苦参水提液的杀菌效果

陈 羽， 徐 威

(沈阳药科大学 生命科学与生物制药学院，辽宁 沈阳 110016)



苦参水提液的杀菌效果

陈 羽， 徐 威*

(沈阳药科大学 生命科学与生物制药学院，辽宁 沈阳 110016)

采用悬液定量杀菌试验，对苦参水提液的杀菌效果进行实验室研究。研究发现，苦参水提液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、白假丝酵母菌和黑曲霉均具有明显的杀菌作用。通过模拟现场试验，苦参水提液起到了显著地杀菌效果。

苦参；消毒剂；悬液定量杀菌试验

由于中草药具有天然、污染小、毒副作用小、过敏反应少和不易产生抗药性等特点，能够克服抗生素被滥用带来的弊端而备受人们青睐[1]。苦参(SophoraflavescensAit.)为豆科槐属植物，具有清热燥湿、杀虫、利尿之功效。据文献报道，苦参对痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、维白痢沙门氏菌等均具有明显抑制作用, 对瑾色毛癣菌等十多种皮肤真菌也具有不同程度的抑制作用[2]。市场上中药类杀菌消毒产品并不多见。本文对苦参水提液的杀菌效果进行了实验室研究，为合理开发新型苦参复配消毒剂产品提供技术基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 金黄色葡萄球菌(StaphylococcusaureusATCC 6538)、大肠埃希菌(Escherichiacoli8099)、枯草芽胞杆菌(BacillussubtilisATCC 9372)、白假丝酵母菌(CanidiaalbicansATCC 10231)和黑曲霉(AspergilliusnigerATCC 16404)，由沈阳药科大学微生物学与细胞生物学教研室提供。

1.1.2 培养基(g/L) 营养琼脂培养基：蛋白胨10.0，牛肉膏5.0，氯化钠5.0，琼脂粉14.0；沙堡琼脂培养基：葡萄糖40.0，蛋白胨10.0，琼脂粉14.0。

1.1.3 缓冲液(g/L) 磷酸盐缓冲液：无水磷酸氢二钠2.83，磷酸二氢钾1.36，pH 7.2；中和剂：硫代硫酸钠2.0，溶解于磷酸盐缓冲液中，起中和苦参水提液的杀菌作用。

1.2 方法

1.2.1 苦参水提液的制备 取苦参(安国昌达中药材饮片有限公司)200 g, 加适量水煎煮3次, 煎煮时间分别为20、40和60 min, 用8层纱布过滤, 合并滤液, 浓缩至500 mL，保存于4 ℃冰箱中备用。

1.2.2 菌悬液的制备 试验菌为S.aureusATCC 6538、E.coli8099和C.albicansATCC 10231。取磷酸盐缓冲液5.0 mL加入新鲜斜面培养物试管内，反复吹吸，洗下菌苔。用移液管将洗液移至另一无菌试管中，用涡旋混合器振荡20 s，使菌体悬浮均匀。初步制成的菌悬液，先用比浊测定法测其含菌浓度，再用磷酸盐缓冲液稀释至1×1011～ 5×1011cfu/L。菌悬液使用时，应先进行活菌培养计数。

1.2.3 芽胞悬液的制备 取已经活化3代的B.subtilisATCC 9372液体培养物3 mL，接种于罗氏瓶中营养肉汤培养基表面，置于37 ℃恒温培养箱内，培养8 d。采用孔雀绿法进行芽胞染色。当芽胞形成率达95%以上时，即可进行悬液的制备。用无菌水30 mL轻轻推刮菌苔，集中于一含玻璃珠的无菌三角瓶中，振摇30 min，分散培养物，使成均匀的悬液。将盛装上述悬液的三角瓶置于45 ℃水浴中24 h，使菌自溶断链，分散成单个芽胞。最后，将三角瓶放于80 ℃水浴中10 min，以杀灭残余的细菌繁殖体，待冷至室温后，即为芽胞悬液。芽胞悬液使用时，应先进行活菌培养计数。

1.2.4 黑曲霉孢子悬液的制备 用接种环划线接种A.nigerATCC 16404于沙堡斜面培养基上，置28 ℃恒温培养箱中培养10 d。吸取0.05%吐温-80水溶液4 mL置于斜面表面, 刮洗分生孢子，将孢子悬液移入装有玻璃珠的三角瓶中，轻轻振摇30 min后，滤过除去菌丝。孢子悬液使用时，应先进行活菌培养计数。

1.2.5 中和剂的考察试验 设平行8组试验，以S.aureusATCC 6538为试验菌，按悬液定量杀菌试验程序进行[3]。a：消毒液+菌悬液；b：(消毒液+菌悬液)+中和剂；c：中和剂+菌悬液；d：(消毒液+中和剂)+菌悬液；e：磷酸盐缓冲液+菌悬液(正常菌对照)；f：磷酸盐缓冲液；g：中和剂；h：培养基。中和剂及其浓度的判定标准：a组不长菌或仅有极少数菌落生长；b组有菌落生长，较a组为多，但较c、d、e组为少；c、d、e组菌落数分别在1×108～5×109cfu/L之间，且组间菌落数误差率不应超过15%；f、g、h组无菌生长。由此可判定所选中和剂及其浓度适宜。

