鼻渊通窍颗粒质量鉴定的实验研究*

潘凤群

(广东药学院 中药学院，广东 广州510006)

引言

中成药鼻渊通窍颗粒是由十四味中药包括麻黄、苍耳子、野菊花、白芷、连翘、茯苓，甘草等组成．传统用药依其疏风清热、宣塞通窍、治疗鼻窦炎等功效，广泛应用于急慢性鼻炎、鼻窦炎等外邪犯肺证的治疗．

鼻渊通窍颗粒的药理药效作用已被大量相关报道研究证实．张志亮［1］等对本颗粒剂对急性鼻窦炎的疗效进行了观察，得出鼻渊通窍颗粒配合抗生素来治疗急性鼻窦炎的疗效确切，用药安全的结论;张一航等对鼻渊通窍颗粒的临床研究主要集中在其治疗儿童慢性鼻窦炎的功效上，临床研究结果表明鼻渊通窍颗粒具有显著的治疗儿童慢性鼻窦炎的疗效［2］．现有的研究报告中已有关于鼻渊通窍颗粒中盐酸麻黄碱［3］及黄芩苷［4］的含量测定项目，郝光启等在质量标准的改进中增加了辛夷与丹参的薄层鉴别，并将盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的总量测定由原来的紫外分光光度法(UV)改为高效液相色谱法(HPLC)，方法学验证表明改进的含量测定方法更加方便、可靠，测定结果更加准确［5］．

野菊花为组成鼻渊通窍颗粒的一味中药，已有相关研究报告表明，野菊花具有抗病原微生物、抗炎免疫、降压和保护心血管系统等作用［6］，主要含有萜类、挥发油、多糖、黄酮等众多成分，其天然活性成分为蒙花苷［7］．尚未有报道以蒙花苷作为鼻渊通窍颗粒的质量控制指标，因此，笔者对具有药效活性的蒙花苷的含量测定进行研究．此外，还研究了野菊花与苍耳子的薄层鉴别．结果表明，所建立的薄层鉴别及蒙花苷含量测定方法简便、专属性较强、重复性良好，样品的测定结果准确，适于作为鼻渊通窍颗粒质量标准的补充指标．

1 实验仪器、药品和材料

高效液相色谱仪系统:仪器岛津LC－20 AT泵、SPD－M20A检测器、自动进样器(SIL－HTC)、柱温箱(CTO－20AC)．Merck硅胶G薄层色谱板，水为超纯水(高效液相色谱法专用)，乙腈为色谱纯，甲醇等其他试剂均为分析纯．

野菊花的对照药材(批号:120995－201105)，苍耳子对照药材(批号:121168－201005)来源于中国药品生物制品检定院;蒙花苷对照品(111528－201107)购于中国药品生物制品检定所．

2 实验方法与结果

2．1 野菊花的鉴别［8］

取两个批次的鼻渊通窍颗粒各1．5 g，研细，精确加入乙醇45 mL，20 min超声处理，将超声过的溶液滤过，将滤液蒸干，以水10 mL溶解残渣，过聚酰胺柱(3 g，14～30目)，用水50 mL分次洗脱，将水液弃去，用乙醇30 mL分次洗脱，并收集乙醇洗脱液，将洗脱液水浴蒸干，用乙醇1 mL将残渣完全溶解，作为供试品溶液．称取野菊花对照药材1 g置于具塞锥形瓶中，加入无水乙醇30 mL，经过20 min超声处理，滤过，将滤液蒸干，用乙醇1 mL将残渣完全溶解，以此作为野菊花对照药材溶液．取野菊花阴性试样5 g，用与供试品溶液相同的制备方法制备，作为野菊花阴性对照溶液．照薄层色谱法实验，吸取上述制备好的供试品溶液、阴性对照品溶液各5μL及野菊花对照药材溶液1μL，分别依次点于同一块硅胶G薄层色谱板上，将乙酸乙酯－水－甲醇(体积比为100∶13∶17)［9］作为展开剂，展开，取出，常温晾干，置365 nm紫外灯下观察检视，所得到的供试品色谱图中，在与对照药材相对应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照试液处则无此斑点．

