浅论用闪式提取工艺提取显齿蛇葡萄中黄酮的效果

2016-01-10 11:46吴诗艺

当代医药论丛 2016年5期

吴诗艺高陆⋆ 苏婷

（1.长春中医药大学吉林长春 130117；2.吉林修正药业新药开发有限公司吉林长春 130012）

显齿蛇葡萄（Ampelopsis GrossedentaHand-Mazz. W.T.Wa）又叫藤茶、山甜茶、白茶，其全株均可入药，具有清热解毒、抗菌消炎、祛风湿、降血压、保肝、止咳、祛痰和镇痛等功效[1—4]。药理学研究发现，显齿蛇葡萄中的有效药物成分主要为黄酮。显齿蛇葡萄中的黄酮是一种化合物，其主要成分包括二氢杨梅素、槲皮素、花旗松素、山奈酚、显齿蛇葡萄素、杨梅苷、橙皮素和洋芹素等。在药学领域，如何简单、有效地从显齿蛇葡萄中提取出黄酮一直是一个难题。近年来，使用闪式提取工艺提取显齿蛇葡萄中黄酮的效果获得了药学界的认可。用闪式提取工艺提取显齿蛇葡萄中黄酮的原理是：使用机械对显齿蛇葡萄的根、茎、叶进行破坏，并使用溶剂将显齿蛇葡萄中含有的黄酮进行解离、溶解，使其快速进入到溶剂中[5]。为了进一步研究用闪式提取工艺提取显齿蛇葡萄中黄酮的效果，笔者进行了以下研究。现将研究结果报告如下：

1 仪器与试药

1.1 试验用原料

本次试验使用的原料为显齿蛇葡萄叶，购自于福建漳平县新桥镇。

1.2 试验用试剂

本次试验使用的试剂包括：芦丁标准品（由中国食品药品检定研究院提供）、乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠（分析纯）和纯化水（自制）。

1.3 试验用仪器

本次试验使用的仪器包括：JHBE-50T型闪式提取器（由金鼐科技公司提供）、UV—6100型紫外可见分光光度计（由北京普元精电科技有限公司提供）、RE52CS型旋转蒸发器（由上海亚荣生化仪器厂提供）。

2 试验方法与结果

2.1 空白溶液的制备

精密量取2mL浓度为80%的乙醇，将其装入刻度试管中，再向试管中加入0.2mL 浓度为5%的亚硝酸钠溶液，摇匀后放置6min。向试管中加入0.2mL浓度为10%的硝酸铝溶液，放置 6 min，再向其中加入4ml浓度为 5% 的氢氧化钠溶液，摇匀，放置15 min，既得到空白溶液。

2.2 标准溶液的制备

精密称取芦丁对照品6.47 mg，将其装入10mL的容量瓶中，再向容量瓶中加入10 mL浓度为80%的乙醇进行定容，然后摇匀，即得到浓度为0.647 mg/mL的芦丁对照品溶液。

2.3 标准曲线的建立

精密量取芦丁标准溶液 0.6 mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL和1.4mL，将它们分别放入刻度试管中，然后向每个试管内加入适量的浓度为80%的乙醇，使试管内的溶液量达到2.0mL。分别向每个试管中加入适量的浓度为5%的亚硝酸钠溶液，放置6 min，再向试管内加入适量的浓度为10%的硝酸铝溶液，放置6 min，最后向试管内加入2.0ml浓度为45%的氢氧化钠溶液，摇匀后放置 15 min。另取一个试管，在其中加入空白对照溶液。在510nm波长下测定所有试管中溶液的吸收度[6]，并绘制标准曲线。用A值作为纵坐标，用质量浓度作为横坐标，进行线性回归计算，得到回归方程为：Y=13.918X - 0. 0066，r2= 0. 9998。这说明，芦丁在0.060656～0.141531mg/ml的浓度范围内与吸收度A呈良好的线性关系。

2.4 供试品溶液的制备

提取显齿蛇葡萄浓缩溶液50mL，用75mL的氯仿对其进行三次萃取脱脂处理。待显齿蛇葡萄浓缩溶液完全分层后，收集其下层的水溶液并将其定容至 50mL，即得到供试品溶液。

2.5 黄酮含量的测定

精密吸取供试品溶液0.1mL，将其放入试管中，然后向试管中加入适量的浓度为80%的乙醇，使试管内的溶液量达到2.0mL。按“2.3”中的方法，在510nm波长下测定供试品溶液的吸收度Y，并将Y值代入线性回归方程中计算显齿蛇葡萄中黄酮的含量。

2.6 对闪式提取工艺的优化处理

2.6.1 实验因素与水平的选择根据预实验的项目，选择提取次数、提取时间和加水倍数作为考察对象，用黄酮的含量作为考察的指标，设计L9（34）正交表进行实验。详情见表1。

对表2进行直观的分析可以得出，最优组合为A3B3C2，即提取工艺参数为：加水16倍，提取的时间为3min/次，提取的次数2次。由R值可知，在不考虑交互作用的情况下，各因素的主次顺序为：提取次数＞提取时间＞加水倍数。通过对正交实验结果进行直观的分析可知，提取显齿蛇葡萄中黄酮的最佳闪式提取工艺为：在提取时加16倍的水作为溶剂，应连续提取2次，每次提取3min。

由表3可知，提取次数对黄酮的提取效果具有显著的影响，而加水倍数和提取时间对黄酮的提取效果影响不显著。