养殖场有机废弃物处理机处理病害生猪的生物安全评估

曾中华

（漳州市动物疫病预防控制中心，福建漳州 363000）

养殖场有机废弃物处理机处理病害生猪的生物安全评估

曾中华

（漳州市动物疫病预防控制中心，福建漳州 363000）

为做好畜禽养殖场有机废弃物处理机处理病害生猪的生物安全评估，对处理前原料、处理后成品和冷凝水开展4种病毒、2种细菌和蛔虫卵检测，评估处理机的生物安全水平。结果表明，在原料中检出核酸阳性猪瘟病毒1批次、蓝耳病病毒13批次、伪狂犬病毒3批次、圆环病毒12批次；在经处理过的材料中未检出上述4种病毒和沙门氏杆菌，每克成品中的大肠杆菌最大可能数小于3个，蛔虫卵死亡率超过97%，符合有机肥行业标准；在冷凝水中未检出上述4种病毒、沙门氏杆菌和蛔虫卵，每毫升冷凝水中大肠杆菌最大可能数小于3个。综合分析，畜禽养殖场有机废弃物处理机（TY-FCW-26型）处理病害生猪，生物安全有保障，能够实现无害化处理和资源化利用。

病害生猪；畜禽养殖场有机废弃物处理机；病毒；细菌；蛔虫卵

病死猪的无害化处理已引起社会的广泛关注。为构建病死猪无害化处理和监管的长效机制，防止动物疫病扩散蔓延，保障畜牧业健康发展，保障猪肉产品质量和公共卫生安全，福建漳州市动物疫病预防控制中心与漳州市天洋机械有限公司联合研制出畜禽养殖场有机废弃物处理机（TY-FCW-26型），并构建了病害生猪和病害生猪产品处理技术和管理模式。病害生猪及其产品经畜禽养殖场有机废弃物处理机切割、粉碎、加温、发酵、灭菌、烘干等“六道”工序处理，24h后生产出高档有机肥料，实现了资源循环利用，成为漳州市无害化处理的主要模式。本研究随机选择4家使用单位，每家选择2台处理机，每台2批次，对处理前原料、处理后成品和冷凝水的部分细菌、病毒和蛔虫卵进行检测，评估处理机的生物安全水平。

1 仪器与材料

病害生猪：芗城区天宝镇正元农村专业合作社、龙海市益民农业科技有限公司、南靖县禾益畜禽废弃物集中处理场、南靖县牧益畜禽无害化处理场等4家使用单位提供；畜禽养殖场有机废弃物处理机：漳州市天洋机械有限公司生产，型号TY-FCW-26型；荧光定量PCR扩增仪：凯杰生物技术有限公司生产；光学显微镜：奥林巴斯（中国）有限公司生产；大肠杆菌标准菌株：中国兽医药品监察所提供；猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测试剂盒（批号：PRRS20140217P）、猪瘟病毒通用型RT-PCR检测试剂盒（批号：CSF20140114P）、猪伪狂犬病毒PCR检测试剂盒（批号：PR20140218P）、猪圆环病毒检测试剂盒（批号：PC20140121P）：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司生产。

2 实验方法

2.1 模拟试验

选取4头体重25kg以上的病害生猪，采集颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、扁桃体等组织，置于已灭菌的采样杯中；将剖检的4头病害生猪和另外1000kg病害生猪及500kg谷糠，加入处理机料槽内，启动处理机，按国家标准GB/T 6679-2003《固体化工产品采样通则》于运行后4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h各采样500g，混合均匀后自然晾干，置于已灭菌的采样袋中，冷链送往实验室检测。

2.2 处理前原料的采集

在4家畜禽养殖场有机废弃物处理机使用单位，每家选择2台处理机，每台2批次，每批次选取4头体重25kg以上的病害生猪，采集颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、扁桃体等组织，置于已灭菌的采样杯中，冷链送往实验室检测。

2.3 处理后成品采样

将每批次剖检的4头病害生猪和另外1000kg病害生猪及500kg谷糠，加入处理机料槽内，启动处理机，设备自动运行24h后停机，按国家标准GB/T 6679-2003《固体化工产品采样通则》进行采样，每台每批次无菌采集出料初始、出料中期、出料后期三个点的处理后成品各500g，混合均匀后自然晾干，置于已灭菌的采样袋中，冷链送往实验室检测。

2.4 冷凝水采样

每台每批次用灭菌试管无菌采集处理机尾气的冷凝水20mL，冷链送往实验室检测。

2.5 病毒、细菌和虫卵检测

2.5.1 四种病毒的检测。按照4种病毒的检测试剂盒说明书进行检测。

2.5.2 大肠杆菌MPN计数。按照国家标准GB/T 19524.1-2004《肥料中粪大肠菌群的测定》进行检测。

2.5.3 沙门氏菌的检测。按照农业标准NY/T 550-2002《动物和动物产品沙门氏菌检测方法》进行检测。

2.5.4 蛔虫卵死亡率的测定。按照国家标准GB/T 19524.2-2004《肥料中蛔虫卵死亡率的测定》进行检测。

3 实验结果

3.1 从调出的温度记录看，在24h工作时间内处理机的温度均在设定的范围内，可以满足工作需求。

3.2 处理机运行12h后4种病毒均已完全灭活（具体见表1）。

表1 模拟试验结果

3.3 16批次的原料中检出核酸阳性猪瘟病毒1批次、蓝耳病病毒13批次、伪狂犬病毒3批次、圆环病毒12批次 ；成品和冷凝水中未检出4种病毒（具体见表2、图1-8）。

