E-cad、nm-23、ki-67在人乳腺浸润性导管癌中的表达及意义

E-cad、nm-23、ki-67 在人乳腺浸润性导管癌中的表达及意义

焦俊霞叶晓霞赵伟志汤代军

(马鞍山市中心医院病理科，安徽马鞍山243000)

摘要〔〕目的研究E-cad、nm-23、ki-67 在乳腺浸润性导管癌的表达及其临床意义。方法应用免疫组化方法，检测癌旁相对正常乳腺组织、乳腺导管内癌、乳腺浸润性导管癌中E-cad、nm-23、ki-67的表达情况。结果与癌旁相对正常乳腺组织比,乳腺导管内癌、浸润性导管癌中E-cad、nm-23 的阳性表达率明显降低，而ki-67的表达明显增高(P<0.05)；导管内癌、浸润性导管癌患者间：家族史、年龄、原发肿瘤大小对E-cad、nm-23、ki-67表达影响差异无统计学意义，但不同组织学分级、腋窝淋巴结转移与否，E-cad、nm-23、ki-67的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论E-cad、nm-23、ki-67可能参与了乳腺导管癌的发生、发展和转移，有利于乳腺浸润性导管癌的预后判断。

关键词〔〕导管内癌;浸润性导管癌;E-cad；nm-23；ki-67

中图分类号〔〕R322.33〔文献标识码〕A〔

第一作者：焦俊霞(1982-)，女，硕士，主要从事病理学研究。

乳腺癌以浸润性导管癌多见,近年来发病率逐年升高。乳腺癌转移是导致患者死亡的主要原因，其中淋巴结转移是预后不良的重要指标,早期预测乳腺癌淋巴结转移趋势,合理制订治疗方案,对提高患者生存率有重要意义。恶性肿瘤的侵袭和转移是多因素、 多步骤的复杂过程。 本研究分析E钙黏附素(E-cad)、nm-23、ki-67与乳腺癌临床病理特征的关系， 并探讨其在乳腺癌诊治及预后判断等方面的可能价值。

1材料和方法

1.1一般资料2008年1月至 2012年 5月我院收治乳腺癌患者肿瘤组织存档蜡块107例,其中乳腺导管内癌24例，乳腺浸润性导管癌83例，另取癌旁相对正常乳腺组织20例。术前均未经放疗、化疗及内分泌等治疗。年龄31～71岁，中位年龄51.5岁，平均年龄(45.4±4.7)岁。病理诊断按世界卫生组织(WHO)(1988)乳腺癌分类标准及Bloom-Richardson系统Nottingham改良方案分类及分级〔1〕，其中Ⅰ级32例，Ⅱ级64例， Ⅲ级11例。

1.2主要试剂 鼠抗人E-cad、nm-23、ki-67单克隆抗体及S-P免疫组化试剂盒购于福州迈新公司，二氨基苯胺(DAB)显色试剂盒购于华美生物工程公司上海分公司。

1.3方法采用免疫组化染色方法。按说明书操作如下： 组织蜡块3μm连续切片，脱蜡，3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶15min，微波炉加热15min修复抗原，自然冷却，滴加非免疫性羊血清以阻断组织中的非特异性抗体，依次滴加一抗4℃过夜，加二抗(羊抗鼠IgG)链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶液，37℃孵育30min，DAB显色3～5min，苏木精复染，脱水，透明，中性树胶封片，显微镜下观察。阳性对照为已知阳性反应的乳腺癌组织切片， 磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.4结果判定ki-67阳性表达定位于胞核，E-cad阳性表达定位于胞膜，nm-23阳性表达定位于胞质及胞膜。阳性结果的判定标准:肿瘤细胞胞质中呈棕黄色至棕褐色为阳性染色，高倍镜下(×200)对每张切片随机选择6个视野，按切片中细胞显色强度计分:0分，细胞无显色；1分，细胞呈浅黄色(弱染色)；2分，细胞呈棕黄色(中等染色)3分，细胞呈棕褐色(强染色)。

1.5统计学方法采用SPSS13.0 软件进行χ2检验及Spearman相关性分析。

2结果

2.1E-cad、nm-23、ki-67在乳腺导管内癌和浸润性导管癌中的表达与癌旁相对正常乳腺组织比，E-cad、nm-23在乳腺导管内癌和浸润性导管癌中的阳性表达率降低(P<0.05);ki-67在乳腺导管内癌和浸润性导管癌中阳性表达率明显增高(P< 0.05)，见图1、表1。

图1　E-cad、nm-23、ki-67在不同乳腺组织中的表达(DAB，×200)

临床病理参数nE-cadnm-23ki-67癌旁相对正常组织2016(80)15(75)6(30)乳腺导管内癌2412(50)1)11(46)14(58)1)浸润性导管癌8334(41)1)31(37)1)59(71)1)

与正常组织比较：1)P<0.05

2.2E-cad、nm23和ki-67表达与乳腺癌临床病理参数的关系E-cad、nm23和ki-67阳性表达与患者的年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)，而与淋巴结转移、组织学分级相关(P<0.05)。E-cad、nm23蛋白阳性表达率随组织学分级升高而降低(P<0.05);淋巴结转移组阳性表达率显著低于无淋巴结转移组(P<0.05)。ki-67蛋白阳性表达率随组织学分级升高而升高(P<0.05);淋巴结转移组阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)，见表2。