1.2.6 悬液定量杀菌试验 试验时，先将内装5 mL苦参水提液的试管置于20 ℃水浴中5 min，再将0.1 mL菌悬液加入其中，混匀，作用至规定时间。取0.5 mL菌药混和液，移入4.5 mL中和剂溶液的试管中，混匀，中和作用10 min。取0.1 mL涂平板，置恒温培养箱内培养，活菌计数。以内装5 mL标准硬水的试管同步操作所得活菌数为基准，计算杀菌率。

1.2.7 模拟现场试验 选择木质桌面，在桌面上划定5 cm×5 cm范围的2个不同区域，分别标记为基准区和苦参水提液区。以涂抹法污染E.coli8099悬液(菌数为1×107cfu/L)，待自然干燥后进行试验。消毒前，将无菌棉拭于5 mL磷酸盐缓冲液试管中沾湿，以涂抹法在基准区采样作基准；将苦参水提液均匀喷涂在苦参水提液区，作用10 min，以同样方法进行消毒后采样。分别将消毒前后采样棉拭采样端剪入5 mL中和剂试管内,活菌计数，观察杀菌效果。

2 结果与分析

2.1 中和剂的考察试验

经检测，用2 g/L硫代硫酸钠可有效中和苦参水提液的杀菌作用，中和剂及中和产物对受试菌及培养基均无影响(见表1)。

表1 消毒剂的中和剂试验

2.2 苦参水提液的杀菌作用考察

采用悬液定量杀菌试验，考察苦参水提液对S.aureusATCC 6538、E.coli8099、B.subtilisATCC 9372、C.albicansATCC 10231和A.nigerATCC 16404的杀菌效果(见表2)。从表2数据可以看出，随着作用时间的增加，苦参水提液起到了显著的杀菌效果。

表2 苦参水提液的杀菌效果

2.3 模拟现场试验

用苦参水提液进行模拟现场试验。试验结果表明，苦参水提液对E.coli8099悬液作用10 min，杀菌率为87.59%。说明苦参水提液具有明显的杀菌作用。

3 讨 论

目前市场上所使用的消毒剂一般都是化学消毒剂, 如醋酸氯己定、过氧乙酸、二氧化氯、甲醛等，虽然杀菌效果显著，但都存在一定的缺陷，如具有刺激性气味、腐蚀性强等。中草药消毒剂对环境无污染、无刺激性、使用安全、无副作用、气味芳香，近几年来颇受关注，在其研制方面取得了很大进展，在剂型上也越来越先进。但中药消毒剂也存在着一些不足, 如提取工艺复杂、费用过高、效果不够稳定等，仍需进一步的探讨和改进[4-5]。

本课题组对苦参水提液的杀菌消毒效果进行了实验室研究。研究发现，苦参水提液对某些细菌(S.aureusATCC 6538、E.coli8099)、细菌芽胞(B.subtilisATCC 9372)，某些酵母菌和曲霉菌(C.albicansATCC 10231、A.ninerATCC 16404)均起到了显著的杀菌效果，为合理开发新型苦参复配消毒产品提供了理论依据。

[1] 王瑞君.几种中草药对金黄色葡萄球菌体外抑制作用的研究[J].现代食品科技，2009，25(9)：1104-1106.

[2] 胡仁火.五种中药提取液对细菌作用效果初探[J].咸宁学院学报，2006，26(6)：133-135.

[3] 卫生部卫生法制与监督司.消毒技术规范[S].北京，中华人民共和国卫生部，2002：9-200.

[4] 孙贵豫，许吟，杨怀.对母婴病房空气消毒方法结果比较[J].护士进修杂志，1996，11(5)：43-45.

[5] 高慧，张思超.中药消毒剂研究现状[J].山东中医药大学学报，2004，28(6)：476-478.

Germicidal Efficacy of the Sophora flavescens Aqueous Extract

CHEN Yu, XU Wei

(Schl.ofLifeSci. &Biopharm.,ShenyangPharm.Univ.,Shenyang110016)

The germicidal efficacy of theSophoraflavescensaqueous extract (SFAE) was studied using suspension quantitative germicidal test in the laboratory. It was found that SFAE had obvious germicidal efficacy againstStaphylococcusaureusATCC 6538,E.coli8099,BacillussubtilisATCC 9372,CanidiaalbicansATCC 10231 andAspergilliusnigerATCC 16404. On-the-spot simulation test, the SFAE had obvious germicidal efficacy.

SophoraFlavescens; disinfectant; suspension quantitative germicidal test

陈羽 男，硕士，讲师。主要从事微生物制药及消毒剂的杀菌消毒研究。E-mail:chenyu0208303@126.com

* 通讯作者。女，博士，教授，硕士生导师。主要从事微生物制药及微生物转化生物活性物质的研究。E-mail:gzweishengwu@126.com

2013-12-18；

2014-02-25

Q815

B

1005-7021(2015)04-0110-03

10.3969/j.issn.1005-7021.2015.04.020