簇花清风藤脂溶性成分的GC－MS分析

簇花清风藤脂溶性成分的GC-MS分析

郑金燕1,2，黄艳2，林霄2，张春来1，刘布鸣2，刘元2，宋志钊2

(1.广西中医药大学，广西 南宁 530001；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西中医药研究院，广西 南宁 530022)

摘要：目的分析簇花清风藤的脂溶性化学成分。方法采用硅胶柱层析法提取分离簇花清风藤石油醚部位的脂溶性成分，并对该脂溶性成分进行甲酯化处理，采用气相色谱-质谱方法分析其化学成分。结果样品1共鉴定出39个化学成分，主要成分为：(Z)-9-十八烷烯酸(13.15%)、10,12-十八碳二烯酸(6.74%)、棕榈酸(3.94%)、硬脂酸(3.04%)、 (Z)-13-二十二碳烯酸(2.76%)、十氢化-8α-乙基-1,1,4α,6-四甲基萘(2.43%)等。样品2共鉴定出10个化学成分，主要成分为：十四酸(4.63%)、15-甲基十六烷酸(4.55%)、14-甲基十五烷酸(4.33%)、 叶绿醇(3.09%)等。结论研究结果可为进一步确定簇花清风藤的化学成分和研究利用提供了一定的参考。

关键词：簇花清风藤；脂溶性成分；成分分析；气-质联用

基金项目：广西科技攻关重大专项(No.桂科重1355001-4)；广西科技攻关项目(No.桂科攻11107010-3-4)

作者简介:郑金燕，女，研究方向：中药、天然药化学成分与质量标准，E-mail:zhengjy121060@163.com

通讯作者：刘布鸣，男，研究员，硕士生导师，研究方向：中药、天然药化学成分与质量标准研究，Tel:0771-5883405，E-mail:liu_buming@163.com

中图分类号：284.1文献标识码：A

GC-MS analysis of liposoluble components inSabiafasciculataLecomte ex L.Chen

ZHENGJin-yan1,2,HUANGYan2,LINXiao2,ZHANGChun-lai1,

LIUBu-ming2,LIUYuan2,SONGZhi-zhao2

(1.GuangxiUniversityofChineseMedicine,Nanning530001,China;2.GuangxiKeyLaboratory

ofTradtitonalChineseMedicineQualityStandards,GuangxiInstituteofTraditionalMedical

andPharmaceuticalSciences,Nanning530022,China)

Abstract：ObjectiveTo analyze the liposoluble components from the Sabia fasciculata Lecomete ex L.Chen.MethodsLiposoluble components were extracted from Sabia fasciculata Lecomete ex L.Chen by silica gel column chromatography.The relative contents were determined by GC-MS with area normalization method.Results39 componts were separated from sample 1.The main ingredients were (Z)-9-octadecenoic acid(13.15%);10-trans,12-cis-octadecadienoic acid(6.74%);Hexadecanoic acid(3.94%);Stearic acid(3.04%);(Z)-13-docosenoic acid(2.76%);Decahydro-8α-ethyl-1,1,4α,6-tetramethylnaphthalene(2.43%) in the sample 1.10 components were separated from sample 2, the main ingredients were myristic acid(4.63%);15-methyl-hexadecanoic acid(4.55%);14-methyl-pentadecanoic acid(4.33%);Phytol(3.09%).ConclusionThe results provided supplements and references for the further utilization and study of the plant of Sabia fasciculata Lecomete ex L.Chen.

Key words:SabiafasciculataLecomete ex L.Chen;Liposoluble component;GC-MS

簇花清风藤(SabiafasciculataLecomte ex L.Chen)为清风藤科(Sabiaceae)清风藤属(Sabia)植物，主产于广西、广东北部、云南东南部、福建南部，生于海拔600～1 000 m的山上。该植物性温，味甘、微涩，有祛风湿、散瘀消肿的功效。主要用于治疗风湿骨痛、跌打损伤、甲状腺肿、肾炎水肿等症状[1]。

关于簇花清风藤的药理作用及其化学成分研究文献不多[2～4]。但对清风藤属药用植物的研究就有很多，清风藤属可用于风湿性关节炎,关节肿大,肢体疼痛麻木，多年来诸多学者报道其具有镇痛抗炎、镇静、消肿利尿、降压、抗心律失常、组织胺释放、免疫调节等作用[5]。近年来对清风藤属植物化学成分研究方面报道有白背清风藤[6]、小花清风藤[7]等，该属植物的化学成分的研究表明，主要成分为三萜酸类化合物[6～11]。由于簇花清风藤及其科属的良好药用价值，本文主要分析簇花清风藤的脂溶性化学成分，丰富了簇花清风藤的化学成分研究。

