聚乙二醇400介导的多西他赛脂肪乳剂与多西他赛注射液的稀释稳定性研究

·论著·

聚乙二醇400介导的多西他赛脂肪乳剂与多西他赛注射液的稀释稳定性研究

张广军1，林玲2，陈丽娜1，高保安1,2，陈建明1,2(1.第二军医大学药剂学教研室，上海 200433；2. 天士力帝益药业有限公司，江苏 淮安 223002)

[摘要]目的建立多西他赛的含量测定方法；考察自制的聚乙二醇(PEG)400介导的多西他赛脂肪乳剂与市售的多西他赛注射液稀释液的稳定性。方法建立高效液相色谱法测定含量；在室温条件下采用膜过滤法，以过滤液的含量、pH值以及过滤前的粒径为指标，考察PEG400介导的多西他赛脂肪乳剂与市售的多西他赛注射液的稀释液随时间变化的稳定性。结果多西他赛在1～256 μg/ml的浓度范围内线性关系良好，回归方程：Y=21.199X+20.488，r=0.999 9；自制PEG400介导的多西他赛脂肪乳剂分散液，室温下24 h内过滤液的含量、pH值以及过滤前的粒径均未见明显变化。观察市售多西他赛注射液的生理盐水稀释液，2 h发现有药物析出，过滤液含量明显下降。结论自制PEG400介导的多西他赛脂肪乳剂的分散稳定性远优于市售多西他赛注射液的生理盐水稀释液，大大提高了临床用药的安全性。

[关键词]聚乙二醇400；多西他赛脂肪乳剂；多西他赛注射液；稀释稳定性

[基金项目]上海市纳米专项(12nm0501000)

[作者简介]张广军，硕士研究生.E-mail:13818346927@163.com

[通讯作者]陈建明.研究方向：药物新剂型与新技术.E-mail:yjcjm@163.com.

[中图分类号]R944.1[文献标志码]A

DOI[]10.3969/j.issn.1006-0111.2015.02.006

[收稿日期]2013-11-26[修回日期]2014-03-16

Stability comparison between a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel and docetaxel injection saline dilutions

ZHANG Guangjun1,LIN Ling2,CHEN Lina1,GAO Baoan1,2，CHEN Jianming1,2(1. Department of Pharmaceutics, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; 2. Tasly pharmaceutical Co.,Ltd,Huai′an 223002, China)

Abstract[]ObjectiveTo establish HPLC method to detect docetaxel and compare the stability of a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel with docetaxel injection saline dilutions.MethodsHPLC method was established to detect docetaxel concentration. The stability of a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel and docetaxel saline dilutions were investigated by drug concentration pH value and particle size using membranes filtration method.ResultsThe linear range of docetaxel was 1-256 μg/ml,regression equation was Y=21.199X+20.488,r=0.999 9. The drug concentration pH value and particle size of polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel was stable at room temperature in 24 hours. However the docetaxel injection saline dilutions was discovered drug precipitation in about two hours after preparation and the drug concentration was significant decreased in the filtration of docetaxel injection saline dilutions.ConclusionThe novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel was a new stable docetaxel formulation and significantly increased the safety in clinical.

[Key words]polyethylene glycol；docetaxel；lipid nanoemulsion；saline dilutions；stability

1仪器与材料

1.1仪器Agilent1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；TH-3560高压灭菌锅(鑫科企业有限公司)；BS124S型电子分析天平(德国Sartorius公司)；0.45 μm滤膜(美国Millipore公司)；NANO-S型马尔文粒径检测仪(英国马尔文仪器公司)；PB-10型pH计(德国Sartorius公司)。

