血清蛋白电泳在肝移植术后功能及并发症监测中的应用

陈立 肖萍 赵志恒 张维强 穆红

肝脏移植是治疗终末期肝病的有效手段。近年来，随着免疫抑制剂、外科技术和器官保存技术的快速发展，肝移植技术也正逐渐走向成熟。研究［1，2］表明，肝移植术后的移植肝功能不良及并发症是进行再次移植甚至死亡的重要原因之一。目前，临床对肝移植术后移植肝脏的监测的实验室指标主要依赖于生物化学和免疫学检测方法所覆盖的肝功能和肝损伤的常规项目，而选择用血清蛋白电泳监测肝功能恢复状况及并发症发生的相关报道甚少。由于血清蛋白电泳检测方法的特点是可以将所有血清蛋白组分无疏漏、一次性地显现在图谱上，而血清蛋白大部分经肝脏合成和分解，极少部分为其他系统代谢，因此，采用蛋白电泳分析血清蛋白各组分的表达可不同程度地反映移植肝脏的功能恢复及机体应激等信息。本文研究通过采用血清蛋白电泳的方法检测肝脏移植患者首次就诊及移植后约1年时血清蛋白各组分，对血清蛋白电泳用于肝脏移植术后肝脏功能恢复及并发症出现的监测价值做一分析，总结如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2013年3月至2013年6月期间因肝脏功能衰竭而接受肝移植手术的患者33例。其中男25例，女8例，年龄38～56岁。原发病：乙肝肝硬化21例，丙肝肝硬化7例，酒精性肝硬化3例，原发性肝癌2例。

1.2 标本采集 分别采集患者首次就诊及肝移植术后10－14个月复诊时空腹静脉血3 ml。血标本室温静置1－2 h后，以离心半径15 cm，3000 r／min离心10 min分离血清，用于血清蛋白电泳，检测各蛋白组分并进行图谱分析。

1.3 主要仪器与试剂 采用法国Sebia公司HYDRASYS电泳系统及原装配套试剂。琼脂糖凝胶：含琼脂糖 0.8 g／L，pH＝9.1～9.3 tris－巴比妥缓冲液；缓冲液：pH＝8.9～9.5 tris－巴比妥缓冲液；氨基黑染液：pH＝2的4 g／L氨基黑溶液；10%的乙酸；脱色液：0.1%冰醋酸。

1.4 方法 开机预热10 min，点样加血清10μl，电泳（20℃，电压与时间的乘积33 Vh），染色、脱色、干燥步骤按照仪器所设HYDRAGEL 7 PROTEIN程序自动执行，570 nm扫描。

1.5 电泳结果生物参考区间 白蛋白：60.0%～71.0% ；α1：1.4%～2.9% ；α2：7.0%～11.0% ；β：8.0%～13.0%；γ：9.0%～16.0%。

1.6 统计学处理 采用SPSS12.0统计软件对数据进行统计学分析，移植前后血清各蛋白组分的比较采用配对t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肝脏衰竭患者肝移植前后血清蛋白电泳各蛋白组分含量结果比较 肝脏移植后白蛋白组分含量明显高于移植前，而γ球蛋白组分含量明显低于移植前，且差异均有统计学意义（P均＜0.05）；α1、α2、β球蛋白组分含量移植前后差异均无统计学意义（P均＞0.05），见表1。

2.2 肝脏衰竭患者肝移植前后血清蛋白电泳各组分含量及峰形异常分析 移植前有9例谱带呈现β－γ桥；移植后γ球蛋白含量异常例数明显低于移植前，另有2例患者移植后出现寡克隆带，见表2。

3 讨论

表1 肝脏衰竭患者肝移植前后血清蛋白电泳结果比较（%）

表2 肝脏衰竭患者肝移植前后血清蛋白电泳各组分含量及蛋白带分析

近年来，国内外有关肝移植术后肝功能恢复及并发症的临床研究较为广泛，但通过实验室血清蛋白电泳组分分析的方法研究肝移植预后的文章却为少见［1－4］。李彦等［5，6］发表的肝移植患者血清蛋白电泳组分比较的文章主要是针对肝移植术后出现免疫排斥反应时血清低丰度蛋白表达的变化，而本文研究通过血清蛋白电泳来分析肝移植术前、术后蛋白组分含量变化及异常图谱，从而了解肝脏功能的恢复情况，并通过观察急性时相反应蛋白及寡克隆蛋白成分分析术后并发症的出现。本文研究所采用的电泳检测方法具有可同时、全面系统的分析血清蛋白各组分的特点，结果分析如下。

