背部保健推拿对亚急性衰老家兔免疫功能的调节作用

张　欣　刘明军　杨寄渝　吴　萌　李　亚　尚　坤

(长春中医药大学，吉林　长春　130117)



背部保健推拿对亚急性衰老家兔免疫功能的调节作用

张欣刘明军杨寄渝吴萌李亚尚坤

(长春中医药大学，吉林长春130117)

摘要〔〕目的探讨在亚急性衰老家兔模型足太阳膀胱经背部循行部位上开展保健推拿对其胸腺指数、血清NGF含量和局部皮肤CD80表达的影响。方法将18只家兔随机平均分为空白组、模型组和推拿组，采用腹腔注射D-半乳糖的方法造模，观察各组动物胸腺指数、血清NGF含量和局部皮肤CD80表达的变化。结果模型组与空白组比较，实验家兔的胸腺指数、血清NGF含量均有显著差异(P<0.01，P<0.05)，推拿局部皮肤CD80表达的阳性细胞数和表达强度均较低(P<0.05；P<0.01)。推拿组与模型组比较，实验家兔的胸腺指数有所提高(P<0.05)，血清NGF含量呈现显著差异(P<0.01)，推拿局部皮肤CD80表达的阳性细胞数和表达强度均有所提高(P<0.05，P<0.01)。结论腹腔注射D-半乳糖的方法能够制造亚急性衰老家兔模型；在足太阳膀胱经背部循行部位上开展保健推拿能够有效提高亚急性衰老家兔的免疫功能。

关键词〔〕推拿；衰老；免疫调节

第一作者：张欣(1976-)，男，博士，在站博士后，副教授，硕士生导师，主要从事中医手法治未病的临床与机制研究。

推拿疗法是中医传统养生保健与治疗疾病的方法之一，具有疏通经络、平衡阴阳、激发卫气、温阳补虚等作用。课题组以保健推拿为主要干预手段，探讨推拿疗法对亚急性衰老家兔免疫功能的调节作用与机制。

1材料与方法

1.1实验动物与分组纯种新西兰大耳家兔18只，兔龄4个月，体重(1 940±190)g，均由长春中医药大学实验动物中心提供。按照随机数字表法平均分为空白组、模型组、推拿组。

1.2实验药品与仪器D-半乳糖(成都溶海生物技术有限公司)；CD80一抗(武汉博士德生物工程有限公司)；推拿手法测定仪(TAP-Ⅱ型，上海益联医学发展有限公司)；光学显微镜及图像分析系统(德国Leica公司)。

1.3实验方法

1.3.1动物模型的制备以0.9%的生理盐水配制1.25%的D-半乳糖溶液，按照50 mg·kg-1·d-1的标准计算相应的D-半乳糖注射剂量，1次/d，连续腹腔注射6 w〔1〕。空白组注射等量生理盐水。

1.3.2动物模型的处理模型组、推拿组家兔每天给予腹腔注射造模，空白组家兔每天给予腹腔注射等量生理盐水，各组不做其他处理。推拿组家兔造模结束后第2天开始推拿治疗，推拿时家兔不固定以避免惊吓。

1.3.3推拿方法(1)推拿部位：选择家兔足太阳膀胱经的背部循行路线，从肺俞穴至肾俞穴(穴位选取按《实验针灸学》〔2〕定位)。(2)推拿方法：①按揉法：操作者以双手拇指指腹为着力点，在家兔背部脊柱两侧由头颈部至尾部施以按揉法，手法力量经推拿手法测试仪测定约为0.5 kg，操作时间5 min；②推法：操作者以双手拇指指腹为着力点，在家兔背部脊柱两侧由头颈部至尾部施以推法，手法力量经推拿手法测试仪测定约为0.5 kg，操作时间5 min；③捏脊法：操作者以双手拇指、食指指端夹持家兔背部皮毛及皮下组织，由尾部至头颈部施以捏脊法，反复操作10次。以上操作1次/d，15 min/次，连续3 w。