2．2 苍耳子的鉴别

取两个批次鼻渊通窍颗粒各1．5 g，研细，加乙醇30 mL，水浴回流1 h，用定性滤纸滤过，将滤液蒸干，残渣用水10 mL使其完全溶解，滤过，将滤液通过经过处理的D－101型大孔树脂柱，用30 mL水分次洗脱，弃去水液，再用50 mL体积分数20%的乙醇分次洗脱，将20%的洗脱液完全收集，放置于水浴浓缩至20 mL，室温放冷，分别用水饱和正丁醇提取2次，每次20 mL，并合并正丁醇液，将正丁醇液蒸干，残渣以0．5 mL乙醇使其溶解，作为供试品溶液．另取苍耳子对照药材1 g，加入乙醇回流1 h，同法制成为对照药材溶液．再取苍耳子阴性对照样品5 g，制备方法同供试品，制备阴性对照品溶液．照薄层色谱法实验，吸取上述制备的供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL及苍耳子的对照药材溶液4μL，分别依次点于同一块硅胶G薄层色谱板上，将乙酸乙酯－甲酸－丁酮－水(体积比为6∶1∶2∶1)作为展开剂［10］，在展开缸中展开，取出，室温晾干，置氨蒸汽中氨熏至斑点清晰可见，在日光下检视．在供试样品、对照药材、阴性对照薄层色谱图中，在相应的位置处样品与对照药材具有相同颜色的斑点，而阴性对照溶液相对应位置处无此斑点，证明阴性无干扰．

2．3 蒙花苷含量测定

2．3．1 色谱条件

色谱柱为Thermo ODS－2 hypers11 Dim(200 mm×4．6 mm，5μm);流动相为乙腈－水(体积比为30∶70);检测波长设定为334 nm;流速为1．0 mL·min－1;柱温为25℃;进样量为10μL．

2．3．2 对照品溶液的制备

对照品1:精密称取蒙花苷对照品(质量分数86．7%)10．38 mg，置于200 mL具塞容量瓶中，加入适量的甲醇溶解，定容，摇匀，即得蒙花苷对照品溶液，其质量浓度为0．0450 mg/mL．

对照品2:精密称定蒙花苷对照品(质量分数为86．7%)18．64 mg，置于250 mL具塞容量瓶中，加入适量的甲醇溶解，定容，摇匀，即得蒙花苷对照品溶液，其质量浓度为0．05875 mg/mL．

2．3．3 供试品溶液的制备

取鼻渊通窍颗粒0．25 g(批号120805)，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，摇匀，室温环境中称定重量，30 min超声处理，室温放冷，再一次称定重量，用甲醇补充减失的重量并摇匀，滤过，收集续滤液作为供试品溶液．

2．3．4 阴性对照溶液的制备

分别取适量鼻渊通窍颗粒和野菊花阴性对照样品，用与“2．2．2”条下相同的供试品溶液的制备方法制备蒙花苷阴性的对照溶液．

2．3．5 专属性

在上述色谱条件下，分别取蒙花苷对照品溶液、鼻渊通窍颗粒蒙花苷阴性对照溶液、鼻渊通窍颗粒供试品溶液各10μL，依次注入高效液相色谱仪，记录40 min内的色谱图，结果显示，在与蒙花苷对照品相同保留时间处，阴性对照溶液未见色谱峰显示，故认为阴性无干扰．

2．3．6 精密度试验考察

吸取蒙花苷对照品溶液10μL，按2．1条下的色谱条件连续进样6次，分别记录6个色谱峰峰面积，经计算，6次进样蒙花苷的色谱峰峰面积的标准差(RSD)为0．5%．

2．3．7 线性关系考察

分别精密吸取蒙花苷对照品(质量浓度为0．045 0 mg/mL)溶液1，5，7，10，15μL注入高效液相色谱仪中，记录40 min内的色谱图，记录蒙花苷峰的峰面积，以进样量为x，峰面积为y，进行线性回归，得蒙花苷线性回归方程(n=5)为:y=12357x－132．7，r2=0．999 9，结果表明蒙花苷在0．045 0～0．614 9μg范围内具有良好的线性关系．

2．3．8 重复性试验

精密称取鼻渊通窍颗粒同一样品6份，每份0．25 g，分别按2．2．2条下方法制备供试品溶液，按2．1条下的色谱条件进行分析，记录色谱峰峰面积，计算蒙花苷含量，结果鼻渊通窍颗粒蒙花苷的平均含量为2．059 mg·g－1，RSD为4．2%．

2．3．9 稳定性试验考察

取同一供试品溶液，按2．1条下色谱条件，放置于室温环境中，分别在0，4，6，9，15，18，24 h测定，记录40 min内的薄层色谱图，记录色谱峰峰面积，鼻渊通窍颗粒中蒙花苷色谱峰面积的RSD为3．4%，表明在24 h内，供试品溶液是稳定的．