1.2主要材料和试剂多西他赛原料药(重庆美联制药公司，纯度≥98%，批号:G-1005002)；多西他赛对照品(中国药品生物制品检定所，纯度≥99.9%)；PEG400(中国医药集团上海化学试剂公司)；多西他赛注射液(齐鲁制药有限公司，批号:809020EW)；20%中/长链脂肪乳注射液(广州百特侨光医疗用品有限公司，批号:GM1101002)；甲醇，乙腈(德国默克公司,色谱纯)；生理盐水(山东辰欣药业股份有限公司，批号:1208260591)。其他所用试剂均为分析纯。

2方法

2.1DLE分散液和TAX生理盐水分散液的制备

2.1.1DLE分散液的制备精密称取1.4 g多西他赛，溶于20 ml的PEG400中，加入0.5%活性炭去除热原，充氮分装于2 ml透明注射剂瓶中，121 ℃高压灭菌15 min,得到多西他赛PEG400药物溶液。使用注射器吸取制备的多西他赛PEG400溶液1 ml，然后将该溶液边振摇边注入99 ml 20%市售空白脂肪乳剂中至分散均匀即可，得到药物浓度约为0.7 mg/ml的DLE分散液。

2.1.2TAX生理盐水稀释液的制备在室温下将注射用溶媒加入多西他赛溶液中，将两者在无菌环境下混匀，再均匀分散到适量生理盐水中得到药物浓度约为0.7 mg/ml的TAX生理盐水稀释液。

2.2对照品和供试品溶液的制备

2.2.1对照品溶液精密称取对照品12.5 mg，加入25 ml量瓶中，以异丙醇溶解并定容至刻度，得到浓度为500 μg/ml的对照品储备液。

不文明现象总让媒体揪着批，恐怕没完没了，时间长了，会给大众带来“审丑疲劳”。其实，一次法律行动胜过一万次舆论谴责，相关执法者、管理者，应走在媒体前面，该出手时就出手，积极捍卫法律规则，弥平社会争议。以高铁霸座问题为例，每次舆论曝光之后，相关部门都会在舆论压力下追加执法，给予霸座者治安处罚，以及列入黑名单等。而如果每一次高铁霸座都逃不过第一时间的处罚，恐怕霸座者也不至于这么嚣张，权益受侵害的乘客也不至于如此无助，人们更不至于要一次次呼吁执法部门的介入。

2.2.2供试品溶液按“2.1”项下方法制备DLE分散液及多西他赛注射液生理盐水稀释液,于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h分别取适量过0.45 μm微孔滤膜，分别精密量取续滤液1 ml于10 ml量瓶中，用异丙醇破乳并定容至刻度，得到供试品溶液。

2.3色谱条件色谱柱：Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-水(42:34:24)；流速：1.0 ml/min；检测波长：232 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μl。分别取多西他赛对照品溶液，TAX生理盐水稀释液供试品和DLE分散液供试品溶液适量进样,色谱图见图1，多西他赛的保留时间约为6.5 min，其他成分不干扰多西他赛的测定。

图1　多西他赛高效液相色谱图 A.对照品；B.DLE分散液供试品；C.TAX生理盐水稀释液供试品；1.多西他赛

2.4标准曲线和线性范围精密量取适量对照品储备液，用异丙醇稀释成浓度为1、4、16、64、256 μg/ml的多西他赛系列标准溶液，取20 μl标准溶液注入液相色谱仪进行分析，以标准溶液的峰面积(Y)对相应的标准溶液浓度(X)进行线性回归，其回归方程为Y=21.199X+20.488，r=0.999 9,线性范围为1～256 μg/ml。

2.5精密度实验分别精密吸取低、中、高3个浓度(4、64、256 μg/ml)梯度的对照品溶液，按上述色谱条件于1 d之内连续进样5次，RSD值分别为1.45%、0.56%和1.21%。连续3 d分别进样，RSD值分别为1.96%、1.20%和0.93%。表明该方法日内和日间精密度良好。

2.6重复性实验按“2.2”项下方法制备DLE分散液0 h供试品及TAX生理盐水稀释液0 h供试品各6份，各取20 μl进样，测定供试品中多西他赛含量，计算其RSD值分别为0.89%、0.68%。表明测定方法的重复性良好。

