资料表明，抗肝纤维化研究较多的单味中药有三七[1]、丹参、丹皮、赤芍、当归、土鳖、桃仁、叶下珠、溪黄草、黄芪、排钱草、黄根等；中药复方有复肝宁、甲乙煎、揉肝抑纤饮、肝心宁等。上述研究，部分已在药效学研究的基础上，对其抗肝纤维化活性部位成份及其作用机制进行研究，但对中药单体或从中药中提取出的有效成分的研究不多。近年来，应用分子生物学技术来研究抗肝纤维化的作用机制较多，集中在细胞学基础研究、细胞外基质研究、细胞因子研究三个方面[2]，而对与肝纤维化相关的血液生化指标及肝组织病理变化的观测也是研究的热点。本文拟围绕以上四个方面的研究，就中药单体抗肝纤维化实验研究作一综述。

1细胞学基础的研究

肝星状细胞在肝纤维化发展变化过程中发挥着重要的作用，活化后的肝星状细胞不仅合成胶原能力增强，而且也是基质金属蛋白酶(MMPs)和组织抑制因子(TMPs)的主要来源。TMPs是抑制MMPs的一组多功能因子。在肝纤维化动物模型中，TMP-1表达水平增加而MMP表达会相应减少，当两者平衡失调，纤维型胶原将发生沉积，导致肝纤维化程度加重。

赵东强等[3]在体外培养HSC的基础上，采用MTT法、透射电镜、流式细胞术及Tunel技术进行观测，发现丹参单体IH764-3具有抑制HSC增殖与促进HSC凋亡的作用。

熊果酸是一种广泛存在于多种药用植物的中药单体，申氏等[4]通过体外诱导活化型HSC-T6细胞，发现熊果酸抑制HSC-T6增殖，其诱导HSC-T6细胞凋亡可能与降低Bcl2/Bax比值，激活caspase3蛋白有关。

兰天等[5]采用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激人肝星状细胞株(LX-2)诱导肝纤维化细胞模型，通过虎杖苷进行干预，利用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。发现虎杖苷能显著抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞α-SMA的表达。

刘丽等[6]应用体外细胞培养技术，观察丹参单体H764-3对鼠肝星状细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响，发现丹参单体H764-3干预MMP-13mRNA的表达强度明显上调，同时TMP-1mRNA表达受到抑制。

川芎嗪是从伞形科植物川芎的根茎提取出来的有效成分，别名四甲基吡嗪。川芎嗪抑制HSC的增殖，减少Collagen-I 的合成从而具有抗肝纤维化作用[7]。

2细胞外基质的研究

在正常状态下，肝内细胞外基质的各成分按一定的比例合成和分解，处于动态平衡的过程。肝纤维化发生后，这种平衡被打破，细胞外基质的合成大于降解，便会在肝内大量沉积。可以说细胞外基质来源于其产生细胞，而大量沉积又对细胞产生重要的影响，其作用的过程既复杂又相互影响。

武氏[8]等通过CCL4复制大鼠肝纤维化模型，发现三七皂苷单体Rg1、Rb1除可减少狄氏间隙内的胶原纤维及贮脂细胞增生外，还能明显抑制血清ALT活性及HA、PCⅢ水平，具有抗肝纤维化的作用。

段氏等[9]四氯化碳造模的同时给予三七总皂苷单体Rbl，检测肝功能、血清Ⅲ型前胶原、透明质酸、层粘蛋白等指标的变化，并观察肝纤维病理变化。发现三七总皂苷能改善肝纤维化大鼠的肝功能，降低血清 PCⅢ、 HA、 LN含量，明显减轻肝组织胶原的沉积，改善肝纤维化程度；而人参皂苷 Rbl不能改善肝纤维化程度。

3细胞因子的研究

转化生长因子β1(TGF-β1)具有促进间质细胞分化和增殖，增加细胞外间质的沉积、抑制其降解的作用，被认为是肝纤维化形成过程中的一个重要的调控因子。肝脏在正常状况下TGF-β1的表达较少，而损伤后其表达会显著增加。

丹酚酸B是从丹参中提取出的水溶性活性成分，丹酚酸可抑制由转化生长因子刺激诱导HSC的增殖和活化[10]，此外，丹酚酸还可下调TNF-α水平，减轻肝组织炎症程度，保护肝脏细胞不受破坏[11]。