1.3.4观察指标(1)实验动物胸腺指数；(2)实验动物血清中神经生长因子(NGF)含量；(3)实验动物局部皮肤CD80表达含量。

1.3.5检测方法(1)推拿治疗结束后第2天，将各组家兔处死，剥离胸腺并称量湿重，按以下公式计算胸腺指数〔3〕：胸腺指数=胸腺重量(mg)/体重(g)。(2)推拿治疗结束后第2天，将各组家兔处死，取耳缘静脉血5 ml，室温凝固2 h，离心1 500 r/min×15 min，收集血清，以ELISE法测定NGF含量。(3)推拿治疗结束后第2天，将各组家兔处死，取背部施术部位皮肤，切片染色，置于40倍物镜下观察，拍照，采用Leica计算机图像分析系统对染色阳性细胞个数和灰度值进行定量分析。

1.4统计学分析采用SPSS11.0软件行t检验。

2结果

2.1各组胸腺指数和血清NGF含量的比较见表1。

2.2各组局部皮肤CD80表达的比较见表2。

组别胸腺指数(mg/g)血清NGF(pg/ml)空白组3.23±0.535.42±1.77模型组2.12±0.511)6.74±1.921)推拿组2.90±0.812)5.39±1.332)

与空白组比较：1)P<0.01；与模型组比较：2)P<0.05

组别阳性细胞数(个)灰度值空白组88.57±6.12171.36±3.74模型组61.68±6.742)180.28±4.461)推拿组82.27±6.554)176.44±6.423)

与空白组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较：3)P<0.05，4)P<0.01

3讨论

机体衰老的重要标志之一是机体免疫功能的下降，从而容易罹患各种疾病〔4〕。推拿疗法是中医传统养生保健方法之一，现代大量的临床研究均有所证明〔5～8〕。胸腺是机体重要免疫器官，是淋巴细胞分化、成熟和产生免疫应答的场所，在免疫功能低下时胸腺萎缩，体积变小。因此胸腺系数是衡量机体免疫功能的重要指标〔9,10〕。血清NGF原本是神经系统最重要的生物活性因子之一，但是近年来的研究表明，血清NGF还具有调节免疫及炎症网络方面的作用，并被认为是连接免疫系统和神经系统的纽带〔11〕。CD80是在B细胞、树突细胞(DC)等发现的抗原分子，属于免疫球蛋白超家族成员，在自身免疫监控、体液免疫应答及移植反应中发挥重要作用〔12〕。

这些研究指标均能够有效反映机体免疫功能的变化状况。本研究结果表明推拿疗法能够有效提高亚急性衰老家兔的免疫功能。

参考文献4

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11焦蓉，黄星原.神经生长因子及其受体在免疫系统中的作用〔J〕.国际儿科学杂志，2006；33(5)：321-3.

12Van de Ven R，Lindenberg JJ，Oosterhoff D，etal.Selective transduction of mature DC in human skin and lymph nodes by CD80/CD86-targeted fiber-modified adenovirus-5/3〔J〕.J Immunother，2009；32(9)：895-906.

〔2014-12-19修回〕

(编辑袁左鸣)

The regulation effects of back Tuina on the immune functions of sub-acutly aging rabbit

ZHANG Xin,LIU Ming-Jun,YANG Ji-Yu,etal.

Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,Jilin,China

【Abstract】ObjectiveTo observe the regulation effects of back Tuina on the immune functions of sub-acutly aging rabbit.Methods18 rabbits were randomly divided into control,model and Tuina groups．The indexes of thymus,the expressions of NGF and CD80 were observed．ResultsThe indexes of thymus and content of NGF had significant differences between model and control groups(P<0.05),the expression of CD80 of model group was lower than that of control group(P<0.05).The indexes of thymus and content of NGF had significant differences between Tuina and model groups(P<0.05),the expression of CD80 of Tuina group was higher than that of model group(P<0.05).ConclusionsBack Tuina therapy along bladder meridian of foot Taiyang could promote the immune function of sub-acutly aging rabbit.

【Key words】Tuina;Aging;Immune

通讯作者：尚坤(1978-)，女，副教授，硕士生导师，主要从事中医药治疗心脑血管疾病的临床与机制研究。

基金项目：国家自然科学基金项目(81273867)；吉林省科技厅基金项目(20130101137JC)；吉林省大学生创新创业计划项目(201310199024)

中图分类号〔〕R244.1〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)24-6969-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.002