3.1 白蛋白组分变化 白蛋白带是血清蛋白电泳唯一的单组份蛋白带，由肝实质细胞合成，相对分子质量为 66.4×103，等电点 4～5.8，是肝移植术后监测移植肝脏功能的良好指标。李彦等［5，6］的双向电泳研究为防止低丰度蛋白成分被掩盖，去除了白蛋白后进行电泳，导致不能对肝脏合成白蛋白的功能进行分析。本文研究所采用的电泳方法中白蛋白峰的位置完全分离于其他组分的单克隆蛋白峰，不存在干扰及掩盖的问题。本文研究结果显示，移植后白蛋白含量显著高于移植前，且含量小于参考区间下线者由27例减少至6例，提示移植后肝脏合成白蛋白功能恢复良好。

3.2 α、β区带蛋白组分变化分析 α1区带球蛋白组分包括：（1）α1－抗胰蛋白酶，是一种具有蛋白酶抑制作用的急性时相反应蛋白，相对分子质量为55×103，等电点 4.8。（2）α1－酸性糖蛋白，相对分子质量为 40×103，等电点 2.7～3.5，是主要的急性时相反应蛋白。（3）α1－脂蛋白，相对分子质量 200×103，在肝功能严重障碍时明显降低。（4）甲胎蛋白，原发性肝癌特异性蛋白。α2区带球蛋白组分：（1）结合珠蛋白，在血浆中与游离的血红蛋白结合，是一种急性时相反应蛋白，相对分子质量为85～400×103，等电点4.1。（2）α2－巨球蛋白，是血浆中相对分子质量最大的蛋白质，由肝细胞与单核巨噬细胞系统合成，相对分子质量为 625～800×103，等电点 5.4。（3）铜蓝蛋白：是一种含铜的α2糖蛋白，相对分子质量为120～160×103，等电点4.4，也属于一种急性时相反应蛋白。β区带蛋白组分：（1）转铁蛋白是血清中主要的含铁蛋白质，相对分子质量为77×103，等电点5.7。（2）血红素结合蛋白：相对分子质量为 57×103，和游离血红素有特异结合能力，是机体保存铁元素的一种方式。（3）β－脂蛋白：相对分子质量为 3000×103，由肝细胞合成，主要功能是运输脂类。（4）C3，C4：补体成分，属急性时相反应蛋白，肝脏疾病时由于肝细胞损害导致合成减少。（5）β2－微球蛋白，相对分子质量为 11.8×103，炎症及肿瘤时，浓度可升高。

临床研究［1－3］证实，肝移植后出现排异等急性并发症时机体可观察到基因和蛋白水平的表达变化。由上所述，α1、α2、β 区带蛋白组分主要是肝脏合成的时相反应蛋白，所以肝移植患者血清蛋白电泳α1、α2、β区的低相说明肝脏合成功能的衰竭，如移植后出现异常高相，则可提示急性排异反应或术后并发症的出现。本文研究结果显示，虽然表2中移植后α、β区带各组分含量异常例数较移植前均有所变化，但由表1可见，α、β区带各蛋白组分含量移植前后差异均无统计学意义，根据区带组分蛋白的主要临床意义分析可排除急性并发症的存在。

3.3 γ区蛋白组分的量、图谱形态变化分析 γ区带球蛋白组分：（1）IgG，抗体组分之一，相对分子质量 160×103，等电点 6.0～7.3。肝硬化时 IgG 弥散性增高。（2）IgA，抗体组分之一，相对分子质量 170×103，肝硬化时IgA明显升高。（3）IgM，抗体组分之一，相对分子质量 900×103，肝病初期 IgM 可增加。（4）C－反应蛋白：相对分子质量 120×103，等电点 6.2，是急性时相的敏感指标。

γ区的主要蛋白组分为经肝脏分解代谢的免疫球蛋白，当肝功能严重衰竭如肝硬化晚期时可出现β－γ桥。本文研究结果显示，移植前γ区蛋白组分含量明显高于移植后，且差异有统计学意义（P＜0.05），并且有9例出现 β－γ桥，移植后消失，提示移植后肝功能恢复良好。但是有2例移植后在均匀的γ区带出现寡克隆蛋白带，可提示患者在移植后出现淋巴系统的异常增生。移植后淋巴细胞增生性疾病是实体器官移植后一种少见的致命性并发症。20世纪90年代国外首先报道，随着移植人数的增加病例逐年增多，临床表现为非特异性，其发病机制与免疫抑制剂的使用、病毒感染有关，早期诊断及治疗有可能改善预后［3－6］。本文研究中出现的2例移植后寡克隆带患者，需进一步检查并加强血清蛋白电泳的监测，以明确诊断。

综上所述，分析肝脏移植患者移植前后血清蛋白电泳各组分变化具有监测移植肝脏合成功能恢复及是否出现移植后并发症的价值。

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