姜黄素是一种黄色的酸性酚类物质，可从姜科姜黄属植物姜黄中提取。姜黄素能够作用于瘦素，从而抑制血小板衍化生长因子(PDGF)、血管生长因子(VEGF)等因子的表达，并对活化的HSC具有抑制作用[12]。其可通过抑制NF-κB依赖性TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1、COX-2 等基因表达，阻止炎症因子诱导的肝脏炎症性损伤，从而阻止肝纤维化的发生与发展[13]。

芍药苷是主要从毛莨科植物芍药中提取出的活性成分，具有抗炎和免疫调节作用。从芍药苷的化学结构分析，因其分子中含多个酚羟基，可清除自由基活性，抗氧化作用使其可促进肝细胞再生从而实现抗肝纤维化作用[14]。闻氏[15]采用放免法、RT-PCR法、Western-blotting法和免疫组化法分别观测血清及肝组织中TNF-α转录和表达情况，结果发现芍药苷可显著降低血清及mRNA水平的TNF-α表达；而在Western-blotting法和免疫组化法中，仅在Ⅰ组和Ⅲ组，芍药苷明显降低TNF-α的含量。

4其他生化指标研究

慢性肝病发生病变后，血清ALT、AST、HA、LN及肝组织中MDA、SOD等指标与肝病的严重程度呈现相关性。随着病情的加重，此类肝纤维化指标亦随着发生变化。通过观测这些指标的改变情况，可以了解受试物的抗肝纤维化作用。杜仲多糖能抑制血清HA、LN水平的升高，降低肝纤维织中MDA水平和SOD、GSH-Px活性，提示杜仲多糖能提高肝组织的抗氧化酶活性，抑制自由基产生，缓解肝脏损伤，从而达到抗肝纤维化作用[16]。

同为多糖类成分，朱氏[17]通过观察狗肝菜多糖对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化作用，发现狗肝菜多糖也可以降低血清中ALT、AST、TBIL等水平，其抗肝纤维化作用可能与保肝降酶有关。

苦参碱是从中药苦豆子或苦参中提取出来的一种生物碱，杨文卓等[18]通过半乳糖胺诱导方式复制肝纤维化模型，观察氧化苦参碱干预前后肝指数、血及肝组织生化、羟脯氨酸含量、TGβmRNA表达水平、电镜及病理组织学改变，结果提示，氧化苦参碱可降低大鼠ALT、AST、TGFβ1水平，降低肝组织羟脯氨酸含量；提高肝组织内SOD、GST-PX水平，给药各组desmin及α-SMA水平的明显低于模型组。而宋健等[19]采用CCL4制备肝纤维化模型，发现苦参素可显著改善肝功能，降低PC-Ⅲ、LN、HA水平，组织学检查也显示具有抗肝纤维化作用。

无论在肝星状细胞激活、凋亡或者细胞外基质大量合成与沉积过程中，均与黏附分子密切相关。而E-钙粘附素作为黏附分子中的重要一员，在不同阶段肝纤维化大鼠肝组织均有表达，且随着纤维化程度的加重而表达增强，在肝纤维化发展变化中的作用越来越受到关注。万荣等[20]通过研究E-钙粘附素在不同肝纤维化阶段的表达情况以及在抗肝纤维化中药单体白黎芦醇干预下表达的变化发现，白黎芦醇可以明显改善大鼠肝纤维化程度，并减少E-钙粘附素 mRNA水平。

牛磺酸是从中药牛黄中提取出来的有效成分，对细胞具有保护作用。牛磺酸无论是对由牛血清白蛋白静脉注射复制的大鼠肝纤维化模型[21]，还是对由CCL4诱导的肝纤维化模型[22]，均可改善大鼠肝组织中的病理变化，提示其具有抗肝纤维化作用。

5结语

中药防治肝纤维化具有独特优势，针对肝纤维化发生的多个环节进行抗肝纤维化研究取得很大的进展，中药单体在抗肝纤维化作用机制研究方面也呈现出多方向、多层次展开的局面。就目前研究现状来看，多集中在细胞学、细胞外基质及细胞因子的研究，而对肝的再生及调节方面研究较少。肝细胞是高度分化而较少分裂的一类细胞，但仍保留着增殖的功能[2]。当发生肝纤维化时，占绝对多数的肝实质细胞并不能健康有序地增殖，而是被非实质细胞代偿性增生所替代。所以，找到科学有效的措施和手段让肝实质细胞能健康有序地增殖应该成为中药单体抗肝纤维化实验研究的重点之一，也应得到更多的关注和重视。

目前，对于肝纤维化的机制研究已经从原来的病理组织学研究发展到细胞学、细胞因子及其分子水平的研究，研究对象也从中药提取物、有效部位发展到有效成分甚至单体。研究不断深入的同时，不能忽视中医整体辨证论治理论的指导，否则，中药单体抗肝纤维化的实验研究就将成为中药的去中药化研究。

参考文献

[1]张荣华,周子成.三七虫草菌丝对实验性肝纤维化预防作用的研究[J].中成药,2003,25(3):222.