2.3E-cad、nm23和ki-67在乳腺癌中表达的相关性经Pearson相关分析，ki-67与E-cad、nm23在乳腺癌组织中表达呈负相关(r=0.63、0.71，P<0.0 5)；E-cad、nm23在乳腺癌组织中表达无明显相关性(r=1.62，P>0.0 5)，见表 3。

表2　 E- cad、 nm-23、 ki-67蛋白在乳腺导管癌中的表达与临床病理参数的关系〔n(%)〕

表3　 E- cad、 nm-23、 ki-67在乳腺导管癌中表达的相关性(n)

3讨论

E-cad、nm-23、ki-67参与人类多种肿瘤的恶性转化、浸润与转移，如乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、卵巢癌、胃癌和肺癌等，被认为是肿瘤转移相关基因或转移基因，在肿瘤中的过表达与肿瘤细胞转移潜能的增加有关〔2〕。上皮细胞黏附分子、E-cad是一种单次跨膜糖蛋白，介导钙依赖性上皮细胞黏附的最主要分子，在许多上皮细胞中与细胞骨架肌动蛋白连接，促进细胞间的黏附，维持细胞的极性。其功能障碍或缺失会使正常细胞与正常细胞之间的黏附缺失，影响细胞的分化和黏着，肿瘤细胞间的连接也减弱，瘤细胞易于从母体脱离，发生转移。本研究中，在癌旁乳腺组织、乳腺导管内癌和浸润性导管癌中，E-cad的阳性表达逐渐降低，可能在乳腺导管癌的恶变过程中发挥着重要作用。随着乳腺癌的病理学分级逐渐升高和淋巴结转移的发生，E-cadherin蛋白的表达明显降低。这可能说明，E-cad表达水平降低导致细胞间的黏附作用力降低，癌细胞容易脱落， 从而发生浸润和转移。因此E-cad可作为判断乳腺癌预后的一个参考指标。

癌细胞的浸润与转移，除与E-cad密切相关，nm23基因是近年来发现的重要转移抑制基因，很可能对癌细胞的运动能力及转移潜能有明显的抑制作用，主要通过参与G蛋白调控的跨膜信息传递,从而对细胞的分化及癌基因的转化起作用〔3〕。本研究表明，在癌旁乳腺组织、乳腺导管内癌和浸润性导管癌中，nm23的阳性表达逐渐降低，可能在乳腺导管癌的恶变过程中发挥着重要作用。随着乳腺癌的病理学分级逐渐升高和淋巴结转移的发生，nm23蛋白的表达明显降低，表明nm23在乳腺导管癌中的表达高低与病理学分级和淋巴结转移能力呈负相关，与文献报道一致〔3〕。

ki-67是一种与细胞周期相关的增殖细胞核抗原，在细胞周期G0期缺如，其他期都表达，M期达高峰。常作为肿瘤细胞增殖活性的可靠标记。而肿瘤的高增殖又与肿瘤的浸润生长和转移有关，因此ki-67的高表达与肿瘤患者的不良预后相关〔4〕。本研究表明，在癌旁乳腺组织、乳腺导管内癌和浸润性导管癌中，ki-67蛋白阳性表达逐渐升高;随着乳腺癌的病理学分级逐渐升高和淋巴结转移的发生，ki-67蛋白的表达明显降低，与国内外一些学者研究结果一致〔5,6〕，表明Ki-67在乳腺导管癌中的表达高低与病理学分级和淋巴结转移能力呈正相关。

另外，本研究对E-cad、nm-23、ki-67在乳腺癌中表达的相关性进行分析显示，经Pearson相关分析，ki-67与E-cad、nm23在乳腺癌组织中表达呈负相关。以上说明，上皮细胞黏附分子E-cad和重要转移抑制基因nm-23与代表肿瘤细胞增殖活力的ki-67在肿瘤的发生、发展中有相互拮抗作用，从而影响肿瘤的临床分期及淋巴结转移状况。

总之，本研究认为，E-cad、nm-23、ki-67表达与乳腺癌的浸润、进展有关，可作为判断乳腺癌恶性程度的指标。联检E-cad、nm-23、ki-67在乳腺癌组织中的表达可作为临床上判断乳腺癌的预后、 筛选高危转移患者的有效指标，对指导临床治疗有一定作用。

4参考文献

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2YapAS,CramptonMS,HardinJ.Makingandbreakingcontacts:thecellularbiologyofcadherinregulation〔J〕.CurrOpinCellBiol，2007;9(5):508-14.

3谢春华，杨基鹏，刘峥，等.Ki-67、VEGF、nm23在乳腺癌组织中表达的相关性及临床意义〔J〕.中国肿瘤外科杂志，2011;3(6)：325-8.

4ErmiahE,BuhmeidaA,AbdallaF,et al.Prognosticvalueofproliferationmarkers:immunohistochemicalki-67expressionandcytometrics-phasefractionofwomenwithbreastcancerinlibya〔J〕.Cancer,2012;3(14):421-31.

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〔2013-10-02修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)