抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体提取方法探究

张桂荣王振辉刘玉梅刘 军

(1.吉林农业科技学院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松树镇畜牧站,吉林吉林 134704; 3.吉林正业生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体提取方法探究

张桂荣1王振辉1刘玉梅2刘 军3

(1.吉林农业科技学院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松树镇畜牧站,吉林吉林 134704; 3.吉林正业生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

为了探究抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体的最佳提取方法。采用泊洛沙姆法卵黄抗体的脱脂方法试验。通过对浓度、蛋白质含量、效价等结果进行比较。试验结果显示:由泊洛沙姆作为脂肪沉淀剂,其泊洛沙姆浓度为1.2%、辛酸浓度为0.2%时制得的抗体物理性状好,抗体收率最高,效价高,抗体效价为1:64。

雏鸭病毒性肝炎;卵黄抗体;脱脂

1 方法

1.1 免疫鸡蛋收集与蛋黄的分离

取收集的鸡蛋，浸入42℃的0. 1%新洁尔灭水溶液中消毒15 min；随后将鸡蛋浸入温度为95℃以上的水中消毒5 s，取出后于无菌条件下晾干或吹干；打蛋分离蛋清与卵黄，充分除去蛋清和卵黄系膜，将卵黄收集于一容器中，搅拌均匀，然后分别装在三个容器内。

1.2 泊洛沙姆法雏鸭病毒性肝炎卵黄抗体去脂试验[1]

泊洛沙姆法提卵黄抗体步骤

1.2.1 泊洛沙姆浓度的优化

分别取卵黄液20ml，用去离子水做4倍稀释，加入泊洛沙姆，使其终浓度分别为0.6%、0.8%、1%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%。静置后用纱布过滤，取上清。

1.2.2 pH值的优化

分别取卵黄液20ml，用去离子水做4倍稀释，加入泊洛沙姆，使其终浓度为上步所得的最佳浓度。用稀盐酸调pH值，使pH值分别为5.2、5.7、6.2、6.7、7.2、7.7。静置后用纱布过滤，取上清。

1.2.3 辛酸浓度的优化

分别取卵黄液20ml，用去离子水做4倍稀释，加入泊洛沙姆，使其终浓度为上步所得的最佳浓度和pH。静置后用纱布过滤，取上清，加入不同浓度辛酸，静置48h。此后去除上层脂肪层，将粗提的抗体液用微孔滤器过滤至澄清。

1.3 脱脂抗体的效价测定[2]

采用琼脂扩散试验测定抗体效价。将1%琼脂溶于100ml的8%NaCl溶液的适量稀释后的抗体与等量琼脂混匀加入约0.01%的硫氯汞钠盐作为防腐剂，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔径3mm，孔间距10mm，孔中加入抗原，每孔10μl，放置湿盒中，37℃温箱，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。24～48h后观察结果。

1.4 蛋白质浓度的测定

将制得的抗体液用饱和硫酸铵法沉淀蛋白后，各组试验样品以同样的稀释倍数稀释，用ND-1000型紫外分光光度计测定卵黄抗体的蛋白含量。

2 试验结果与分析

2.1 泊洛沙姆法的脱脂及效价测定结果

2.1.1 泊洛沙姆浓度的结果

表1 不同泊洛沙姆浓度的结果

表1可见，随着泊洛沙姆浓度的增大，卵黄抗体水溶液逐渐澄清，颜色逐渐变淡，蛋白质浓度逐渐降低。1%～1.4%为不影响效价的浓度范围，当泊洛沙姆浓度增加到1.6%及以上时，抗体效价开始降低。综合考虑，故选1.4%的浓度为宜。

2.1.2 泊洛沙姆沉淀法沉淀离心条件的结果

表2 不同离心条件的结果

表2表明，不同离心速度离心结果与不离心直接纱布过滤处理结果无明显区别。泊洛沙姆的沉淀脂肪效果很好，不用离心处理即可得到清澈透明。用泊洛沙姆提取卵黄抗体可以简化生产工艺。

2.1.3 辛酸浓度的结果

表3 不同辛酸浓度的结果

表3表明，随着辛酸浓度的增大，蛋白质浓度逐渐降低，辛酸浓度为0.2%时抗体效价为1：64。结果表明1.4%的泊洛沙姆浓度和0.2%的辛酸浓度是最合适的。

3 讨论

脂类约占卵黄总量的90%，大量脂类的存在导致卵黄粘稠度很高，未经去脂的高免卵黄液，容易堵塞注器，注射到动物体内吸收慢，在注射部位易滞留而影响肉的品质，并有医源性感染的危险。为避免上述缺点，泊洛沙姆可以使卵黄脂类迅速沉淀，提取的抗体液澄清，抗体效价降低较少，可以提高卵黄脂类的分离

速度，简化工艺流程。其缺点是价格相对稍贵；泊洛沙姆是无毒无害的药用辅料，所以本试验最终确定由更为安全的泊洛沙姆代替PEG-6000作为脂肪沉淀剂。

4 结论

采用泊洛沙姆法卵黄抗体的脱脂方法，可获得稳定效价、稳定性状的脱脂抗体液。综合比较，浓度1.2%的泊洛沙姆抗体效价结果最佳，抗体损失量少，制备工艺简单，更适合于工业进一步扩大生产研究。

[1] 闵嗣璠，李彬，万思平，等.PEG6000用于卵黄抗体提取条件初探[J].食品科学，2007，（2）：8.

[2] 徐锡殿，臧福学.泊洛沙姆对鸡卵黄脱脂作用的研究[J].山东家鸡，2004，（2）：10-11.

张桂荣（1962—），女，吉林省公主岭市人，副教授，硕士，预防兽医学方向。

此篇文章是教育厅2012年项目论文 论文项目基金编号：吉教科合字[201]