表2 原料中4种病毒PCR检测结果

图1 PCR电泳图（样品编号为16、19、22的样品检出蓝耳病毒核酸阳性）

图2 PCR电泳图（样品编号为19的样品检出猪瘟核酸阳性）

图3 PCR电泳图（样品编号为1、4、13、25、28、31、34、37的样品检出圆环病毒核酸阳性）

图4 PCR电泳图（样品编号为16、19、22的样品检出圆环病毒核酸阳性）

图5 PCR电泳图（样品编号为10的样品检出圆环病毒核酸阳性）

图6 PCR电泳图（样品编号为1、4、25、28、31、34的样品检出蓝耳病毒核酸阳性）

图7 PCR电泳图（样品编号为7、10、40、43的样品检出蓝耳病毒核酸阳性）

图8 PCR电泳图（样品编号为16、19、22的样品检出伪狂犬病毒核酸阳性）

3.4 16批次成品中，均未检出沙门氏菌，大肠杆菌MPN数均小于3个，蛔虫卵死亡率都超过95%，符合NY 884-2012《生物有机肥》的行业标准；冷凝水中，16批次均未检出沙门氏菌与蛔虫卵（具体见表3）。

对试验结果进行单因素方差分析，成品、冷凝水与原料之间的因变量阳性率均有显著性差异（0.01＜P＜0.05）。

对试验结果进行单因素方差分析，成品与冷凝水之间的大肠杆菌MPN数差异不显著（P＞0.05）；镜检总卵数与镜检活卵数之间的蛔虫卵死亡率差异极显著（P＜0.01）。

表3 成品中2种细菌与蛔虫卵死亡率检测结果

4 分析讨论

4.1 畜禽养殖场有机废弃物处理机结合可换式动刀定刀切割粉碎搅拌技术、高温发酵菌分解技术、电加热导热油技术、气水分离技术、微波灭菌干燥技术，达到了彻底杀灭有害病原微生物、加热均匀、节能省电、废气废水零排放要求，实现了病害生猪及其产品的机械化、工厂化、无害化处理与资源化利用的目的，具有创新性、先进性和新颖性。

4.2 每批次选取4头体重25kg以上的病害生猪，采集颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、扁桃体等组织检测4种生猪常见病毒，检测结果虽然无法代表本批次病害生猪携带病毒情况，但不影响对实验结果的判断。

4.3 4种病毒的PCR检测结果中，16批次原料中有15批次检出病毒核酸阳性，而在成品和冷凝水中均未检测出4种病毒，说明畜禽养殖场有机废弃物处理机能够完全杀灭病害生猪携带的4种病毒，达到了无害化处理的目的。

4.4 2种细菌与蛔虫卵死亡率检测结果中，未检测出沙门氏菌，大肠杆菌MPN数小于3个，蛔虫

卵死亡率均大于95%，说明畜禽养殖场有机废弃物处理机能够杀灭病害生猪中绝大部分的大肠杆菌与蛔虫卵，成品达到有机肥行业标准。

5 结论

畜禽养殖场有机废弃物处理机（TY-FCW-26型）能够有效杀灭猪瘟病毒、圆环病毒、伪狂犬病毒、蓝耳病毒及大肠杆菌、沙门氏菌和蛔虫卵，生物安全水平高，处理后的成品符合高档有机肥料行业标准，实现了病害生猪及其产品无害化处理和资源化处理。

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Biosafety Assessment of Organic Waste Processor for Treatment of Materials from Diseased Swine in Livestock Farms

Zeng Zhonghua
（Zhangzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Zhangzhou，Fujian 363000）

To assess biosafety of the organic waste processor for treatment of materials from diseased swine in livestock farms，samples of pre-process and processed materials and condensed water were detected for 4 viruses，2 bacteria and ascarid eggs. The results showed that CSFV-RNA，PRRSV-RNA，PRV-RNA and PCV-RNA were detected respectively in 1，13，3 and 12 batches of the pre-processed materials；none of the said 4 virus-RNAs and no Salmonella were detected in all the processed materials；MPN of E. coli was less than 3/g processed material and ascarid egg mortality was greater than 97%，which meet the organic fertilizer standard; none of the said 4 virus-RNAs，no Salmonella and ascarid egg were detected in condensed water and MPN of E. coli was less than 3/mL condensed water. Comprehensive analysis suggested that biosafety of the organic waste processor（Type TY-FCW-26）for treatment of materials from diseased swine in livestock farms could be guaranteed，and biosafety disposal and resource utilization could be expectedly realized.

diseased swine；organic waste processor；virus；bacteria；ascaris egg

S851.23 文献识别码：A

1005-944X（2015）06-0018-05

2013年漳州市第一批科技计划项目（ZZ2013070）