1实验部分

1.1仪器、试剂与试样美国Agilent 7890B-5977气相色谱-质谱-计算机联用仪。石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、氢氧化钾、甲苯、无水硫酸钠等均为分析纯。实验采用的是簇花清风藤干燥枝叶，2012年12月20日采集于广西金秀县，经广西中医药研究院中药研究所赖茂祥研究员鉴定为簇花清风藤SabiafasciculataLecomte ex L.Chen。样品采回后自然阴干，粉碎，过三号筛，备用。

1.2实验方法

1.2.1提取与供试品制备簇花清风藤枝叶晾干后粉碎称取7 kg，经95%乙醇回流提取3次，每次提取2 h，过滤，合并提取液，滤过减压回收溶剂，得乙醇提取物浸膏360 g，将该浸膏用水悬浮后，依次用石油醚(60～90 ℃)、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，回收溶剂后得石油醚部位浸膏(25 g)、氯仿部位浸膏、乙酸乙酯部位浸膏、正丁醇部位浸膏。取石油醚部位浸膏4 g,经100～200目硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(100∶0→98∶2)梯度洗脱，得52个馏分，石油醚洗脱的馏分1～23瓶合并为样品1，2%乙酸乙酯洗脱的馏分24～52瓶合并为样品2。样品1为黄色油状物1.158 9 g，样品2为墨绿色半固体物0.130 4 g。分别称取样品1为210 mg，样品2为200 mg，分别置于100 mL具塞烧瓶中，加入石油醚(60～90 ℃)-甲苯(1∶1,V/V )20 mL将其溶解，再加0.4 mol·L-1的KOH-甲醇溶液10 mL,摇匀，置于45 ℃恒温水浴1 h,停止加热,加纯净水20 mL,震荡摇匀,待分层清晰后分取上清液,经无水硫酸钠脱水,0.45 μm微孔滤膜过滤,滤液作为供试品。

1.2.2气相色谱-质谱分析条件HP-5MS石英毛细管色谱柱(30 m×250 μm，0.25 μm)；采用升温程序:样品1：初始温度120 ℃，保持1 min，以2 ℃·min-1升温至150 ℃，保持3 min，再以5 ℃·min-1升温至260 ℃,保持8 min；样品2:初始温度120 ℃,保持1 min,以2 ℃·min-1升温至180 ℃,然后以5 ℃·min-1升温至260 ℃,保持5 min,再以5 ℃·min-1升温至280 ℃,保持8 min。质谱条件:载气为He,柱流量1.0 mL·min-1,进样量0.2 μL,分流比为100∶1。进样口温度280 ℃,EI电离方式,离子源温度250 ℃。电离能量70 eV,扫描质量范围为全扫描。

1.2.3分析方法取1.0 μL供试品，经GC-MS分析得到质谱图，经HPMSD化学工作站NIST8、NIST11标准质谱数据库进行检索，把主要色谱峰的离子碎片图与文献[2]核对，各化合物的百分含量采用峰面积归一化法计算。

2结果与分析

在上述条件下对供试品进行GC-MS实验，得到样品1和样品2的总离子流图(TIC),分别见图1和图2。对总离子流图1和图2中各化合物质谱图经HPMSD化学工作站NIST8、NIST11标准质谱数据库检索，把主要色谱峰的质谱裂片图与其波谱数据核对，对质荷比、基峰和相对丰度等进行比较，并结合相关图谱解析，对各色谱峰加以确认，按照峰面积归一化法计算各化合物的百分含量。从样品1鉴定确认了46个成分,详见表1；从样品2鉴定确认了10个成分,详见表2。