2．3．10 蒙花苷回收率试验

取已知含量的鼻渊通窍颗粒，研细，分别取0．1，0．25，0．5 g各三份，精密称定，分别加入0．058 75 mg·mL－1的蒙花苷对照品溶液5，10，20 mL，按“2．2．2”条下方法制备溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录40 min内的色谱图，记录色谱峰峰面积并计算回收率．结果:低、中、高蒙花苷质量浓度回收率(n=3)分别为100．1%(RSD=3．2%)、101．0%(RSD=3．3%)、102．9%(RSD=2．4%)，平均回收率(n=9)为101．3%．

2．3．11 样品含量测定

分别取5个批号的鼻渊通窍颗粒样品，精密称定，按2．2条下方法制备供试品溶液，按2．1条下色谱条件，每个溶液进样1次，测定峰面积，并用外标法计算样品中蒙花苷的含量，结果见表1．

表1 鼻渊通窍颗粒样品测定结果

2．3．12 耐用性试验

通过对比不同流动相比例及更换Sepax bio－C18(250 mm×4．6 mm，5μm)色谱柱考察所建立的含量测定方法的耐用性，结果发现柱效和分离度无明显变化，说明本法耐用性较好．

3 讨论

3．1 确定薄层色谱法(TLC)的鉴别条件

本实验对于鼻渊通窍颗粒中的苍耳子、野菊花的薄层鉴别方法，采用2010版《中国药典》中的方法，而对提取方法及薄层展开条件改进，经过方法学的验证，最终确定了本制剂中两种药材的薄层鉴别方法．

3．2 供试品溶液的制备

在提取溶剂的选择上，本文分别考察了水、甲醇及体积分数分别75%、50%、30%的甲醇5种溶剂，结果表明甲醇的提取效果较好．最终确定25 mL甲醇，每次超声提取30min为最佳提取方法．

3．3 流动相的选择

分别考察了以乙腈－冰醋酸溶液(体积比为20∶80)［11］、甲醇－冰醋酸［12］(体积比为42∶58)、乙腈－水(体积比为30∶70)［13］等流动相系统，结果选择以乙腈－水(体积比为30∶70)所得到的色谱图基线较为平稳，分离效果好．

4 结语

本研究中，制剂中苍耳子、野菊花通过薄层色谱法进行的薄层定性鉴别，对鼻渊通窍颗粒蒙花苷的含量采用HPLC进行的测定，具有专属性强，操作简便，结果准确等优点，为鼻渊通窍颗粒的综合质量控制提供了科学补充方法．

［1］张志亮，曹冬梅，侯梦霞，等．鼻渊通窍颗粒治疗急性鼻窦炎的疗效观察［J］．现代中西医结合杂志，2011(21):2652－2653．

［2］张一航．鼻渊通窍颗粒治疗儿童慢性鼻窦炎临床观察［J］．中国误诊学杂志，2008(28):6852－6853．

［3］吕维红．HPLC测定鼻渊通窍颗粒药物中盐酸麻黄碱含量的研究［J］．河北医药，2013(18):2852－2853

［4］吴仲玉，彭连共．HPLC法测定鼻渊通窍颗粒中的黄芩苷含量［J］．海峡药学，2014(3):79－81．

［5］郝光启，李进启，周宗仪，等．鼻渊通窍颗粒质量标准的改进［J］．中国药师，2010(8):1118－1120．

［6］吴钉红，杨立伟，苏薇薇．野菊花化学成分及药理研究进展［J］．中药材，2004(2):142－144．

［7］柴红玲，吴林森，金晓春．野菊花天然活性成分蒙花苷的提取［J］．湖北农业科学，2011(8):1663－1665．

［8］吴爱銮，杨庚生，程永红，等．鼻舒适片的质量标准研究［J］．现代中药研究与实践，2006(6):37－39．

［9］陈珍贵，朱丽．保和丸(浓缩丸)质量标准研究［J］．湖南中医药导报，2003(1):80－81．

［10］尹靖先，邓晓鸿，车晓彦，等．苍耳子的薄层层析鉴别研究［J］．华西药学杂志，2005(1):67－69．

［11］叶慧．HPLC测定复方瓜子金颗粒中蒙花苷的含量［J］．中国药师，2012(9):1356－1357．

［12］陈翠英，袁子民，程岚，等．HPLC法测定珍菊降压片中蒙花苷含量［J］．辽宁中医杂志，2007(4):501－502．

［13］国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)［Z］．北京:中国医药科技出版社，2010．