2.7稳定性考察取按“2.2”项下方法制备的DLE分散液0 h供试品及TAX生理盐水稀释液0 h供试品,分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样20 μl，测定峰面积，计算峰面积的RSD值，结果两供试品样品中多西他赛峰面积的RSD值分别为0.69%、0.91%，表明两者在24 h内稳定。

2.8加样回收率比较分别精密量取已知浓度的DLE分散液供试液及TAX生理盐水稀释液供试液各9份，分为3组，分别精密加入低、中、高3个浓度的对照品溶液，测定各组药物含量，计算加样回收率和RSD值。结果如表1、表2所示，回收率均在95%～105%范围内，RSD值均<5%，符合药物含量测定要求。

表1　DLE分散液供试品加样回收率

表2　TAX生理盐水稀释液供试品加样回收率

3结果

3.1稳定性比较室温下配制TAX生理盐水稀释液及DLE分散液，于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h分别取适量两种药物分散液，过0.45 μm滤膜除去游离药物，分别精密吸取续滤液1 ml,于10 ml量瓶中，异丙醇破乳并定容至刻度，进样20 μl，测定续滤液多西他赛浓度，以滤液中多西他赛浓度的变化来判断这两种制剂的稀释稳定性。以0 h药物浓度为100%，其余各时间点的药物浓度与0 h药物浓度百分比为百分标示量。结果见表3，DLE分散液至少在24 h内稳定，而TAX生理盐水稀释液稳定不足2 h，在2 h后稀释液可见明显的药物析出现象，过滤后滤液药物含量明显下降。DLE分散液的稀释稳定性远超过TAX生理盐水稀释液。

表3　DLE分散液和TAX生理盐水稀释液

注：TAX生理盐水稀释液在2 h后开始出现明显浑浊现象，药物含量明显下降

3.2DLE分散液pH值的测定按“2.1.1”项下配制DLE分散液，于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h使用pH计测定分散液的pH值。结果见表4,可以看出DLE分散液在24 h内pH值无明显变化。

3.3DLE分散液pH值粒径的测定按“2.1.1”项下配制DLE分散液,于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h取该乳剂分散液适量，用蒸馏水稀释适当倍数后，按马尔文粒径检测仪操作方法测定DLE分散液的粒径。结果见表4，可见DLE分散液24 h内粒径无明显变化。

表4　DLE分散液粒径及pH值变化( n=3)

4讨论

本研究采用膜过滤法从药物含量、pH值及粒径3个方面研究了DLE的稀释稳定性，并与TAX稀释液的稳定性进行比较。膜过滤法具有操作简便和重复性好的特点，根据文献[5]可知,使用生理盐水作为稀释溶媒的TAX稀释液最为稳定，药物含量能稳定2 h，使用5%葡萄糖作为稀释溶媒仅能稳定1 h，因此本研究选用生理盐水作为溶媒，所得结果与该文献报道的基本一致。而本实验结果揭示，DLE分散液至少在24 h内，其药物含量、pH值和粒径保持不变，稀释稳定性明显优于TAX,可大大提高临床使用的安全性。

TAX以表面活性剂吐温-80作为药物溶媒，有文献报道，吐温-80易引起休克、呼吸困难、低血压、血管性水肿、风疹等严重的过敏反应及溶血，因而限制了其临床应用。DLE因不含任何易导致过敏的表面活性剂，进一步提高了其用药安全性。DLE具有载药量高、安全性好、稳定性好的特点。相信随着对DLE研究的深入，该制剂有望成为一种新型的安全有效的多西他赛注射制剂。

【参考文献】

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[5]张晓庆,刘明忠,张利斌.注射用多西他赛与不同溶媒配伍稳定性的研究[J].药学服务与研究,2007,7(2):150-151.

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[本文编辑]李睿旻