图1　样品1的总离子流

图2　样品2的总离子流

序号化合物时间(min)分子式相对分子量相对含百分量匹配度(%)1十二烷Dodecane3.985C12H261700.01902癸酸Decanoicacid5.054C10H20O21720.01933十四烷Teradeca6.051C14H301980.029842,4-二叔丁基苯酚2,4-Bis(1,1-dimethylethyl)phenol8.089C14H22O2060.08965月桂酸Lauricacid8.237C12H24O2000.069861,4,6-三甲基萘1,4,6-Trimethy-naphthalene8.341C13H141700.019372,2'-二甲基联苯2,2'-Dimethylbiphenyl8.741C14H141820.039281,6,7-三甲基萘1,6,7-Trimethyl-naphthalene8.786C13H141700.039792,3,6-三甲基萘2,3,6-Trimethyl-naphthalene8.900C13H141700.029710S-(Z)-3,7,11-三甲基-1,6,10-十二烷三烯-3-醇[S-(Z)]-3,7,11-Trimethyl-1,6,10-dodecatrien-3-ol9.233C15H26O2220.1490114,6,8-三甲基甘菊蓝4,6,8-Trimethylazulene9.709C13H141700.029712十六烷Hexadece8.785C16H342260.0398134-异丙基联苯4-(1-Methylethyl)-1,1'-biphenyl11.056C15H161960.0390142,2',5,5'-四甲基联苯2,2',5,5'-Tetrametyl-biphenyl12.248C16H182100.029115十七烷Heptadecane12.362C17H362400.039116十八烷Octadecane15.087C18H382540.1190179-甲基十四烷酸9-Methyltetradecanoicacid15.823C15H30O22420.129818(Z)-9-十六烯酸(Z)-9-Hexadecenoicacid18.144C16H30O22540.229719棕榈酸Hexadecanoicacid18.756C16H32O22563.94982015-甲基十六烷酸15-Methylpalmiticacid21.678C17H34O22700.759821贝壳杉-16-烯Kaura-16-ene22.621C20H28O53480.639022(E)-15-十七碳烯醛(E)-15-Heptadecenal23.247C17H32O2522.13982310,12-十八碳二烯酸10-Trans,12-cis-octadecadienoicacid23.740C18H32O22806.749924(Z)-9-十八烷烯酸(Z)-9-Octadecenoicacid23.958C18H34O228213.15992511-十八烷烯酸11-Octadecenoicacid24.041C18H34O22820.859726硬脂酸Stearicacid24.611C18H36O22843.049927正二十烷Eicosane26.642C20H422821.669528十氢化-8α-乙基-1,1,4α,6-四甲基萘Decahydro-8α-ethyl-1,1,4α,6-tetramethylnaphthalene27.958C16H302222.4090291,7,11-三甲基-4-(1-甲基乙基)-环十四烷1,7,11-Trimethyl-4-(1-methylethyl)-cyclotetradecane28.259C20H402800.609030(Z)-12-二十五烷酸(Z)-12-Pentacosanoicacid29.088C25H50O23821.2297

续表1：

序号化合物时间(min)分子式相对分子量相对含百分量匹配度(%)31二十四烷Tetracosan29.419C24H503380.979732(E)-11-二十烯酸(E)-11-Eicosenoicacid29.523C20H38O23100.889733二十酸Eicosanoicacid30.217C20H40O23121.229834二十一碳酸Heneicosanoicacid32.913C21H42O23260.369335(Z)-13-二十二碳烯酸(Z)-13-Docosenoicacid34.910C22H42O23382.769936二十二酸Docosanoicacid35.523C22H44O23400.969937二十三烷酸Tricosanoicacid38.031C23H46O23540.269738二十四酸Tetracosanoicacid40.477C24H48O23680.579839二十九烷Nonacosane44.352C29H604080.7799

表2　样品2脂溶性成分分析结果

综上表所述，样品1中主要成分为：(Z)-9-十八烷烯酸(13.15%)、10,12-十八碳二烯酸(6.74%)、棕榈酸(3.94%)、硬脂酸(3.04%)、 (Z)-13-二十二碳烯酸(2.76%)、十氢化-8α-乙基-1,1,4α,6-四甲基萘(2.43%)、(E)-15-十七碳烯醛(2.13%)、正二十烷(1.66%)、(Z)-12-环十四烷(1.22%)，样品2中主要成分为：十四酸(4.63%)、15-甲基十六烷酸(4.55%)、14-甲基十五烷酸(4.33%)、(Z)-9-十八碳烯酸(3.40%)、叶绿醇(3.09%)。样品1和样品2中的月桂酸和(Z)-9-十八碳烯酸这两种成分重复了，估计是洗脱的过程不够完全。由此可知簇花清风藤的脂溶性成分主要为烯酸类、烷酸类和直链烷烃类化合物。簇花清风藤属广西壮瑶药，具有宝贵的药用价值，民间应用也比较广泛，目前对其资源化学成分、药理以及临床研究还不深入，应加大研究开发力度，为全民保健提供新药源，为开发新药提供资料。

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