[2]程明亮,杨长青.肝纤维化基础研究及临床[M].北京：人民卫生出版社，2002:20.

[3]赵东强,姜慧卿,修贺明,等.丹参单体IH764-3对肝星状细胞增殖或凋亡的影响[J].中华肝脏病杂志，2002,10(4):265.

[4]申月明,朱萱,张昆和,等.熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响[J].中华肝脏病杂志，2008,16：298.

[5]兰天,勾红菊,吴腾,等.虎杖苷抑制肝星状细胞活性研究[J].亚太传统医药，2013,9(8):39.

[6]刘丽,姜慧卿,张晓岚,等.丹参单体H764-3促进H2O2刺激的鼠肝星状细胞胶原降解[J].基础医学与临床，2006,26(7):724.

[7]Tang Y, Zheng S, Chen A. Curcumin eliminates leptin’seffects on hepatic stellate cell activation via interruptingleptin signaling [J]. Endocrinology, 2009, 150(7):3011.

[8]武凡,张树三,康格非,等.三七皂苷对肝纤维化大鼠分泌型磷酯酶A2和肿瘤坏死因子表达的影响[J].中华肝脏病杂志，2003,11(1):51.

[9]段丽平,马岚青,李树安,等.人参皂苷Rbl抗肝纤维化的实验研究[J].中西医结合肝病杂志，2007,17(3):156.

[10]王海南,胡义杨,红嘉禾,等.丹参酚酸-B对肝星状细胞增殖与 TGF-beta1 信号转导的影响[J]. 中华医学杂志, 2002, 82(18): 1267.

[11]Lin Y L, Wu C H. In vitro protective effects of salvianolicacid B on primary hepatocytes and hepatic stellate cells[J]. Ethnopharmacology, 2006, 105(1/2): 215.

[12]Tang Y, Chen A. Curcumin protects hepatic stellate cellsagainst leptin-induced activation in vitro by accumulatingintracellular lipids [J]. Endocrinology, 2010, 151(9):4168.

[13]Nanji A A, Jokelainen K, Tipoe G L, et al. Curcuminprevents alcohol-induced liver disease in rats by inhibitingthe expression of NF-kappa B dependent genes [J]. Am JPhysiol Gastrointest Liver Physiol, 2003, 284: 321.

[14]Qu H D，Yah H C，Zhu X H，at a1． Antidepressant effects ofpaeoniflorin in behavioral models of depression (abstract) [J]． Neumscienee Bulletin，2007，(123supl)1: 314．

[15]闻慧琴,罗庆礼.芍药苷对血吸虫肝纤维化小鼠肿瘤坏死因子α基因及蛋白水平的影响[J].中国药业，2013,22(22):36.

[16]周程艳,艾凌艳,王美,等.杜仲多糖抗肝纤维化作用的实验研究[J].中草药，2011,42(2):324.

[17]朱华,陈力锋,张可锋.狗肝菜多糖的抗肝纤维化研究[J].华西药学杂志,2012,27(6):634.

[18]杨文卓,曾民德,范竹萍,等.氧化苦参碱防治半乳糖诱导大鼠肝纤维化的实验研究[J].中华肝脏病杂志,2002,10(3):193.

[19]宋健,钟惠闽,姚平.苦参素对实验性大鼠肝纤维化的防治作用[J].中国中西医结合消化杂志,2002,10(5):282.

[20]万荣,伍建业,刘珺,等.白黎芦醇对肝纤维化大鼠肝组织E-钙粘附素表达的干预作用[J].实用肝脏病杂志，2009,12(5)：335.

[21]李宝刚,李继尧,梁惠云,等.牛磺酸对试验性大鼠肝纤维化的预防作用[J].北京医科大学学报，1998，30(1)：333.

[22]陈岳祥，李石，张兴荣，等.牛磺酸对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的抑制作用[J].中华消化杂志，1999，19(3)：185-187.

作者简介：杨增艳，男，壮族，广西南宁市人，副主任药师，硕士研究生。研究方向：中药、民族药的研究与开发工作。

【中图分类号】R285.5

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)11-0026-02

(收稿日期：2016.04.12)